同时制备四种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的脱脂南极磷虾粉活性肽的方法

本发明属于活性物质开发，具体涉及一种同时制备四种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的脱脂南极磷虾粉活性肽的方法。

背景技术：

1、近年来，糖尿病的患病率逐年升高，成为继心脑血管疾病和肿瘤之后危害人类健康的第三大慢性疾病。糖尿病是一种以高血糖为特征，由于机体胰岛素分泌不足或者胰岛功能受损而导致的慢性代谢疾病。糖尿病主要分为两种类型，即i型糖尿病和ii型糖尿病，其中ii糖尿病占糖尿病病例的90％。目前，糖尿病的治疗需要药物、运动和饮食三者相结合的方式进行科学的诊治，尚未找到完全根治的办法。用于治疗ii型糖尿病的传统药物主要包括胰岛素及其类似物、胰岛素增敏剂、胰岛素促泌剂，酶抑制剂等，这些药物具有很强的降血糖能力，可以在短时间内控制血糖水平，但长期服用这些药物会发生一系列副反应，包括低血糖、胃肠道不良反应，肝肾损伤等，对人体带来严重的毒副作用以及潜在性的危害。

2、人体血糖的来源主要是依靠饮食中碳水化合物的摄取，α-葡萄糖苷酶是参与生物体内糖代谢过程的一种不可或缺的消化酶，主要通过催化寡糖生成葡萄糖，从而引起血糖水平升高。抑制α-葡萄糖苷酶的活性以减少葡萄糖的产生，降低餐后高血糖状态是治疗ii型糖尿病的主要手段之一。α-葡萄糖苷酶酶抑制剂的临床药物有阿卡波糖，米格列醇，伏格列波糖等，这些药物的使用具有一定的局限性和副作用。因此，从食源性动植物资源中开发天然安全的生物活性成分用于治疗或者改善ii型糖尿病及其并发症已成为研究的重点。

3、南极磷虾是生活在南极洲水域的一种浮游生物，其生物蕴藏量约为6.5-10亿吨。同时，南极磷虾中含有丰富的蛋白质资源，被认为是世界上最大的未被充分利用的蛋白质资源库。南极磷虾主要用于加工成高附加值的磷虾油，而脱脂南极磷虾粉作为磷虾油生产工业的副产物，具有产量大、价格低廉、富含优质蛋白质等特点，主要被用作制备饲料、鱼饵等低值化产品，造成蛋白质资源利用不充分。因此，利用脱脂南极磷虾粉制备具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的生理活性肽具有极大的应用价值。

技术实现思路

1、针对上述背景技术中存在的问题，本发明设计的目的在于提供一种利用南极磷虾加工副产物酶解制备四种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的生物活性肽的方法，实现南极磷虾加工副产物的高值化利用，以期提高其应用价值。

2、本发明具体通过以下技术方案加以实现：

3、同时制备四种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的脱脂南极磷虾粉活性肽的方法，包括以下步骤：

