一种增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖CELP-S的制备方法及应用

本发明涉及油莎豆加工，特别是一种增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖celp-s的制备方法及应用。

背景技术：

1、油莎豆(cyperus esculentus l.)亦称油莎草，是莎草科莎草属草本植物。其营养丰富,是一种优质、高产、综合利用价值高的多用新型经济作物。油莎豆核状块茎富含丰富的营养物质，除了可榨油的油脂以外，糖类物质占20％以上。植物多糖具有广泛的生物学功效，例如抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗凝血、降血糖和免疫调节等多种药理活性。

2、抗氧化剂作为食品添加剂可以帮助对抗食品变质，提高食品稳定性和延长贮存期。但现有的油莎豆多糖作为抗氧化剂使用时，其抗氧化能力效果欠佳。若能利用油莎豆处理得到新的油莎豆酶解多糖，使其可以增强抗氧化性能，而且对生殖细胞有一定抗氧化损伤保护功效，促进细胞增殖，提高细胞活力。

技术实现思路

1、针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖celp-s的制备方法及应用，可有效解决现有油莎豆多糖抗氧化能力效果欠佳的问题。

2、为实现上述目的，本发明解决的技术方案是，一种增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖celp-s的制备方法，包括以下步骤：

3、s1、油莎豆多糖celp的分离提取：

4、s11、将新鲜油莎豆块茎打碎，经三次压榨出油后得油莎豆豆粕，油莎豆豆粕在45-55℃下烘干11-13h后，过120目筛，得豆粕粉；

5、s12、取45-55g豆粕粉，加入蒸馏水，其中，豆粕粉与蒸馏水的重量体积比为1:10，混匀后超声提取12-18min，超声功率500w，收集滤液，滤渣加蒸馏水重复超声提取三次，合并三次滤液，将滤液在4℃，4800-5200r/min下离心8-12min，取上清液，将上清液旋蒸浓缩至其原体积的1/5，得浓缩液；

6、所述的重量体积比为固体以g计，液体以ml计；

7、s13、用sevage法除去多糖中蛋白质，将浓缩液与sevage试剂按体积比为1:2混合均匀，振荡5min，经分液漏斗萃取，弃去中间的蛋白质层和下层的sevage溶液，上层多糖溶液继续加入sevage试剂，重复3-5次至无蛋白层，分离上清液，用3500da的透析袋流水透析24h，除去小分子杂质，然后冷冻干燥48h，得油莎豆多糖celp；

8、s2、油莎豆酶解多糖celp-s的制备：取5g油莎豆多糖celp，溶解在500ml nah2po4-naoh缓冲溶液中，随后加入500mg中温α-淀粉酶于37℃水浴锅中搅拌反应1h，反应结束后将反应液加热至100℃灭活13-18min，冷却至室温后装入100kda的超滤离心管中，7800-8500r/min离心8-12min，离心后将超滤离心管中内部溶液收集并浓缩至50ml，用10000da的透析袋流水透析48h，随后冷冻干燥48h，即得油莎豆酶解多糖celp-s。

9、所述步骤s2中nah2po4-naoh缓冲溶液的浓度为0.05m，ph＝6。

10、所述sevage试剂是由氯仿：正丁醇体积比为4:1混匀制成。

11、所述方法制备的增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖celp-s在制备增强生殖细胞抗氧化活性药物中的应用。

12、本发明制备方法简单，制备得到的油莎豆酶解多糖celp-s与原油莎豆多糖celp在体外抗氧化活性方面具有显著提升，且能够提高精原细胞抗氧化性，提高细胞活力，社会和经济效益显著。

技术特征：

1.一种增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖celp-s的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖celp-s的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求1所述的增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖celp-s的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求1所述的增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖celp-s的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求1-4任一项所述的增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖celp-s的制备方法，其特征在于，所述步骤s2中nah2po4-naoh缓冲溶液的浓度为0.05m，ph=6。

6.根据权利要求1-4任一项所述的增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖celp-s的制备方法，其特征在于，所述sevage试剂是由氯仿：正丁醇体积比为4:1混匀制成。

7.权利要求1-6任一项所述方法制备的增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖celp-s在制备增强生殖细胞抗氧化活性药物中的应用。

技术总结
一种增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖CELP‑S的制备方法，包括以下步骤：S1、油莎豆多糖CELP的分离提取；S2、油莎豆酶解多糖CELP‑S的制备。所述方法制备的增强生殖细胞抗氧化损伤活性油莎豆酶解多糖CELP‑S在制备增强生殖细胞抗氧化活性药物中的应用。本发明制备方法简单，制备得到的油莎豆酶解多糖CELP‑S与原油莎豆多糖CELP在体外抗氧化活性方面具有显著提升，且能够提高精原细胞抗氧化性，提高细胞活力，社会和经济效益显著。

技术研发人员：董春红,杨邵华,邱渊皓,胡玉龙,王洁
受保护的技术使用者：河南中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15