一种制备根内根孢囊霉菌剂的方法

本发明属于微生物领域，具体涉及一种制备根内根孢囊霉菌剂的方法。

背景技术：

1、根内根孢囊霉(rhizophagus intraradices)是一种丛枝菌根真菌(arbuscularmycorrhizal fungi，amf)，它与植物根系形成共生关系。菌丝会穿透植物根系的表皮细胞，形成丛枝菌根结构。这种共生关系能够提供植物所需的矿质养分，特别是磷和氮，而植物则提供光合产物作为真菌的碳源。根内根孢囊霉能够与多种植物形成共生关系，提供矿质养分和促进植物生长。它们可以增加植物根系的吸收面积，改善植物对养分和水分的吸收能力。此外，根内根孢囊霉还能增强植物的抗病性和逆境耐受性。根内根孢囊霉通过分生孢子进行繁殖，这些分生孢子形成在菌丝的末端，聚集在一个球状的结构内，称为孢球，孢球内部的分生孢子通过分裂增殖，直到孢球破裂释放到植物根系中。与其他丛枝菌根真菌依赖土壤繁殖不同，根内根孢囊霉的孢子在根系中也可以侵染其他植物。

2、我国化肥的平均使用量远超国外，这对造成了严重的影响：农田土壤品质下降、农作物品质降低、地下水污染等。因此，在我国发展丛枝菌根真菌菌剂对环境、经济、社会有着重大意义。

3、但是，丛枝菌根真菌是一类严格的共生真菌，无法在实验室进行纯培养，只能依赖活体高等植物根系扩繁，并且存在一定的土壤取用问题，导致大规模扩繁难度较大。目前可用作丛枝菌根真菌生产的价格低廉、大规模的方法主要有盆栽培养法和大田培养法，但是这两种方法又存在着生产周期长、受环境影响因素大、易受本土丛枝菌根真菌污染、菌剂孢子数量少等问题。

技术实现思路

1、本发明要解决现有根内根孢囊霉生产的价格高、大规模的方法存在生产周期长、受环境影响因素大、易受本土丛枝菌根真菌污染、菌剂孢子数量少的问题，从而提供一种新的制备根内根孢囊霉菌剂方法。本发明方法所用培养基价格低廉易获得；而且操作简单，可实验室小规模生产，也可工厂化大量生产；培养容器结构简单高效、成本低；并且无需土壤作为基质，解决了目前根内根孢囊霉扩繁时对土壤的依赖。

2、本发明的一种制备根内根孢囊霉菌剂的方法，所述的方法是按照以下步骤进行的：

3、(1)对根内根孢囊霉菌剂培养基质进行灭菌；

4、(2)取白萝卜种子用20～30℃水搓洗2～3次，再用质量百分含量为0.3％的高锰酸钾溶液浸泡3～4小时，然后用清水冲洗干净，之后再用20～30℃的清水浸种24小时、并冲洗2～3次，催芽，即完成宿主种子处理；

5、(3)将根内根孢囊霉菌剂培养基质放入无土培养育苗盘中，将根内根孢囊霉孢子悬液加入培养基质中，并且将处理好的宿主种子放入育苗盘上层；

6、(4)实验室管理：培养至第4周去除宿主植物的茎叶部分，继续培养到第5周，将白萝卜根与培养基质混匀、风干、造粒，即得到根内根孢囊霉菌剂。

7、进一步地，步骤(1)中所述的根内根孢囊霉菌剂培养基质为水。

8、进一步地，步骤(1)中根内根孢囊霉菌剂中的根内根孢囊霉菌为根内球囊霉hdsf5，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2015年3月11日，保藏编号为cgmccno.10607。