4、1)将无水乙醇溶液加入到南极磷虾粉中进行脱脂处理，脱脂后抽滤，取固体沉淀干燥，得到脱脂南极磷虾粉；

5、2)取步骤1)的脱脂南极磷虾粉与去离子水混匀得到悬浊液，将悬浊液进行超声处理；超声结束后的悬浊液调节ph，添加中性蛋白酶，转移到恒温震荡水浴锅中进行水解；

6、3)将步骤2)的得到的水解液进行水浴加热灭活，待水解液冷却至室温后离心并收集上清液进行真空冷冻干燥，冻干后的粉末即为脱脂南极磷虾粉活性肽；

7、4)对步骤3)中得到的脱脂南极磷虾粉活性肽粉进行de novo从头测序；

8、5)根据多肽序列结果，利用虚拟筛选和分子对接筛选得到四种α-葡萄糖苷酶抑制肽。

9、进一步地，步骤1)中无水乙醇溶液与南极磷虾粉的料液比为1:10g/ml，脱脂处理过程中需匀速搅拌6h，期间更换一次无水乙醇。

10、进一步地，步骤2)中脱脂南极磷虾粉与去离子水的料液比为1:20g/ml，超声处理的条件为：超声功率300w、超声温度50℃、超声时间30min。

11、进一步地，步骤2)中，中性蛋白酶添加量为6000u/g，ph为7，水解温度为45℃，水解时间为5.4h。

12、进一步地，步骤3)中水浴加热灭活具体为在95℃水浴中加热15min进行灭酶处理；离心条件为：4℃的温度条件下8000rpm/min离心20min。

13、进一步地，步骤5)中四种α-葡萄糖苷酶抑制肽分别为：lpfqr、psfd、psfdf和vpfpr。

14、上述方法制得的lpfqr、psfd、psfdf和vpfpr抑制肽在制备改善及治疗ii型糖尿病及其并发症的食品、保健品及药物中的应用。本发明以脱脂南极磷虾粉为原料，利用中性蛋白酶水解制备具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的脱脂南极磷虾粉活性肽，不仅实现了南极磷虾加工副产物的高值化利用，而且可以有效提高脱脂南极磷虾粉的应用价值。本发明的制备方法简单合理、易操作，得到的脱脂南极磷虾粉活性肽安全性高、无副作用，并且可应用于治疗或者改善ii型糖尿病的功能性食品、保健品及药物等方面，具有广阔的市场应用前景和经济效益。

技术特征：

1.同时制备四种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的脱脂南极磷虾粉活性肽的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的同时制备四种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的脱脂南极磷虾粉活性肽的方法，其特征在于步骤1）中无水乙醇溶液与南极磷虾粉的料液比为1:10 g/ml，脱脂处理过程中需匀速搅拌6h，期间更换一次无水乙醇。

3.根据权利要求1所述的同时制备四种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的脱脂南极磷虾粉活性肽的方法，其特征在于步骤2）中脱脂南极磷虾粉与去离子水的料液比为1:20g/ml，超声处理的条件为：超声功率300w、超声温度50oc、超声时间30min。

4.根据权利要求1所述的同时制备四种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的脱脂南极磷虾粉活性肽的方法，其特征在于步骤2）中，中性蛋白酶添加量为6000 u/g，ph为7，水解温度为45oc，水解时间为5.4 h。

5.根据权利要求1所述的同时制备四种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的脱脂南极磷虾粉活性肽的方法，其特征在于步骤3）中水浴加热灭活具体为在95oc水浴中加热15 min进行灭酶处理；离心条件为：4oc的温度条件下8000rpm/min 离心20min。

6.根据权利要求1所述的同时制备四种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的脱脂南极磷虾粉活性肽的方法，其特征在于步骤5）中四种α-葡萄糖苷酶抑制肽分别为：lpfqr、psfd、psfdf和vpfpr。

7.权利要求1-6任一所述的方法制得的lpfqr、psfd、psfdf和vpfpr抑制肽在制备改善及治疗ii型糖尿病及其并发症的食品、保健品及药物中的应用。

技术总结
本发明同时制备四种具有α‑葡萄糖苷酶抑制作用的脱脂南极磷虾粉活性肽的方法，包括以下步骤：1）南极磷虾粉脱脂；2）取脱脂南极磷虾粉与去离子水混匀得悬浊液，超声、中性蛋白酶水解；3脱脂南极磷虾粉活性肽制备；4）对脱脂南极磷虾粉活性肽粉进行de novo从头测序；5）根据多肽序列结果，利用虚拟筛选和分子对接筛选得到四种α‑葡萄糖苷酶抑制肽。本发明以脱脂南极磷虾粉为原料，利用中性蛋白酶水解制备具有α‑葡萄糖苷酶抑制活性的脱脂南极磷虾粉活性肽，不仅实现了南极磷虾加工副产物的高值化利用，而且可以有效提高脱脂南极磷虾粉的应用价值。

技术研发人员：马庆保,郑克炜,姜维,吴园园,代清菲
受保护的技术使用者：浙江海洋大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/21