一种基于磁性树脂的核酸提取方法与流程

本技术涉及生物，具体涉及一种基于磁性树脂的核酸提取方法。

背景技术：

1、借助于二代测序技术进行微生物基因组学的分析已成为微生物多样性分析的主要技术手段。对土壤、水体及粪便等样本的微生物的核酸变异和数量分析能够反映菌群中各类微生物的种类和丰度，解码菌群物种分布的特征及差异。然而土壤、水体及粪便等样本含有过多的杂质(如腐殖质，腐殖酸、黄腐酸等)，在核酸提取过程中，该类杂质通常会与核酸结合并残留到提取的核酸产物中，对下游的pcr或qpcr具有显著的抑制。因此从土壤、水体及粪便等样本中提取核酸时，杂质的干扰成为制约核酸提取质量的重要限制性因素。

2、针对土壤及粪便核酸提取，目前市面上的产品大多通过沉淀法去除杂质。如us7459548b2公布了一种利用乙酸铵作为第一絮凝剂，使用硫酸铝铵或十二水硫酸铝铵作为第二絮凝剂从样本中的沉淀杂质，从而提升核酸提取纯度。cn113045684a公布了一种乙二胺四乙酸酐和葡聚糖酯化接枝制备得到的沉淀剂能除去生物样本中的金属离子，提升土壤样本核酸的活性。但这些杂质去除的方式都是通过离心沉淀的方式去除，操作比较繁琐，不易实现自动化处理。同时在核酸提取上提取时间长，容易造成核酸降解，影响下游的核酸检测准确度。

技术实现思路

1、本技术的目的在于提供一种基于磁性树脂的核酸提取方法。本技术的方法使用磁性阴离子交换树脂吸附土壤和粪便样本中的杂质，并通过磁场使结合了杂质的磁性阴离子树脂与样本分离，简化了传统沉淀剂离心的方式去除杂质的流程，缩短了核酸提取时间。使用本技术所述方法提取得到的土壤、粪便样本核酸纯度显著提高，有利于下游应用。

2、本技术的第一方面提供一种基于磁性树脂的核酸提取方法，所述方法包括如下步骤：

3、(1)收集生物样本或环境样本，加入裂解液，释放核酸；

4、(2)加入磁性树脂吸附，磁性分离弃去磁性树脂及其吸附物，保留液体；

5、(3)使用固相载体吸附所述液体中的核酸；

6、(4)清洗已吸附核酸的固相载体；

7、(5)洗脱，获得提取后的核酸产物。

8、在一些实施方案中，所述生物样本是粪便样本。

9、在一些实施方案中，所述环境样本是土壤样本或水体样本。

10、在一些实施方案中，所述裂解液包含离液剂、缓冲盐和表面活性剂。所述离液剂是例如胍盐、尿素和高氯酸锂中的一种或多种，优选胍盐，更优选盐酸胍和/或异硫氰酸胍；所述缓冲盐是磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐和tris中的一种或多种，优选磷酸盐，更优选nah2po3和na2hpo4中的一种或两种；所述表面活性剂是例如阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂中的一种或多种，优选非离子表面活性剂，更优选吐温20和/或癸基糖苷。

11、在一些实施方案中，所述步骤(1)还包括使用机械裂解法，例如使用玻璃珠，例如在样本中加入玻璃珠涡旋震荡。

12、在一些实施方案中，所述步骤(1)还包括在加入裂解液后离心，相对离心力为8000-20000×g，优选8000-18000×g，包括所述范围内的8000×g、8500×g、9000×g、9500×g、10000×g、11000×g、12000×g、13000×g、14000×g、15000×g、16000×g、17000×g和18000×g。

13、在一些实施方案中，每克粪便样本使用约0.1-5g磁性树脂，优选约0.5-3g磁性树脂，更优选约0.5-2.5g磁性树脂，包括所述范围内的0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1g、1.1g、1.2g、1.3g、1.4g、1.5g、1.6g、1.7g、1.8g、1.9g、2g、2.1g、2.2g、2.3g、2.4g和2.5g。