9、进一步地，步骤(3)中所述的加入培养基质的根内根孢囊霉孢子量为20000～25000个/m2。

10、进一步地，步骤(3)中对宿主种子进行催芽，催芽至露白三分之一后，进行菌剂扩繁处理。

11、本发明选择用灭菌自来水作为培养基质，具有易获得、价格低廉、使用方便等优点。

12、本发明对培养容器的深度进行了限定，既能保证5周内宿主植物根系发育，保证了根内根孢囊霉孢子密度，又最大限度减少了对培养基的施用，减少了后续风干所用时间。

13、本发明使用催芽后的白萝卜种子，生根快，能更早的与根内根孢囊霉建立共生关系，提高侵染速度，增加了菌剂中根内根孢囊霉的孢子数量。

14、本发明目前所用丛枝菌根真菌为根内根孢囊霉——原名：根内球囊霉(glomusintraradices)保藏号(cgmcc no.10607)。本发明的根内根孢囊霉是购买自保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2015年3月11日生物根内球囊霉(glomus intraradices)保藏号(cgmcc no.10607)。本发明选用的根内根孢囊霉真菌与其他丛枝菌根真菌不同的是，本发明发现其孢子在根系中能够大量扩繁存在，并且保持活性侵染其他植物，对比其他丛枝菌根真菌将孢子排入根际土壤，具有极大的优势。并且选择白萝卜幼苗作为宿主植物，能与上述真菌形成非常好的共生关系，并且制成菌剂之后，对其他植物有很好的侵染效果。

15、本发明方法具有生产周期短(5周)，而且获得根内根孢囊霉无其他内生真菌污染，菌剂中根内根孢囊霉孢子数量超过1500个/g，具有生产周期短、产量大的优点。

16、本发明方法所用培养基价格低廉易获得；而且操作简单，可实验室小规模生产，也可工厂化大量生产；培养容器结构简单高效、成本低；并且无需土壤作为基质，解决了目前根内根孢囊霉扩繁时对土壤的依赖。由于本发明方法通过对宿主种子和培养基质进行处理，并且原始孢子悬液为纯菌悬液，避免了其他因素对本发明所用根内根孢囊霉的干扰，促进了其产量。并且本发明方法管理方法十分省时省力。

技术特征：

1.一种制备根内根孢囊霉菌剂的方法，其特征在于所述的方法是按照以下步骤进行的：

2.根据权利要求1所述的一种制备根内根孢囊霉菌剂的方法，其特征在于步骤(1)中所述的根内根孢囊霉菌剂培养基质为水。

3.根据权利要求1所述的一种制备根内根孢囊霉菌剂的方法，其特征在于步骤(1)中根内根孢囊霉菌剂中的根内根孢囊霉菌为根内球囊霉hdsf5，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2015年3月11日，保藏编号为cgmccno.10607。

4.根据权利要求1所述的一种制备根内根孢囊霉菌剂的方法，其特征在于步骤(3)中所述的加入培养基质的根内根孢囊霉孢子量为20000～25000个/m2。

5.根据权利要求1所述的一种制备根内根孢囊霉菌剂的方法，其特征在于步骤(3)中无土培养育苗盘长30cm、宽20cm、高5cm。

6.根据权利要求1所述的一种制备根内根孢囊霉菌剂的方法，其特征在于步骤(3)中对宿主种子进行催芽，催芽至露白三分之一后，进行菌剂扩繁处理。

技术总结
一种制备根内根孢囊霉菌剂的方法，它涉及微生物领域，本发明要解决现有根内根孢囊霉生产的价格低廉、大规模的方法存在生产周期长、受环境影响因素大、易受本土丛枝菌根真菌污染、菌剂孢子数量少的问题，从而提供一种新的制备根内根孢囊霉菌剂方法。本发明方法具有生产周期短(5周)，菌剂中根内根孢囊霉孢子数量为200个/g，具有生产周期短、产量大的优点。由于本发明方法通过对宿主种子和培养基质进行处理，并且原始孢子悬液为纯菌悬液，避免了其他因素对本发明所用根内根孢囊霉的干扰，促进了其产量。并且本发明方法管理方法十分省时省力。

技术研发人员：宋福强,石峰,范晓旭,常伟,平原,齐丹丹,李昆,张萌萌
受保护的技术使用者：黑龙江大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15