一种细菌性青枯病生防假单胞菌及其应用的制作方法

本发明涉及农业微生物，具体涉及一种细菌性青枯病生防假单胞菌及其应用。

背景技术：

1、烟草是我国的重要经济作物，因其发展的烤烟产业更是国民经济的重要组成部分，在保障国家经济稳定中占有重要地位。然而，烟草栽培种植过程中病虫害的频发给烤烟产业的稳定造成了严重威胁，其中以青枯病和黑胫病等土传病害尤为严重。由茄科雷尔氏菌(ralstonia solanacearum)侵染引起的烟草细菌性青枯病是一种典型的维管束病害，在烟草整个生育期均可发生。该病原细菌可长期存活于病株残体或在土壤中增殖“等候”合适的环境和寄主，伺机通过根系伤口或自然孔口侵入寄主，通过维管束蔓延至地上部分，甚至全株。茄科雷尔氏菌主要危害烤烟根、茎，导致植株失水萎蔫，呈“青枯”症状。此外，茄科雷尔氏菌分布广、寄主多，还能够侵染包括番茄、辣椒和马铃薯在内的50多个科450余种植物。且病原具有潜伏侵染能力强、易变异的特点，一旦被侵染植株达到发病中期后，该病害几乎无药可治，会对农户造成极大的经济损失。

2、一直以来，烟草青枯病的防治都是烤烟种植过程中面临的一个重大难题。目前，生产上依然主要依赖于农药、抗生素甚至一些土方法(如拌石灰等)用于青枯病的防治。但是，过度依赖于这些手段不仅无法实现青枯病的长期有效防治，还会导致农药、抗生素等的残留，甚至造成病原抗药性的产生以及土壤微生态的失衡。同时，由于烟草青枯病抗源较少，尤其是优质抗源更为罕见，这也严重限制了育种的效果，加之品种选育周期长，无法短期内适应生产需求。因此，探求新的可持续且生态效应良好的防病措施尤为迫切。

3、现代科学让人们更加清晰的认识了微生物的生命形式，也为其开发利用提供了便利。尽管“生物防治”概念最早来源于天地害虫防治作物虫害，但经过数十年的发展，如今微生物源生物防治产品及技术毫无疑问已成为作物病虫害生物防治的主力军。微生物制剂具有一定程度的靶标特异性，具有环境友好、安全无毒等优势，不会对人体健康带来潜在威胁，还能够延缓病虫害抗药性的产生。此外，生防微生物多数来源于作物根际环境、植物组织内生等特定生境，其使用可以最大程度的减少对作物微生物群落及微生态的破坏，有助于更好地维持作物健康。因此，越来越受到国内外研究人员以及新型制剂开发市场的广泛关注。目前，常见的如木霉、链霉菌、芽孢杆菌、假单胞菌等已有诸多产品登记，在植物病虫害防控和土壤微生态改良中发挥关键作用。

4、但是，现有技术中还是面临以下问题：烟草种植过程中频发的土传病害烟草青枯病难以防控。

5、为此，本发明旨在提供一种细菌性青枯病生防假单胞菌及其应用，以解决上述问题。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了解决上述问题，提供了一株生防假单胞菌pseudomonashefeinensis fp205。该菌株对引起烟草青枯病、番茄青枯病、水稻白叶枯病、水稻细菌性条斑病、番茄细菌性溃疡病、小麦纹枯病的病原菌具有明显的抑制作用；经生测，经菌株fp205发酵液灌根处理后，烟草青枯病和番茄青枯病的发病率显著降低，防效分别达到69.2％和58.8％。此外，p.hefeinensis fp205还能够水解无机磷、有机磷，产蛋白酶、铁载体、nh3，分泌iaa等，具备潜在的改良土壤营养和促进作物生长的能力，进一步验证发现菌株能够明显促进烟草生长。因此，菌株fp205是一株可用于烟草青枯病生物防治，且兼具促进植株生长的生防假单胞菌。

2、为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：

3、本发明提供了一种细菌性青枯病生防假单胞菌，所述生防假单胞菌为合肥假单胞菌fp205，所述生防假单胞菌的菌株于2023年6月保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其登记入册编号为cgmcc no.27744；所述生防假单胞菌命名为：p.hefeinensis fp205；所述生防假单胞菌p.hefeinensis fp205具有如seq id no：1所示的16srdna。

4、seq id no：1：

5、agcggcggacgggtgagtaaagcctaggaatctgcctggtagtgggggataacgctcggaaacggacgctaataccgcatacgtcctacgggagaaagcaggggaccttcgggccttgcgctatcagatgagcctaggtcggattagctagttggtgaggtaatggctcaccaaggcgacgatccgtaactggtctgagaggatgatcagtcacactggaactgagacacggtccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattggacaatgggcgaaagcctgatccagccatgccgcgtgtgtgaagaaggtcttcggattgtaaagcactttaagttgggaggaagggcattaacctaatacgttagtgttttgacgttaccgacagaataagcaccggctaactctgtgccagcagccgcggtaatacagagggtgcaagcgttaatcggaattactgggcgtaaagcgcgcgtaggtggttcgttaagttggatgtgaaatccccgggctcaacctgggaactgcattcaaaactgtcgagctagagtatggtagagggtggtggaatttcctgtgtagcggtgaaatgcgtagatataggaaggaacaccagtggcgaaggcgaccacctggactgatactgacactgaggtgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgtcaactagccgttgggagccttgagctcttagtggcgcagctaacgcattaagttgaccgcctggggagtacggccgcaaggttaaaactcaaatgaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggccttgacatccaatgaactttccagagatggragggtgccttcgggaacattgagacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgtaacgagcgcaacccttgtccttagttaccagcacgttatggtgggcactctaaggagactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaagtcatcatggcccttacggcctgggctacacacgtgctacaatggtcggtacagagggttgccaagccgcgaggtggagctaatcccacaaaaccgatcgtagtccggatcgcagtctgcaactcgactgcgtgaagtcggaatcgctagtaatcgcgaatcagaatgtcgcggtgaatacgttccc