14、在一些实施方案中，每克土壤样本使用约0.1-5g磁性树脂，优选约0.2-3g磁性树脂，更优选约0.3-2g磁性树脂，包括所述范围内的0.3g、0.4、0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1g、1.1g、1.2g、1.3g、1.4g、1.5g、1.6g、1.7g、1.8g、1.9g和2g。

15、在一些实施方案中，所述步骤(2)包括加入一种或多种磁性树脂。

16、在一些实施方案中，所述磁性树脂是磁性阴离子交换树脂，所述磁性阴离子树脂是碱性，如强碱性或弱碱性磁性树脂。

17、在一些实施方案中，所述磁性树脂的基体(骨架)种类是苯乙烯系、丙烯酸系、醋酸系、环氧系、乙烯吡啶系、脲醛系或氯乙烯系中的一种。

18、在一些实施方案中，所述磁性树脂的孔隙结构是凝胶型或大孔型，优选大孔型。

19、在一些实施方案中，所述磁性树脂的磁核材料是铁氧化合物，如γ-fe2o3或fe3o4。

20、在一些实施方案中，所述磁性树脂是γ-fe2o3磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂或fe3o4磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，如γ-fe2o3磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或γ-fe2o3磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂。

21、在一些实施方案中，所述磁性树脂是miex、ndmp-1或nd100。

22、在一些实施方案中，所述磁性树脂结合样本中的非核酸杂质。

23、在一些实施方案中，所述非核酸杂质是指抑制pcr过程的杂质，如抑制dna聚合酶活性的杂质。

24、在一些实施方案中，所述固相载体是磁性吸附介质，优选磁性颗粒，更优选磁珠。

25、在一些实施方案中，所述固相载体是硅基质吸附介质，例如硅珠，硅基质膜。

26、在一些实施方案中，所述固相载体是阴离子交换材料，如阴离子交换柱。

27、在一些实施方案中，当所述固相载体是磁珠时，所述步骤(3)还包括加入裂解结合液。

28、在一些实施方案中，所述裂解结合液包含离液剂、缓冲盐、金属螯合剂、醇和表面活性剂；所述离液剂是例如胍盐、尿素和高氯酸锂中的一种或多种，优选胍盐，更优选盐酸胍和/或异硫氰酸胍；所述缓冲盐是例如tris和/或tris-base；所述金属螯合剂是例如edta二钠；所述醇是例如乙醇和/或异丙醇，优选异丙醇；所述表面活性剂是例如阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂中的一种或多种，优选非离子表面活性剂，更优选非离子表面活性剂和阴离子表面活性剂，还优选吐温20、peg8000癸基糖苷、tritonx-100和/或n-月桂酰肌氨酸钠。

29、在一些实施方案中，所述裂解结合液还包含聚乙烯吡咯烷酮。

30、在一些实施方案中，当所述固相载体是磁珠时，所述步骤(4)还包括外加磁场，分离已吸附核酸的磁珠。

31、在一些实施方案中，当所述固相载体是含硅基质膜的离心柱时，所述步骤(3)还包括离心，分离已吸附核酸和杂质。

32、在一些实施方案中，所述清洗包括加入洗涤液。

33、在一些实施方案中，所述洗涤液包含缓冲成分、醇和离液剂；所述缓冲成分是例如tris和/或tris-base，优选tris-base；所述醇是例如乙醇和/或异丙醇，优选异丙醇，所述离液剂是例如胍盐、尿素和高氯酸锂中的一种或多种，优选胍盐，更优选盐酸胍和/或异硫氰酸胍。

