一种牛大力蛋白发酵液及制备方法以及其在降尿酸方面的应用

本发明属于功能性食品或保健品，特别涉及一种牛大力蛋白发酵液及制备方法以及其在降尿酸方面的应用。

背景技术：

1、牛大力是一种豆科崖豆藤属植物，主要种植在亚热带地区，例如广东、广西、福建、海南、湖南等省份。牛大力已有悠久的食用及药用历史，属于药食同源植物，具有很高的营养和医科保健价值。据报道，牛大力根入药具有强筋活络、补虚润肺的作用。人们常用牛大力作为泡酒、泡茶、煲汤或者制作药膳的原材料，具有清热解毒、活血散热等功效。大量研究表明，牛大力含有多糖、黄酮类、酯类、糖苷类等多种活性物质，因此具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎症、改善免疫力等作用。也有研究表明，利用酶解法将牛大力蛋白制备为牛大力活性肽，同样具有抗氧化等功效。目前，牛大力蛋白发酵液用于降尿酸的相关研究还未被报道。

技术实现思路

1、本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种牛大力蛋白发酵液的制备方法。

2、本发明的另一目的在于提供所述方法制备得到的牛大力蛋白发酵液。

3、本发明的再一目的在于提供所述牛大力蛋白发酵液的应用。

4、本发明的目的通过下述技术方案实现：

5、一种牛大力蛋白发酵液的制备方法，包括如下步骤：将牛大力蛋白、蔗糖和益生菌粉加入到水中，密封混匀后进行发酵，待发酵结束后离心收集上清液，得到牛大力蛋白发酵液；其中，所述的益生菌为乳酸菌、双歧杆菌和酵母菌中的至少一种。

6、所述的牛大力蛋白包括牛大力根部和/或叶组织中提取的粗蛋白和/或纯蛋白；可通过本领域常规方法提取得到；优选为通过如下方法提取得到：

7、(1)预处理

8、将新鲜牛大力叶和/或根部组织清洗除杂后烘干，然后粉碎过筛，得到牛大力粉；

9、(2)浸提

10、将牛大力粉加入到水中，调节ph值至11～13，于35～50℃条件下进行提取，得到牛大力蛋白提取液；

11、(3)制备牛大力蛋白

12、①将步骤(2)中得到的牛大力蛋白提取液离心去除沉淀，冷冻干燥，得到牛大力粗蛋白；

13、或

14、②将步骤(2)中得到的牛大力蛋白提取液调节ph值至1.5～5.0，静置，离心去除上清液，然后加水复溶后调节ph值至7.0，透析，冻干，得到纯化后的牛大力蛋白。

15、步骤(1)中所述的烘干的温度为30～60℃；优选为30℃。

16、步骤(1)中所述的过筛优选为过100目筛。

17、步骤(2)中所述的牛大力粉与水的料液比为1：10～50(g/ml)；优选为1：40(g/ml)。

18、步骤(2)中所述的调节ph值优选为调节ph值至12。

19、步骤(2)中所述的调节ph值采用naoh溶液进行调节；优选为采用1～6mol/l的naoh溶液进行调节；更优选为采用6mol/l的naoh溶液进行调节。

20、步骤(2)中所述的提取的温度优选为50℃。

21、步骤(2)中所述的提取的时间为2～3h；优选为2h。

22、步骤(2)和(3)中所述的水优选为无菌水、去离子或超纯水。

23、步骤(3)①和②中所述的离心的条件为：4000～10000rpm/min离心15～40min；优选为：4000rpm/min离心15min。

24、步骤(3)②中所述的调节ph值为采用hcl溶液进行调节；优选为采用1～6mol/l的hcl溶液进行调节；更优选为采用6mol/l的hcl溶液进行调节。

25、步骤(3)②中所述的调节ph值至7.0为采用naoh溶液进行调节；优选为采用1～6mol/l的naoh溶液进行调节；更优选采用1mol/l的naoh溶液进行调节。

26、步骤(3)②中所述的调节ph值优选为调节ph值至3.0。

27、步骤(3)②中所述的静置的时间为至少1h。

28、步骤(3)②中所述的透析所用的透析袋的截留分子量小于或等于1000da。

29、所述的牛大力蛋白的用量为按其在发酵体系的质量百分比0.6～4％添加计算；优选为按其在发酵体系的质量百分比0.6～1.2％添加计算。

30、所述的蔗糖的用量为按其在发酵体系的质量百分比1.6～4％添加计算；优选为按其在发酵体系的质量百分比0.6～1.2％添加计算。

31、所述的益生菌的接种时的活细胞数量为106～108cfu/ml；优选为107cfu/ml。

32、所述的益生菌的用量为按其在发酵体系的体积百分比1～5％添加计算；优选为按其在发酵体系的体积百分比1％添加计算。

33、所述的益生菌优选为植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、保加利亚乳杆菌、格氏乳杆菌和双歧杆菌中的至少一种；进一步优选为植物乳杆菌；更进一步优选为植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)fs4722。

