劳伦链霉菌YG01及其应用

本发明属于土壤微生物资源开发与利用领域，涉及劳伦链霉菌yg01及其应用。

背景技术：

1、番茄是世界上重要的茄科蔬菜，全球年产量约1.6亿吨。由青枯劳尔氏菌(ralstoniasolanacearum)引起的土传青枯病，破坏性高，常导致番茄植株大面积枯萎死亡，造成巨大的经济损失，由于病原菌的耐药性及广泛的宿主范围，使用化学药物防控的成功度有限，且化学品的长期投入亦会对人体健康和环境造成许多不利影响。生物防控是一种绿色安全的防控措施，因此，筛选高效的具有生防功能的有益微生物菌株，挖掘其代谢产物，对于防控土传青枯病，农业的可持续发展有重要作用。

2、土壤放线菌营养要求简单，大部分类群产生抗逆性的分生孢子，有利于抵抗不良环境的胁迫，是一类有着广泛实际用途的资源微生物。链霉菌属是放线菌的一个重要类群，亦是土壤中潜在的有益微生物，研究发现在抑病型的健康土壤中，链霉菌属的相对丰度远高于导病型土壤，同时链霉菌因其产生丰富的次生代谢产物在防控土传病害中发挥着重要作用。

技术实现思路

1、本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一株劳伦链霉菌yg01。

2、本发明的另一目的是提供由劳伦链霉菌yg01制备伯尔尼霉素a和/或伯尔尼霉素c的方法.

3、本发明的又一目的是提供劳伦链霉菌yg01的应用。

4、本发明的目的可通过以下技术方案实现：

5、一株劳伦链霉菌(streptomyceslaurentii)yg01，保藏于中国普通微生物菌种保藏中心，保藏日期为2023年6月1日，保藏号为cgmccno.27519。

6、所述的劳伦链霉菌(streptomyceslaurentii)yg01的培养物、发酵上清液。

7、一种由本发明所述的劳伦链霉菌(streptomyceslaurentii)yg01制备的固体菌剂。

8、所述的固体菌剂优选由以下方法制备：

9、(1)将所述的劳伦链霉菌yg01接种到种子培养液，进行液体发酵制备得到yg01种子液，其发酵条件为：初始ph范围7.5，培养温度范围28-30℃，通入无菌空气并搅拌：无菌空气的通入量一般为培养液体积的65％/分钟，搅拌速度一般为170转/分钟，发酵时间45-50小时，所用种子培养液为高氏1号；

10、(2)将上一步制备的yg01种子液，接种固体培养中进行固体发酵，接种量10％，发酵温度为28-30℃，发酵7-10天后结束，使该固体基质中孢子达到1.0×109个/g以上；固体培养基：玉米粉25％，黄豆粉5％，麦麸17.5％，稻壳52.5％，料水比为1:1，ph＝7.5。

11、本发明所述的劳伦链霉菌(streptomyceslaurentii)yg01或所述的培养物、发酵上清液在制备伯尔尼霉素(bernimycin，ber)a和/或伯尔尼霉素c中的应用。

12、一种制备制备伯尔尼霉素a和/或伯尔尼霉素c的方法，包含以下步骤：

13、(1)制备所述的劳伦链霉菌(streptomyceslaurentii)yg01的发酵液；

14、(2)取上一步制备的1-10l发酵液，10000rpm，离心5min，获得发酵液上清液，按1:1体积比加入乙酸乙酯萃取2-5h，使用分液漏斗获取上层乙酸乙酯相，使用旋转蒸发仪蒸干乙酸乙酯相，按每1l发酵液加入1-2ml甲醇溶解获得伯尔尼霉素粗提物。

15、作为本发明的一种优选，所述的方法，还包含：

16、(3)ber粗提物直接使用液相分离出bera和berc混合物，或相对应的纯品。液相使用安捷伦色谱柱，流动相为a：h2o+1‰甲酸、b：乙腈，柱温30.0℃，流动相流速为1ml/min，按照液相分离程序a可以获得伯尔尼霉素a和伯尔尼霉素c混合物，按照液相分离程序b可以获得伯尔尼霉素a和伯尔尼霉素c纯净物；