6、进一步地，所述的p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物包括下述任一种中的应用：

7、u1、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在预防和/或治疗烟草青枯病中的应用；

8、u2、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在预防和/或治疗番茄青枯病中的应用；

9、u3、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在抑制茄科雷尔氏菌中的应用；

10、u4、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在抑制水稻白叶枯病菌中的应用；

11、u5、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在抑制水稻细菌性条斑病菌中的应用；

12、u6、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在抑制番茄细菌性溃疡病菌中的应用；

13、u7、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在抑制小麦纹枯病菌中的应用；

14、u8、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在改良土壤中的应用；

15、u9、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在水解无机磷中的应用；

16、u10、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在水解有机磷中的应用；

17、u11、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在产生蛋白酶中的应用；

18、u12、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在产生铁载体中的应用；

19、u13、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在产氨中的应用；

20、u14、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在分泌植物生长素(iaa)中的应用；

21、u15、p.hefeinensis fp205或/和p.hefeinensis fp205的代谢物在提高烟草生物量中的应用。

22、进一步地，所述p.hefeinensis fp205的代谢物为p.hefeinensis fp205的发酵液。

23、进一步地，所述p.hefeinensis fp205的发酵液制备方法如下：

24、(1)挑取新鲜培养的菌株p.hefeinensis fp205的单菌落接种于5ml lb液体培养基中，在28℃，200rpm条件下过夜摇培，获得母液；

25、(2)按照1:1000转接到pdb液体培养基中，在相同条件下摇培48h，最终得到菌株fp205的发酵液，其中包含p.hefeinensis fp205菌体及分泌到培养基内的物质，即为p.hefeinensis fp205的代谢物。

26、本发明还提供了一种细菌性青枯病生防假单胞菌的培养物，所述生防假单胞菌p.hefeinensis fp205的培养物为其在各种微生物培养基中培养得到的物质，包括p.hefeinensis fp205的菌体和分泌物。

27、进一步地，所述p.hefeinensis fp205的培养物在以下b1-b14中至少一种中的应用：

28、b1、预防和/或治疗烟草青枯病；

29、b2、预防和/或治疗番茄青枯病；

30、b3、抑制茄科雷尔氏菌；

31、b4、抑制稻黄单胞菌；

32、b5、抑制番茄细菌性溃疡病菌；

33、b6、抑制立枯丝核菌；

34、b7、改良土壤；

35、b8、水解无机磷；

36、b9、水解有机磷；

37、b10、产蛋白酶；

38、b11、产铁载体；

39、b12、产氨；

40、b13、分泌生长素(iaa)；

41、b14、提高烟草生物量。

42、本发明还提供了上述一种细菌性青枯病生防假单胞菌的发酵液的应用，所述p.hefeinensis fp205的发酵液在下述任一种中的应用：

43、c1、所述发酵液在预防和/或治疗烟草青枯病中的应用；

44、c2、所述发酵液在预防和/或治疗番茄青枯病中的应用；

45、c3、所述发酵液在抑制茄科雷尔氏菌中的应用；

46、c4、所述发酵液在抑制稻黄单胞菌中的应用；

47、c5、所述发酵液在抑制番茄细菌性溃疡病菌中的应用；

48、c6、所述发酵液在抑制小麦纹枯病菌中的应用；

49、c7、所述发酵液在改良土壤中的应用；

50、c8、所述发酵液在水解无机磷中的应用；

51、c9、所述发酵液在水解有机磷中的应用；

52、c10、所述发酵液在产生蛋白酶中的应用；

53、c11、所述发酵液在产生铁载体中的应用；

54、c12、所述发酵液在产氨中的应用；

55、c13、所述发酵液在分泌植物生长素(iaa)中的应用；

56、c14、所述发酵液在提高烟草生物量中的应用。

57、上述所述植物为双子叶植物，所述双子叶植物为茄科植物，所述茄科植物可为烟草属植物或茄属植物，所述烟草属植物可为烟草，所述茄属植物可为番茄。

58、与现有技术相比，本方案的有益效果：

59、1、本发明所涉及的菌株p.hefeinensis fp205是一株稳定、高效、广谱的植物防病促生菌，可有效用于烟草青枯病的生物防控；

60、2、本发明的该生防菌株对引起烟草青枯病和番茄青枯病的茄科雷尔氏菌(ralstonia solanacearum)、水稻白叶枯病和水稻细菌性条斑病的病原稻黄单胞菌(xanthomonas oryzae)、番茄细菌性溃疡病菌(clavibacter michiganensesubsp.michiganensis)和小麦纹枯病的病原立枯丝核菌(rhzoctonia solani)等病原细病和病原真菌均具有良好的抑制作用，对烟草青枯病和番茄青枯病的室内防效分别达到69.2％和58.8％。此外，p.hefeinensis fp205还能够水解无机磷、有机磷，产蛋白酶、铁载体、nh3，分泌iaa等，具备潜在的改良土壤营养和促进作物生长的能力，进一步验证发现菌株能够明显促进烟草生长；

61、3、本发明的菌株fp205是一株可用于烟草青枯病生物防治，且兼具促进植株生长的生防假单胞菌。