34、所述的发酵优选为动态发酵，即置于摇床上进行发酵。

35、所述的发酵的条件为：200～500rpm、25～37℃下培养24～48h；优选为：300rpm、室温或37℃下培养24～48h。

36、所述的发酵结束后的离心条件为：8000～15000rpm/min离心5～20min；优选为：8000rpm/min离心20min。

37、一种牛大力蛋白发酵液，通过上述任一项所述的方法制备得到。

38、所述的牛大力蛋白发酵液在制备防治高尿酸血症和/或抗痛风的产品中的应用。

39、所述的产品包括药物等。

40、所述的牛大力蛋白发酵液中的成分甘氨酸、乳酸具有降低尿酸含量的作用；所述的牛大力蛋白发酵液中的成分甘氨酸、乙酸能够降低尿酸合成路径中关键酶xod的酶活力；所述的牛大力蛋白发酵液可通过降低肝脏细胞的尿酸水平，进而达到降尿酸、抗痛风的目的。

41、本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

42、1、本发明中的牛大力蛋白发酵液通过牛大力蛋白粉(根蛋白和叶蛋白)、益生菌粉、蔗糖和无菌水经发酵制得，通过实验发现：该牛大力蛋白发酵液在肝细胞hepg2高尿酸模型中能显著降低尿酸含量；牛大力蛋白发酵液中的成分甘氨酸、乳酸具有显著降低尿酸含量的效果；牛大力蛋白发酵液中的成分甘氨酸、乙酸能够显著抑制尿酸合成路径中关键酶xod的酶活力，因此，可将其用于开发具有防治高尿酸血症(降尿酸)、抗痛风等作用的功能性食品、保健品或药品。

43、2、本发明利用益生菌通过生物发酵法制备牛大力根和叶蛋白发酵液(制品)，评估其降尿酸作用，拓宽牛大力相关产品的生物功效，进一步提高牛大力的应用价值。

技术特征：

1.一种牛大力蛋白发酵液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将牛大力蛋白、蔗糖和益生菌粉加入到水中，密封混匀后进行发酵，待发酵结束后离心收集上清液，得到牛大力蛋白发酵液；其中，所述的益生菌为乳酸菌、双歧杆菌和酵母菌中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的牛大力蛋白发酵液的制备方法，其特征在于：

3.根据权利要求2所述的牛大力蛋白发酵液的制备方法，其特征在于：

4.根据权利要求1所述的牛大力蛋白发酵液的制备方法，其特征在于：

5.根据权利要求1所述的牛大力蛋白发酵液的制备方法，其特征在于，所述的牛大力蛋白通过如下方法提取得到：

6.根据权利要求5所述的牛大力蛋白发酵液的制备方法，其特征在于：

7.根据权利要求5所述的牛大力蛋白发酵液的制备方法，其特征在于：

8.根据权利要求1所述的牛大力蛋白发酵液的制备方法，其特征在于：

9.一种牛大力蛋白发酵液，其特征在于：通过权利要求1～8任一项所述的方法制备得到。

10.权利要求9所述的牛大力蛋白发酵液在制备防治高尿酸血症和/或抗痛风的产品中的应用。

技术总结
本发明公开了一种牛大力蛋白发酵液及制备方法以及其在降尿酸方面的应用。该牛大力蛋白发酵液的制备方法包括如下步骤：将牛大力蛋白、蔗糖和益生菌粉加入到水中，密封混匀后进行发酵，待发酵结束后离心收集上清液，得到牛大力蛋白发酵液；其中，所述的益生菌为乳酸菌、双歧杆菌和酵母菌中的至少一种。本发明中通过实验发现：该牛大力蛋白发酵液在肝细胞HepG2高尿酸模型中能显著降低尿酸含量，因此，可将其用于开发防治高尿酸血症或抗痛风的产品，进一步提高牛大力的应用价值。

技术研发人员：娄文勇,李梦帆,吴晓玲
受保护的技术使用者：华南理工大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22