34、在一些实施方案中，所述清洗还包括加入漂洗液。

35、在一些实施方案中，所述漂洗液包括醇，优选乙醇和/或异丙醇，更优选乙醇。

36、在一些实施方案中，所述洗脱包括加入洗脱液，所述洗脱液是例如水或te缓冲液。

37、在一些实施方案中，所述方法部分或全部通过手动操作进行。例如当所述固相载体是含硅基质膜的离心柱时，所述方法全部通过手动操作进行。

38、在一些实施方案中，所述方法部分或全部在自动核酸提取平台上进行，例如当所述固相载体是磁珠时，所述方法全部在核酸提取仪上进行，可实现全流程自动化。例如亦可采取磁力架进行手动操作。

39、在一些实施方案中，所述方法部分或全部在微流体平台上进行，例如在微流控芯片上进行。

40、在一些实施方案中，所述核酸是dna和/或rna，优选地，所述核酸是dna。

41、本技术的第二方面提供一种基于磁性树脂的核酸提取方法，所述方法包括如下步骤：

42、(1)收集生物样本或环境样本，加入稀释液，释放或分散样本中的微生物；

43、(2)加入磁性树脂吸附，磁性分离弃去磁性树脂及其吸附物，保留液体；

44、(3)对所述液体进行裂解，释放核酸；

45、(4)使用固相载体吸附所述液体中的核酸；

46、(5)清洗已吸附核酸的固相载体；

47、(6)洗脱，获得提取后的核酸产物。

48、在一些实施方案中，所述生物样本是粪便样本。

49、在一些实施方案中，所述环境样本是土壤样本或水体样本。

50、在一些实施方案中，所述微生物是细菌、真菌和病毒中的一种或多种。

51、在一些实施方案中，所述稀释液包括缓冲盐，所述缓冲盐是磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐和tris中的一种或多种，优选磷酸盐，更优选nah2po3和na2hpo4中的一种或两种。

52、在一些实施方案中，所述步骤(1)还包括在加入稀释液后离心，相对离心力为500-5000×g，优选500-2000×g，包括所述范围内的500×g、600×g、700×g、800×g、900×g、1000×g、1100×g、1200×g、1300×g、1400×g、1500×g、1600×g、1700×g、1800×g、1900×g和2000×g。

53、在一些实施方案中，每克粪便样本使用约0.1-5g磁性树脂，优选约0.5-3g磁性树脂，更优选约0.5-2.5g磁性树脂，包括所述范围内的0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1g、1.1g、1.2g、1.3g、1.4g、1.5g、1.6g、1.7g、1.8g、1.9g、2g、2.1g、2.2g、2.3g、2.4g和2.5g。

54、在一些实施方案中，每克土壤样本使用约0.1-5g磁性树脂，优选约0.2-3g磁性树脂，更优选约0.3-2g磁性树脂，包括所述范围内的0.3g、0.4、0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1g、1.1g、1.2g、1.3g、1.4g、1.5g、1.6g、1.7g、1.8g、1.9g和2g。

55、在一些实施方案中，所述磁性树脂是磁性阴离子交换树脂，所述磁性阴离子树脂是碱性，如强碱性或弱碱性磁性树脂。

56、在一些实施方案中，所述磁性树脂的基体种类是苯乙烯系、丙烯酸系、醋酸系、环氧系、乙烯吡啶系、脲醛系或氯乙烯系中的一种。

57、在一些实施方案中，所述磁性树脂的孔隙结构是凝胶型或大孔型，优选大孔型。

58、在一些实施方案中，所述磁性树脂的磁核材料是铁氧化合物，如γ-fe2o3或fe3o4。

59、在一些实施方案中，所述磁性树脂是γ-fe2o3磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂或fe3o4磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，如γ-fe2o3磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或γ-fe2o3磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂。

60、在一些实施方案中，所述磁性树脂是miex、ndmp-1或nd100。

61、在一些实施方案中，所述磁性树脂结合样本中的非核酸杂质。

62、在一些实施方案中，所述非核酸杂质是指抑制pcr过程的杂质，如抑制dna聚合酶活性的杂质。

63、在一些实施方案中，所述裂解包括加入裂解液，所述裂解液包含离液剂、缓冲盐和表面活性剂。所述离液剂是例如胍盐、尿素和高氯酸锂中的一种或多种；所述缓冲盐是例如弱酸盐和/或弱碱盐；所述表面活性剂是例如阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂中的一种或多种。

