对叶酸受体1具有特异性的嵌合抗原受体的制作方法

本发明涉及用于治疗癌症，特别是通过使用对肿瘤抗原叶酸受体1(folr1)具有特异性的嵌合抗原受体治疗癌症的过继免疫疗法领域。

背景技术：

1、癌症是一组广泛的涉及恶性细胞的不受调控生长的疾病。在癌症中，细胞不受控制地分裂和生长，形成恶性肿瘤，并侵入附近身体部位。癌症也可通过淋巴系统或血流扩散到更远的身体部位。已知有超过200种不同的癌症会影响人类。许多癌症类型都可获得良好的治疗选择。然而，其他仍然存在着未满足的医疗需求。特别地，卵巢癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、肾癌和胰腺癌为治疗选择有限的恶性肿瘤8。卵巢癌被定义为起源于卵巢的一组肿瘤。卵巢癌是女性中第四大常见癌症，并且是女性中妇科癌症相关死亡的主要原因。大多数临床病例为上皮性卵巢癌，约占诊断患者的90％。上皮性卵巢癌具有四种主要的组织学亚型：浆液性、子宫内膜样、黏液性和透明细胞。约70％的患者呈现出浆液性组织学，并且临床试验证实，患者的亚型具有预后重要性。其他不太常见的卵巢肿瘤类型包括原发性腹膜肿瘤、输卵管肿瘤和恶性生殖细胞肿瘤9。

2、卵巢癌患者的总体五年生存率约为49.1％。与大多数癌症一样，五年生存率可取决于癌症诊断时所处阶段而不同。如果癌症在局部阶段(i-ii阶段)早早发现，则五年生存率为92.6％。已扩散到身体的不同部位的卵巢癌(也称为区域性卵巢癌(iii阶段))具有74.8％的五年生存率。在转移性(iv阶段)卵巢癌中五年生存率进一步降低至30.3％。大多数患者在诊断时呈现为晚期疾病，并且尽管对初始治疗有着高响应，但大多数最终将会复发，患上不治之症9。

3、folr1是一种膜蛋白，其以高亲和力结合叶酸并经由受体介导的内吞作用介导这种维生素的细胞摄取10。叶酸是细胞新陈代谢以及dna合成和修复的基本组分，并且快速分裂的癌细胞对叶酸的需求增加，以维持dna合成。与正常细胞相比，特定上皮源性恶性肿瘤中的folr1水平较高，并且与肿瘤分期和分级呈正相关，这引发了对其在肿瘤病因学和进展中的作用的疑问。已经表明folr1可能通过调节叶酸从血清的摄取或通过产生调控信号而赋予肿瘤生长优势11。

4、嵌合抗原受体(car)为癌症的过继细胞免疫疗法提供了一种有前景的方法。通常，car包含经由间隔区和跨膜区与参与t细胞信号传导的胞质结构域耦合的对肿瘤相关抗原(taa)具有特异性的抗体的单链可变片段(scfv)。最常见的淋巴细胞活化部分包括与t细胞触发(例如cd3ζ)部分结合的t细胞共刺激(例如cd28、cd137、ox40、icos和cd27)结构域。car介导的过继免疫疗法使得表达car的细胞能够以hla非依赖性方式直接识别靶肿瘤细胞上的taa。

5、与化疗结合的手术仍然是护理标准。然而，大多数患者会复发，并最终将发展出对化疗的抗性。因此，卵巢癌有着强烈的未满足医疗需求，并且迫切地需要替代治疗方法，诸如使用表达car的细胞的免疫疗法。特别是对于三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌、肾癌和胰腺癌，鉴定了与肿瘤相关的folr1的高表达，并且因此其代表了car t细胞疗法的一个有前景的靶标。本领域需要对folr1具有特异性的改善或替代car，用于治疗表达folr1的癌症。

技术实现思路

1、细胞表面抗原folr1在癌细胞(诸如三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌、肾癌、胰腺癌或卵巢癌)上表达，并可用于靶向免疫疗法。本发明人发现，经工程化用于表达对folr1具有特异性的嵌合抗原受体的免疫细胞能够在体内和体外杀伤表达folr1的细胞。因此，本发明涉及经工程化用于表达嵌合抗原受体(其中所述car对folr1具有特异性，“folr1-car”)的细胞的过继细胞转移，这导致表达folr1的癌细胞的识别和结合。随后，遗传修饰细胞(即表达car的细胞)执行其特定功能，例如杀伤靶细胞、分泌细胞因子和/或增殖。此外，本发明人出乎意料地发现，与抗folr1-car的其他变体相比，从n末端到c末端包括包含氨基酸序列seqid no:2的抗体的重链可变区(vh)、包含氨基酸序列seq id no:4的抗体的轻链可变区(vl)的抗原结合结构域显示出更优异的杀伤特性(参见实施例2和图17k)。

技术特征：

1.一种嵌合抗原受体(car)，其包含

2.根据权利要求1所述的car，其中所述抗原结合结构域包括包含氨基酸序列seq idno:2的抗体的重链可变区(vh)和包含氨基酸序列seq id no:4的抗体的轻链可变区(vl)。

3.根据权利要求2所述的car，其中所述抗原结合结构域从n末端到c末端包括包含seqid no:2的vh和包含seq id no:4的vl。

4.根据权利要求3所述的car，其中所述抗原结合结构域包含氨基酸序列seq id no:103。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的car，其中所述间隔区包含cd8α的铰链结构域。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的car，其中所述跨膜结构域包含cd8α的跨膜结构域，且其中所述胞内信号传导结构域包含cd137的共刺激结构域和cd3ζ的刺激结构域。

7.根据权利要求6所述的car，其中所述car包含氨基酸序列seq id no:105。

8.一种表达根据权利要求1-7中任一项所述的car的工程化细胞。

9.根据权利要求8所述的工程化细胞，其中所述细胞是免疫细胞。

10.用于免疫疗法的根据权利要求8或9任一项所述的工程化细胞。

11.用于治疗癌症的根据权利要求8-10中任一项所述的工程化细胞，其中所述癌症的癌细胞表达folr1。

12.一种药物组合物，其包含根据权利要求8-9中任一项所述的表达car的工程化细胞。

13.一种核酸序列，其编码根据权利要求1-7中任一项所述的car。

技术总结
本发明提供了一种嵌合抗原受体(CAR)，其包括：对叶酸受体1(FolR1)具有特异性的抗原结合结构域、间隔区、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。此外，发现与其他变体相比，抗原结合结构域显示出更优异的杀伤特性，其从N末端到C末端包括包含氨基酸序列Seq ID No:2的抗体的重链可变区(VH)、包含氨基酸序列Seq ID No:4的抗体的轻链可变区(VL)。

技术研发人员：C·赫贝尔,J·戴格雷
受保护的技术使用者：美天施生物科技有限两合公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/27