富硒乳酸菌发酵液及其制备方法和应用

本发明属于微生物领域，尤其涉及一种富硒乳酸菌发酵液及其制备方法和应用。

背景技术：

1、乳酸菌(lactic acid bacteria)是一类对宿主有益的活性微生物，大量栖居于动物肠道内，作为肠道环境中的优势菌群，具有改善肠道微生态环境、清除自由基、改善机体免疫功能、促进宿主健康的重要作用，还对某些疾病如心血管疾病、糖尿病等的预防和治疗存在积极作用。硒(se)是对人体健康非常重要的微量元素之一，也是具有重要生物活性的硒蛋白的重要组成部分。由于硒是人体内谷胱甘肽过氧化酶的重要组成部分，因此，硒与酶的活性密切相关。然而，缺硒能使心肌变性、坏死，硒能刺激免疫反应，可以提高机体的免疫能力，促进免疫抗体的生成。

2、近些年来，生物源补硒逐渐受到欢迎，简单、安全、环保、生物相容性强、应用领域广泛等一系列优点是无机硒补硒不具有的。乳酸菌作为有益菌在生物源补硒中十分受欢迎，能够被证实积累和转化硒，已经成为富硒的优良发酵载体。由于与硫元素具有相似的结构，进入乳酸菌细胞的硒被并入相关氨基酸中，用于合成重要的硒蛋白。无机硒经乳酸菌转化，不仅毒性有所降低，还提高了乳酸菌的益生功效。乳酸菌将富集的部分硒转化为菌体生命活动所需的有机硒，剩余部分转化为单质纳米硒。人与动物可以通过直接摄入富硒乳酸菌制品，在补充硒的同时实现保健双重功效。但是，不同乳酸菌对硒酸盐的耐受程度不同，需要进行富硒培养条件的优化，寻求最佳的富硒工艺至关重要。

3、现如今，人们通常都会选择见效速度较快的抗生素来抑制植物病原真菌生长的。但是抗生素类的频繁使用会出现耐药性、影响植物生长、造成环境污染等更多潜在危害。人们希望寻求更加绿色的抗真菌制剂。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是克服现有技术中的不足，提供了一种富硒乳酸菌发酵液及其制备方法和应用，采用简单、绿色、低廉的方式，使得无机硒更多地转化为有机硒与纳米硒，提高硒的利用率。其致力于向mrs培养基中加入一定量的亚硒酸钠，进行不同条件的单因素实验，进一步进行培养条件的正交实验优化，目的是提供一种富硒乳酸菌培养工艺的优化方法。同时，将最优工艺下的富硒菌体产物进行透射电镜观察合成纳米硒情况；利用最优富硒培养条件下的乳酸菌进行黄曲霉菌的抑制实验，寻找合适的抑菌浓度，并与主流制霉菌素进行抗黄曲霉菌比较，目的是寻求作为绿色抗真菌剂的可行性。

2、为了实现上述目的，本发明提供了一种富硒乳酸菌发酵液，所述富硒乳酸菌发酵液由德氏乳杆菌保加利亚亚种(lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)cicc6045经富硒培养基培养得到。德氏乳杆菌保加利亚亚种gdmcc保藏中心编号为gim1.155。

3、基于一个总的技术构思，本发明还提供了一种所述的富硒乳酸菌发酵液的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

4、s1、将德氏乳杆菌保加利亚亚种接种于mrs培养基中，扩增培养至对数期得到菌液；

5、s2、将所述菌液接种至含有亚硒酸钠的mrs培养基中进行富硒培养得到富硒乳酸菌发酵液。

6、上述的制备方法，进一步的，所述s1中所述扩增培养的温度为37℃，时间为6～8小时。

7、上述的制备方法，进一步的，所述s2中含有亚硒酸钠的mrs培养基，含硒浓度为6μg/ml～10μg/ml。

8、上述的制备方法，进一步的，所述s2中所述菌液的接种量为1v/v％～5v/v％。

9、上述的制备方法，进一步的，所述s2中所述富硒培养的温度为29℃～45℃；富硒培养的时间为6h～30h。

10、上述的制备方法，进一步的，所述s1和s2中mrs培养基ph为4～8。

11、上述的制备方法，进一步的，所述s2具体为：

12、s2-1、将含有8μg/ml亚硒酸钠的mrs培养基调节ph至6，

13、s2-2、将所述菌液接种至所述s2-1的mrs培养基中；

14、s2-3、在37℃下进行富硒培养30h得到富硒乳酸菌发酵液。

15、基于一个总的技术构思，本发明还提供了一种所述的富硒乳酸菌发酵液在抑制黄曲霉菌中的应用。

16、基于一个总的技术构思，本发明还提供了一种所述的富硒乳酸菌发酵液在防治玉米中黄曲霉菌中的应用。

17、与现有技术相比，本发明的优点在于：

18、(1)本发明提供了一种富硒乳酸菌发酵液，克服了不同乳酸菌富硒困难的难题，寻找到德氏乳杆菌保加利亚亚种cicc6045的富硒最佳培养条件，优化了德氏乳杆菌保加利亚亚种富硒的效果。

19、(2)本发明提供了一种富硒乳酸菌发酵液制备方法，培养方式与检测方式节约成本、简单、环保，高效；产物无毒，应用领域广泛，具有较高的生物利用价值与营养价值。

20、(3)本发明通过优化后的富硒乳酸菌进行体外抗黄曲霉菌的初步实验，发现了乳酸菌在含有低硒浓度下对黄曲霉菌的生长具有显著的抑制作用，对玉米进行黄曲霉菌的生物防治效果明显，可以达到与制霉菌素相近的抗黄曲霉菌水平。

技术特征：

1.一种富硒乳酸菌发酵液，其特征在于，所述富硒乳酸菌发酵液由德氏乳杆菌保加利亚亚种(lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)cicc6045经富硒培养基培养得到。

2.一种权利要求1所述的富硒乳酸菌发酵液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述s1中所述扩增培养的温度为37℃，时间为6～8小时。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述s2中含有亚硒酸钠的mrs培养基，含硒浓度为6μg/ml～10μg/ml。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述s2中所述菌液的接种量为1v/v％～5v/v％。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述s2中所述富硒培养的温度为29℃～45℃；富硒培养的时间为6h～30h。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述s1和s2中mrs培养基ph为4～8。

8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述s2具体为：

9.一种权利要求1所述的富硒乳酸菌发酵液在抑制黄曲霉菌中的应用。

10.一种权利要求1所述的富硒乳酸菌发酵液在防治玉米中黄曲霉菌中的应用。

技术总结
本发明提供了一种富硒乳酸菌发酵液及其制备方法和应用。富硒乳酸菌发酵液由德氏乳杆菌保加利亚亚种CICC6045经富硒培养基培养得到。制备方法为：将德氏乳杆菌保加利亚亚种接种于MRS培养基中，扩增培养至对数期得到菌液；将所述菌液接种至含有亚硒酸钠的MRS培养基中进行富硒培养得到富硒乳酸菌发酵液。本发明的富硒乳酸菌发酵液在含有低硒浓度下对黄曲霉菌的生长具有显著的抑制作用，对玉米进行黄曲霉菌的生物防治效果明显，可以达到与制霉菌素相近的抗黄曲霉菌水平。

技术研发人员：杨惠麟,刘世泽,陈金坤,王倬漫,李中源,高翠梅
受保护的技术使用者：湖南农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15