17、

18、按照本发明所述的方法制备的伯尔尼霉素a和/或伯尔尼霉素c。

19、本发明所述的劳伦链霉菌(streptomyceslaurentii)yg01或所述的培养物、发酵上清液、所述的伯尔尼霉素a和/或伯尔尼霉素c在防治番茄青枯菌中的应用。

20、本发明所述的劳伦链霉菌(streptomyceslaurentii)yg01或所述的培养物、发酵上清液、所述的伯尔尼霉素a和/或伯尔尼霉素c在制备防治番茄青枯菌的试剂或生物农药中的应用。

21、有益效果：

22、本发明筛选到一株高产抗生素ber的劳伦链霉菌yg01，使用液相对菌株yg01发酵液中伯尔尼霉素(ber)产量进行测定(图6)，结果显示在高氏1号培养基的摇瓶(50ml/250ml)发酵7d情况下，yg01发酵液中ber含量高达21-24mg/l，是所有文献报道中最高值。且菌株yg01发酵ber产量还可以通过更换培养基、改良培养基组分、接种量、发酵条件和诱变育种等方法进一步优化，具有高产ber的潜力。

23、ber是一种硫肽类抗生素，可以通过与核糖体亚单位结合抑制革兰氏阳性菌的蛋白质生物合成。据各种文献报道，ber对枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌有高效的拮抗作用，但对大肠杆菌和铜绿假单胞菌等革兰氏阴性菌没有拮抗效果。但经检测，本发明制备的ber对革兰氏阴性菌青枯菌有显著的拮抗效果(图7)，这表明ber具有靶向消减某些革兰氏阴性菌的能力，这种靶向消减致病菌的能力的机理尚未明确，但可能对临床医学、靶向药物开发等方面起到巨大作用。

技术特征：

1.一株劳伦链霉菌(streptomyces laurentii)yg01，保藏于中国普通微生物菌种保藏中心，保藏日期为2023年6月1日，保藏号为cgmcc no.27519。

2.权利要求1所述的劳伦链霉菌(streptomyces laurentii)yg01的培养物、发酵上清液。

3.一种由权利要求1所述的劳伦链霉菌(streptomyces laurentii)yg01制备的固体菌剂。

4.根据权利要求3所述的固体菌剂，其特征在于由以下方法制备：

5.权利要求1所述的劳伦链霉菌(streptomyces laurentii)yg01或权利要求2所述的培养物、发酵上清液在制备伯尔尼霉素a和/或伯尔尼霉素c中的应用。

6.一种制备制备伯尔尼霉素(bernimycin，ber)a和/或伯尔尼霉素c的方法，其特征在于包含以下步骤：

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于还包含：

8.按照权利要求6或7所述的方法制备的伯尔尼霉素a和/或伯尔尼霉素c。

9.权利要求1所述的劳伦链霉菌(streptomyces laurentii)yg01或权利要求2所述的培养物、发酵上清液、权利要求8所述的伯尔尼霉素a和/或伯尔尼霉素c在防治番茄青枯菌中的应用。

10.权利要求1所述的劳伦链霉菌(streptomyces laurentii)yg01或权利要求2所述的培养物、发酵上清液、权利要求8所述的伯尔尼霉素a和/或伯尔尼霉素c在制备防治番茄青枯菌的试剂或生物农药中的应用。

技术总结
本发明公开了劳伦链霉菌YG01及其应用。劳伦链霉菌YG01，于2023年6月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.27519。本发明提供的劳伦链霉菌YG01代谢产生伯尔尼霉素(Bernimycin，BER)A/C，BERA/C具有抑制番茄青枯菌的作用，抑菌效果显著，具有广阔的应用前景。本发明筛选出的劳伦链霉菌YG01具有旺盛的生长能力，可大批量发酵应用于多个领域。

技术研发人员：姚感,王世梅,韦中,徐阳春,沈其荣
受保护的技术使用者：南京农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15