64、在一些实施方案中，所述裂解还包括使用机械裂解法，例如使用玻璃珠，例如在样本中加入玻璃珠涡旋震荡。

65、在一些实施方案中，所述固相载体是磁性吸附介质，优选磁性颗粒，更优选磁珠。

66、在一些实施方案中，所述固相载体是硅基质吸附介质，例如硅珠，硅基质膜。

67、在一些实施方案中，所述固相载体是阴离子交换材料，如阴离子交换柱。

68、在一些实施方案中，当所述固相载体是磁珠时，所述裂解包括加入裂解结合液。

69、在一些实施方案中，所述裂解结合液包含离液剂、缓冲盐、金属螯合剂、醇和表面活性剂；所述离液剂是例如胍盐、尿素和高氯酸锂中的一种或多种，优选胍盐，更优选盐酸胍和/或异硫氰酸胍；所述缓冲盐是例如tris和/或tris-base；所述金属螯合剂是例如edta二钠；所述醇是例如乙醇和/或异丙醇，优选异丙醇；所述表面活性剂是例如阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂中的一种或多种，优选非离子表面活性剂，更优选非离子表面活性剂和阴离子表面活性剂，还优选吐温20、peg8000癸基糖苷、tritonx-100和/或n-月桂酰肌氨酸钠。

70、在一些实施方案中，所述裂解结合液还包含聚乙烯吡咯烷酮。

71、在一些实施方案中，当所述固相载体是磁珠时，所述步骤(4)还包括外加磁场，分离已吸附核酸的磁珠。

72、在一些实施方案中，当所述固相载体是含硅基质膜的离心柱时，所述步骤(3)还包括离心，分离已吸附核酸和杂质。

73、在一些实施方案中，所述清洗包括加入洗涤液。

74、在一些实施方案中，所述洗涤液包含缓冲成分、醇和离液剂；所述缓冲成分是例如tris和/或tris-base，优选tris-base；所述醇是例如乙醇和/或异丙醇，优选异丙醇，所述离液剂是例如胍盐、尿素和高氯酸锂中的一种或多种，优选胍盐，更优选盐酸胍和/或异硫氰酸胍。

75、在一些实施方案中，所述清洗还包括加入漂洗液。

76、在一些实施方案中，所述漂洗液包括醇，优选乙醇和/或异丙醇，更优选乙醇。

77、在一些实施方案中，所述洗脱包括加入洗脱液，所述洗脱液是例如水或te缓冲液。

78、在一些实施方案中，所述方法部分或全部通过手动操作进行。例如当所述固相载体是含硅基质膜的离心柱时，所述方法全部通过手动操作进行。

79、在一些实施方案中，所述方法部分或全部在自动核酸提取平台上进行，例如当所述固相载体是磁珠时，所述方法全部在核酸提取仪上进行，可实现全流程自动化。例如亦可采取磁力架进行手动操作。

