一种用于CAR-T细胞快速扩增和活性增强的培养基的制作方法

本发明属于生物学，尤其涉及一种用于car-t细胞快速扩增和活性增强的培养基。

背景技术：

1、car-t细胞免疫治疗是近年来免疫治疗领域的一大创新，它通过基因工程和细胞培养技术将编码嵌合抗原受体(car)的基因转导到患者自身的t细胞上，使t细胞获得识别和杀伤肿瘤的新功能。经过体外激活、增殖后，大量car-t细胞被回输到患者体内，可准确定位到肿瘤部位，发挥抗肿瘤作用。

2、car-t细胞治疗的巨大优势在于，它结合了细胞治疗与基因治疗的优点，实现了对免疫细胞功能的精准编程和控制。car结构中包含肿瘤抗原识别域及t细胞激活域，可重新定向t细胞与特定的肿瘤细胞亚群结合，从而发挥杀伤作用。同时，car-t细胞还保留了t细胞的增殖能力，能在体内进行扩增，产生持久的抗肿瘤免疫应答。经过近30年的技术积累，car-t细胞工程化制备平台已经日趋成熟。当前，car-t细胞治疗已经在血液系统肿瘤尤其是淋巴瘤领域显示出强大的临床疗效。

3、但是，car-t细胞体外培养存在增殖能力不足的问题。在car-t细胞体外培养后期，会出现活力下降、增殖停滞的衰竭过程，数量无法达到有效的治疗剂量水平。因此，如何提高car-t细胞的体外增殖能力和活力，是car-t细胞工程化生产过程中亟需解决的问题。

4、gomesin是从蜘蛛毒液中提取出的一种活性化合物，其是一种含有18氨基酸的多肽，其分子量为2292.7da，其氨基酸序列为zcrrlcykqrcvtycrgr（seq id no.1）。gomesin具有广谱的生物活性，如其对多种细菌、真菌和寄生虫都具有杀菌作用。此外，gomesin还具有抗肿瘤活性，可以诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期停滞。然而，目前对于gomesin在调控car-t细胞增殖和影响car-t细胞活性方面的作用了解还很有限。

技术实现思路

1、本发明的目的在于一种用于car-t细胞快速扩增和活性增强的培养基，从而实现car-t细胞在体外的快速扩增并提高其抑肿瘤效果。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

3、首先，本发明提供了一种用于car-t细胞快速扩增和活性增强的培养基，所述培养基包括基础培养基和gomesin，所述gomesin的氨基酸序列如seq id no.1所示。

4、优选地，每1ml所述x-vivo 15培养基中，含有0.9ml基础培养基，0.1ml fbs，300uil-2。

5、优选地，所述培养基中所述gomesin的浓度为大于等于5μg/ml。

6、优选地，所述培养基中所述gomesin的浓度为5μg/ml -625μg/ml。

7、优选地，所述培养基中所述gomesin的浓度为25μg/ml。

8、优选地，所述car-t细胞为cd19-car-t细胞。

9、优选地，所述培养基通过提过增加car-t细胞中穿孔素的表达来增强car-t细胞对于弥漫性巨型b细胞淋巴瘤细胞的杀伤活性。

10、其次，本发明提供了gomesin在制备提高car-t细胞增殖能力的培养基中的应用，所述gomesin的氨基酸序列如seq id no.1所示。

11、优选地，所述gomesin在培养基中的浓度为大于等于5μg/ml。

12、优选地，所述gomesin在培养基中的浓度为5μg/ml -625μg/ml。

13、优选地，所述gomesin在培养基中的浓度为25μg/ml。

14、优选地，所述car-t细胞为cd19-car-t细胞。

15、其次，本发明提供了 gomesin在制备提高car-t细胞杀伤活性的培养基中的应用，所述gomesin的氨基酸序列如seq id no.1所示。

16、优选地，所述gomesin在培养基中的浓度为大于等于5μg/ml。

17、优选地，所述gomesin在培养基中的浓度为25μg/ml。

18、优选地，所述杀伤活性为对于弥漫性巨型b细胞淋巴瘤细胞的杀伤活性。

19、优选地，所述培养基通过提过增加car-t细胞中穿孔素的表达来增强car-t细胞对于弥漫性巨型b细胞淋巴瘤细胞的杀伤活性。

20、优选地，所述car-t细胞为cd19-car-t细胞。

21、本发明的有益效果在于：

22、本发明发现，gomesin可明显促进car-t细胞的体外增殖，并能显著增强其对弥漫性巨型b细胞淋巴瘤细胞的杀伤活性。进一步实验发现，gomesin可能通过上调car-t细胞中的穿孔素表达来实现这一效果。而且，gomesin作为一种天然生物活性物质，对正常细胞无明显毒性作用，而只能特异性增强car-t细胞的增殖和杀伤活性。因此，适当应用gomesin协同car-t细胞治疗，可以显著提高car-t细胞的杀伤效能，从而可以改善疗效，降低复发概率，并且不会增加正常组织的损伤风险。同时，gomesin的应用会使car-t细胞治疗方法更加完善，为血液病患者带来福音。

技术特征：

1.一种用于car-t细胞快速扩增和活性增强的培养基，其特征在于，所述培养基包括基础培养基和gomesin，所述gomesin的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.根据权利要求1所述培养基，其特征在于，每1ml所述基础培养基中，含有0.9ml x-vivo 15培养基，0.1ml fbs，300u il-2。

3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基中所述gomesin的浓度为大于等于5μg/ml。

4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基中所述gomesin的浓度为5μg/ml -625μg/ml。

5.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于，所述培养基中所述gomesin的浓度为25μg/ml。

6.gomesin在制备提高car-t细胞增殖能力的培养基中的应用，其特征在于，所述gomesin的氨基酸序列如seq id no.1所示。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述gomesin在培养基中的浓度为大于等于5μg/ml。

8.gomesin在制备提高car-t细胞杀伤活性的培养基中的应用，其特征在于，所述gomesin的氨基酸序列如seq id no.1所示。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述gomesin在培养基中的浓度为大于等于5μg/ml。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述杀伤活性为对于弥漫性巨型b细胞淋巴瘤细胞的杀伤活性。

技术总结
一种用于CAR‑T细胞快速扩增和活性增强的培养基，属于生物学技术领域。该培养基包括基础培养基和Gomesin，其中基础培养基由X‑vivo 15培养基，FBS，IL‑2组成，Gomesin的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。实验表明，添加Gomesin的培养基可以促进CAR‑T细胞的体外增殖，并显著增强其对肿瘤细胞的杀伤活性。进一步研究发现，Gomesin可能通过上调CAR‑T细胞中的穿孔素蛋白表达来实现这一效果。

技术研发人员：陈义,郑成云,滕藤,孙明辉
受保护的技术使用者：山东博森医学工程技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15