80、在一些实施方案中，所述方法部分或全部在微流体平台上进行，例如在微流控芯片上进行。

81、在一些实施方案中，所述核酸是dna和/或rna，优选地，所述核酸是dna。

82、本技术的第三方面提供一种基于磁性树脂的核酸提取方法，所述方法包括如下步骤：

83、(1)收集生物样本或环境样本，加入裂解液，释放核酸；

84、(2)加入磁性树脂吸附，磁性分离弃去磁性树脂及其吸附物，保留液体；

85、(3)加入酚-氯仿溶液，混匀后，离心取上清液；

86、(4)向上清液中加入异丙醇/乙醇，离心分离获得dna沉淀；

87、(5)洗涤dna沉淀，用水或te缓冲液溶解，获得dna产物。

88、本技术的第四方面提供一种基于磁性树脂的核酸提取方法，所述方法包括如下步骤：

89、(1)收集生物样本或环境样本，加入裂解液，释放核酸；

90、(2)加入磁性树脂吸附，磁性分离弃去磁性树脂及其吸附物，保留液体；

91、(3)加入饱和nacl溶液或包含5-6mnacl的溶液，混匀后，离心取上清，

92、(4)向上清液中加入异丙醇/乙醇，离心分离获得dna沉淀；

93、(5)洗涤dna沉淀，用水或te缓冲液溶解，获得dna产物。

94、在一些实施方案中，所述酚-氯仿溶液中还包含异戊醇，即酚-氯仿-异戊醇溶液，所述酚、氯仿和异戊醇的体积比为25：24：1。

95、在一些实施方案中，所述乙醇是95-100％(体积分数)的乙醇。

96、在一些实施方案中，所述洗涤dna沉淀包括使用乙醇洗涤dna沉淀，优选75-95％(体积分数)的乙醇。

97、在一些实施方案中，所述方法还包括晾干残留乙醇，加入ddh2o或te缓冲液溶解dna。

98、在一些实施方案中，所述生物样本是粪便样本。

99、在一些实施方案中，所述环境样本是土壤样本或水体样本。

100、在一些实施方案中，所述裂解液包含离液剂，缓冲盐和表面活性剂。

101、在一些实施方案中，所述第三方面和第四方面的步骤(1)还包括使用机械裂解法，例如使用玻璃珠，例如在样本中加入玻璃珠涡旋震荡。

102、在一些实施方案中，所述第三方面和第四方面的步骤(1)还包括在加入裂解液后离心，相对离心力为8000-20000×g，优选8000-18000×g，包括所述范围内的8000×g、8500×g、9000×g、9500×g、10000×g、11000×g、12000×g、13000×g、14000×g、15000×g、16000×g、17000×g和18000×g。

103、在一些实施方案中，每克粪便样本使用约0.1-5g磁性树脂，优选约0.5-3g磁性树脂，更优选约0.5-2.5g磁性树脂，包括所述范围内的0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1g、1.1g、1.2g、1.3g、1.4g、1.5g、1.6g、1.7g、1.8g、1.9g、2g、2.1g、2.2g、2.3g、2.4g和2.5g。

104、在一些实施方案中，每克土壤样本使用约0.1-5g磁性树脂，优选约0.2-3g磁性树脂，更优选约0.3-2g磁性树脂，包括所述范围内的0.3g、0.4、0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1g、1.1g、1.2g、1.3g、1.4g、1.5g、1.6g、1.7g、1.8g、1.9g和2g。

105、在一些实施方案中，所述饱和nacl溶液或5-6mnacl的溶液中还包含氯仿。

106、在一些实施方案中，所述磁性树脂是磁性阴离子交换树脂，所述磁性阴离子树脂是碱性，如强碱性或弱碱性磁性树脂。

107、在一些实施方案中，所述磁性树脂的基体种类是苯乙烯系、丙烯酸系、醋酸系、环氧系、乙烯吡啶系、脲醛系或氯乙烯系中的一种。

108、在一些实施方案中，所述磁性树脂的孔隙结构是凝胶型或大孔型，优选大孔型。

109、在一些实施方案中，所述磁性树脂的磁核材料是铁氧化合物，如γ-fe2o3或fe3o4。

110、在一些实施方案中，所述磁性树脂是γ-fe2o3磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂或fe3o4磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，如γ-fe2o3磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或γ-fe2o3磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂。

111、在一些实施方案中，所述磁性树脂是miex、ndmp-1或nd100。

112、在一些实施方案中，所述磁性树脂结合样本中的非核酸杂质。

113、在一些实施方案中，所述非核酸杂质是指抑制pcr过程的杂质，如抑制dna聚合酶活性的杂质。

114、本技术的第五方面提供一种基于磁性树脂的核酸提取方法，所述方法包括如下步骤：

115、(1)收集生物样本或环境样本，加入稀释液，释放或分散样本中的微生物；

116、(2)加入磁性树脂吸附，磁性分离弃去磁性树脂及其吸附物，保留液体；

117、(3)对所述液体进行裂解，释放核酸；

118、(4)加入酚-氯仿溶液，混匀后，离心取上清液；

119、(5)向上清液中加入异丙醇/乙醇，离心分离获得dna沉淀；

120、(6)洗涤dna沉淀，用水或te缓冲液溶解，获得dna产物。

121、本技术的第六方面提供一种基于磁性树脂的核酸提取方法，所述方法包括如下步骤：

122、(1)收集生物样本或环境样本，加入稀释液，释放或分散样本中的微生物；

123、(2)加入磁性树脂吸附，磁性分离弃去磁性树脂及其吸附物，保留液体；

124、(3)对所述液体进行裂解，释放核酸；

125、(4)加入饱和nacl溶液或包含5-6mnacl的溶液，混匀后，离心取上清；

126、(5)向上清液中加入异丙醇/乙醇，离心分离获得dna沉淀；

127、(6)洗涤dna沉淀，用水或te缓冲液溶解，获得dna产物。

128、在一些实施方案中，所述酚-氯仿溶液中还包含异戊醇，即酚-氯仿-异戊醇溶液，所述酚、氯仿和异戊醇的体积比为25：24：1。

129、在一些实施方案中，所述乙醇是95-100％(体积分数)的乙醇。

130、在一些实施方案中，所述洗涤dna沉淀包括使用乙醇洗涤dna沉淀，优选75-95％(体积分数)的乙醇。

131、在一些实施方案中，所述方法还包括晾干残留乙醇，加入ddh2o或te缓冲液溶解dna。

132、在一些实施方案中，所述生物样本是粪便样本。

133、在一些实施方案中，所述环境样本是土壤样本或水体样本。

134、在一些实施方案中，所述微生物是细菌、真菌和病毒中的一种或多种。

135、在一些实施方案中，所述裂解包括加入裂解液，所述裂解液包含离液剂，缓冲盐和表面活性剂。

136、在一些实施方案中，所述裂解还包括使用机械裂解法，例如使用玻璃珠，例如在样本中加入玻璃珠涡旋震荡。

137、在一些实施方案中，所述第五方面和第六方面的步骤(1)还包括在加入稀释液后离心，相对离心力为500-5000×g，优选500-2000×g，包括所述范围内的500×g、600×g、700×g、800×g、900×g、1000×g、1100×g、1200×g、1300×g、1400×g、1500×g、1600×g、1700×g、1800×g、1900×g和2000×g。

138、在一些实施方案中，每克粪便样本使用约0.1-5g磁性树脂，优选约0.5-3g磁性树脂，更优选约0.5-2.5g磁性树脂，包括所述范围内的0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1g、1.1g、1.2g、1.3g、1.4g、1.5g、1.6g、1.7g、1.8g、1.9g、2g、2.1g、2.2g、2.3g、2.4g和2.5g。

139、在一些实施方案中，每克土壤样本使用约0.1-5g磁性树脂，优选约0.2-3g磁性树脂，更优选约0.3-2g磁性树脂，包括所述范围内的0.3g、0.4、0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1g、1.1g、1.2g、1.3g、1.4g、1.5g、1.6g、1.7g、1.8g、1.9g和2g。

140、在一些实施方案中，所述饱和nacl溶液或5-6mnacl的溶液中还包含氯仿。

141、在一些实施方案中，所述磁性树脂是磁性阴离子交换树脂，述磁性阴离子树脂是碱性，如强碱性或弱碱性磁性树脂。

142、在一些实施方案中，所述磁性树脂的基体种类是苯乙烯系、丙烯酸系、醋酸系、环氧系、乙烯吡啶系、脲醛系或氯乙烯系中的一种。

143、在一些实施方案中，所述磁性树脂的孔隙结构是凝胶型或大孔型，优选大孔型。

144、在一些实施方案中，所述磁性树脂的磁核材料是铁氧化合物，如γ-fe2o3或fe3o4。

145、在一些实施方案中，所述磁性树脂是γ-fe2o3磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂或fe3o4磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，如γ-fe2o3磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或γ-fe2o3磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂。

146、在一些实施方案中，所述磁性树脂是miex、ndmp-1或nd100。

147、在一些实施方案中，所述磁性树脂结合样本中的非核酸杂质。

148、在一些实施方案中，所述非核酸杂质是指抑制pcr过程的杂质，如抑制dna聚合酶活性的杂质。

149、本技术的第七方面提供一种试剂盒，所述试剂盒包括裂解液、洗涤液、洗脱液和磁性树脂。

150、在一些实施方案中，所述试剂盒是核酸提取试剂盒，优选dna提取试剂盒。

151、在一些实施方案中，所述磁性树脂是磁性阴离子交换树脂，述磁性阴离子树脂是碱性，如强碱性或弱碱性磁性树脂。

152、在一些实施方案中，所述磁性树脂的基体种类是苯乙烯系、丙烯酸系、醋酸系、环氧系、乙烯吡啶系、脲醛系或氯乙烯系中的一种。

153、在一些实施方案中，所述磁性树脂的孔隙结构是凝胶型或大孔型，优选大孔型。

154、在一些实施方案中，所述磁性树脂的磁核材料是铁氧化合物，如γ-fe2o3或fe3o4。

155、在一些实施方案中，所述磁性树脂是γ-fe2o3磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂或fe3o4磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，如γ-fe2o3磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或γ-fe2o3磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂。

156、在一些实施方案中，所述磁性树脂是miex、ndmp-1或nd100。

157、在一些实施方案中，所述裂解液包含离液剂，缓冲盐和表面活性剂。所述离液剂是例如胍盐、尿素和高氯酸锂中的一种或多种，优选胍盐，更优选盐酸胍和/或异硫氰酸胍；所述缓冲盐是磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐和tris中的一种或多种，优选磷酸盐，更优选nah2po3和na2hpo4中的一种或两种；所述表面活性剂是例如阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂中的一种或多种，优选非离子表面活性剂，更优选吐温20和癸基糖苷。

158、在一些实施方案中，所述洗涤液包含缓冲成分和离液剂，所述缓冲成分是例如tris和/或tris-base，优选tris-base；所述离液剂是例如胍盐、尿素和高氯酸锂中的一种或多种，优选胍盐，更优选盐酸胍和/或异硫氰酸胍。

159、在一些实施方案中，所述洗涤液还包括醇，所述醇是例如乙醇和/或异丙醇，优选异丙醇。

160、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括漂洗液。

161、在一些实施方案中，所述漂洗液包括醇，优选乙醇和/或异丙醇，更优选乙醇。

162、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括洗脱液。

163、在一些实施方案中，所述洗脱液是例如水或te缓冲液。

164、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括裂解结合液。

165、在一些实施方案中，所述裂解结合液包含离液剂、缓冲盐、金属螯合剂、醇和表面活性剂，所述离液剂是例如胍盐、尿素和高氯酸锂中的一种或多种，优选胍盐，更优选盐酸胍和/或异硫氰酸胍；所述缓冲盐是例如tris和/或tris-base；所述金属螯合剂是例如edta二钠；所述醇是例如乙醇和/或异丙醇，优选异丙醇；所述表面活性剂是例如阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂中的一种或多种，优选非离子表面活性剂，更优选非离子表面活性剂和阴离子表面活性剂，更优选吐温20、peg8000癸基糖苷、tritonx-100和n-月桂酰肌氨酸钠。

166、在一些实施方案中，所述裂解结合液还包含聚乙烯吡咯烷酮。

167、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括固相载体，所述固相载体是磁珠、硅珠、离心柱和阴离子交换柱中的至少一种。

168、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括样品裂解管，所述裂解管包含玻璃珠，优选酸洗玻璃珠。

169、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括稀释液。

170、在一些实施方案中，所述稀释液包含缓冲盐，所述缓冲盐是磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐和tris中的一种或多种，优选磷酸盐，更优选nah2po3和na2hpo4中的一种或两种。

171、在一些实施方案中，所述试剂盒用于行使第一方面或第二方面所述的方法。

172、本技术的第八方面提供一种试剂盒，所述试剂盒包括裂解液、磁性树脂和酚-氯仿溶液。

173、在一些实施方案中，所述试剂盒是核酸提取试剂盒，优选dna提取试剂盒。

174、在一些实施方案中，所述磁性树脂是磁性阴离子交换树脂，述磁性阴离子树脂是碱性，如强碱性或弱碱性磁性树脂。

175、在一些实施方案中，所述磁性树脂的基体种类是苯乙烯系、丙烯酸系、醋酸系、环氧系、乙烯吡啶系、脲醛系或氯乙烯系中的一种。

176、在一些实施方案中，所述磁性树脂的孔隙结构是凝胶型或大孔型，优选大孔型。

177、在一些实施方案中，所述磁性树脂的磁核材料是铁氧化合物，如γ-fe2o3或fe3o4。

178、在一些实施方案中，所述磁性树脂是γ-fe2o3磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂或fe3o4磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，如γ-fe2o3磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或γ-fe2o3磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂。

179、在一些实施方案中，所述磁性树脂是miex、ndmp-1或nd100。

180、在一些实施方案中，所述裂解液包含离液剂，缓冲盐和表面活性剂。

181、在一些实施方案中，所述酚-氯仿溶液中还包含异戊醇，即酚-氯仿-异戊醇溶液，所述酚、氯仿和异戊醇的体积比为25：24：1。

182、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括乙醇和/或异丙醇。

183、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括样品裂解管，所述裂解管包含玻璃珠，优选酸洗玻璃珠。

184、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括稀释液。

185、在一些实施方案中，所述稀释液包含缓冲盐，所述缓冲盐是磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐和tris中的一种或多种，优选磷酸盐，更优选nah2po3和na2hpo4中的一种或两种。

186、在一些实施方案中，所述试剂盒用于实施第三方面或第五方面所述的方法。

187、本技术的第九方面提供一种试剂盒，所述试剂盒包括裂解液、磁性树脂以及饱和nacl溶液或5-6m的nacl溶液。

188、在一些实施方案中，所述裂解液包含离液剂，缓冲盐和表面活性剂。

189、在一些实施方案中，所述饱和nacl溶液或5-6mnacl的溶液中还包含氯仿。

190、在一些实施方案中，所述磁性树脂是磁性阴离子交换树脂，述磁性阴离子树脂是碱性，如强碱性或弱碱性磁性树脂。

191、在一些实施方案中，所述磁性树脂的基体种类是苯乙烯系、丙烯酸系、醋酸系、环氧系、乙烯吡啶系、脲醛系或氯乙烯系中的一种。

192、在一些实施方案中，所述磁性树脂的孔隙结构是凝胶型或大孔型，优选大孔型。

193、在一些实施方案中，所述磁性树脂的磁核材料是铁氧化合物，如γ-fe2o3或fe3o4。

194、在一些实施方案中，所述磁性树脂是γ-fe2o3磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂或fe3o4磁性大孔碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，如γ-fe2o3磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或γ-fe2o3磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂，或fe3o4磁性大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂。

195、在一些实施方案中，所述磁性树脂是miex、ndmp-1或nd100。

196、在一些实施方案中，所述试剂盒是核酸提取试剂盒，优选dna提取试剂盒。

197、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括乙醇和/或异丙醇。

198、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括样品裂解管，所述裂解管包含玻璃珠，优选酸洗玻璃珠。

199、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括稀释液。

200、在一些实施方案中，所述稀释液包含缓冲盐，所述缓冲盐是磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐和tris中的一种或多种，优选磷酸盐，更优选nah2po3和na2hpo4中的一种或两种。

201、在一些实施方案中，所述试剂盒用于实施第四方面或第六方面所述的方法。