抗人ST2的单克隆抗体及其应用的制作方法

本发明涉及生物医药，特别是涉及一种抗人st2的单克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、人可溶性生长刺激表达基因2蛋白(growth stimulation expressed gene 2，st2)，是il-1（白细胞介素1）受体家族成员之一。研究发现，st2可由心脏成纤维细胞和心肌细胞表达，是生物机械应力诱导产生的一种心肌蛋白，其基因表达于肥大细胞、激活的辅助性t细胞2（th2）、巨噬细胞和心肌细胞。人血液中的sst2（soluble st2，可溶型st2）能够竞争性结合il-33，使心肌受累，心脏结构与功能受影响，增加了疾病的发展率。因此，当心力衰竭发生时，sst2水平明显升高，进而增加对心脏的损伤作用，sst2作为新一代心衰标志物，在心衰患者的诊断、治疗及风险预测中发挥着重要作用。

2、基于抗原抗体特异性识别与结合的免疫分析技术在st2的准确、快速检测领域中发挥着重要的作用，比如常见的elisa、荧光免疫层析试纸、胶乳免疫比浊等方法。免疫分析领域中所使用的抗体种类包括多克隆抗体、单克隆抗体以及基于基因工程技术制备的抗体片段、单域重链抗体等。其中，单克隆抗体是由单一b细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。单克隆抗体的制备通常采用杂交瘤细胞技术来制备，例如将鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠b细胞融合，称为杂交瘤细胞，其既具有体外无限繁殖的特点，有具有合成和分泌特异性抗体的特性。

3、如何获得高亲和力、特异性的抗人st2的单克隆抗体，特别是可形成双抗夹心检测功能的单克隆抗体，对于st2的高灵敏、准确检测具有至关重要的作用，也是限制st2的免疫分析方法性能的关键所在。

技术实现思路

1、本发明提供一种抗人st2的单克隆抗体及其应用，以获得高亲和力、特异性的抗人st2的单克隆抗体，特别是可形成双抗夹心检测功能的单克隆抗体。

2、本发明的一方面提供一种抗人st2的单克隆抗体，包括捕获抗体（本发明中简称c11）和检测抗体（本发明中简称d12）；

3、所述捕获抗体包括氨基酸序列：evllqqsgpelvkpgasvkipckasgytftdynmdwvkqshgknlewigdidpnnggtiynqkfkgkatltvdkssstaymelrsltsedsgvyycarfdayfsywyfdvwgagttvtvss（seq id no .1）和氨基酸序列：divltqspaslavslgqratisyrasksvstsgysymhwnqqkpgqpprlliylvsnlesgvparfsgsgsgtdftlnihpveeedaatyycqhirelntfgggtkleik（seq id no.2）；

4、所述检测抗体包括氨基酸序列：qvtlkesgpgilqpsqtlsltcsfsgfslstsgmgvgwirqpsgkglewlahiwwddvkqynpalksrltiskdtsssqvflkiasvdtadiatyycarlggnwdyfdywgqgttltvss（seq id no .15）和divltqspaslvvslgqratiscrasesvdscgvsfmkwlqqkpgqppklliyvaskvesgvparfggsgsgtdfslnihpveeddfavyfcqqsrkvpwtfgggtkleik（seq id no .16）。

5、上述抗人st2的单克隆抗体，其中，编码如seq id no .1所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：gaggtcctgctgcaacagtctggacctgagctggtgaagcctggggcttcagtgaagataccctgcaaggcttctggatacacattcactgactacaacatggactgggtgaagcagagtcatggaaagaaccttgagtggattggagatattgatcctaacaatggtggtactatctacaatcagaagttcaagggcaaggccacattgactgttgacaagtcctccagcacagcctacatggagctccgcagcctgacatctgaggactctggagtctattactgtgcaagatttgatgcttactttagctactggtacttcgatgtctggggcgcagggaccacggtcaccgtctcctca（seq idno .3）；

6、编码如seq id no .2所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：gacattgtgctgacacagtctcctgcttccttagctgtatctctggggcagagggccaccatctcatacagggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggaaccaacagaaaccaggacagccacccagactcctcatctatcttgtatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacattagggagcttaacacgttcggaggggggaccaagctggaaataaaa（seq id no .4）；

7、编码如seq id no .15所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：caggttactctgaaagagtctggccctgggatattgcagccctcccagaccctcagtctgacttgttctttctctgggttttcactgagcacttctggtatgggtgtaggctggattcgtcagccatcagggaagggtctggagtggctggcacacatttggtgggatgatgtcaagcagtataacccagccctgaagagccgactgactatctccaaggatacctccagcagccaggtattcctcaagatcgccagtgtggacactgcagatattgccacatactactgtgctcgattaggcgggaactgggactactttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctca（seq id no .17）；

8、编码如seq id no .16所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：gacattgtgctcacccaatctccggcttctttggttgtgtctctagggcagagggccaccatctcctgcagagccagcgaaagtgttgacagttgtggcgttagttttatgaagtggctccaacagaaaccaggacagccacccaaactcctcatctatgttgcatccaaagtagaatctggggtccctgccaggtttggtggcagtgggtctgggacagacttcagcctcaacatacatcctgtggaggaggatgattttgcagtttatttctgtcagcaaagtaggaaggttccttggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa（seq id no .18）。

9、上述抗人st2的单克隆抗体，其中，所述捕获抗体的重链的互补决定区的氨基酸序列cdr1、cdr2、cdr3分别为：

10、cdr1：gytftdyn（seq id no .5）；

11、cdr2：idpnnggt（seq id no .6）；

12、cdr3：arfdayfsywyfdv（seq id no .7）。

13、所述捕获抗体的轻链的互补决定区的氨基酸序列cdr1为：ksvstsgysy（seq id no.8），所述捕获抗体的轻链的互补决定区的氨基酸序列cdr2为：lvs，所述捕获抗体的轻链的互补决定区的氨基酸序列cdr3为：qhirelnt（seq id no .9）。

14、所述检测抗体的重链的互补决定区的氨基酸序列cdr1、cdr2、cdr3分别为：

15、cdr1：gfslstsgmg（seq id no .19）；

16、cdr2：iwwddvk（seq id no .20）；

17、cdr3：arlggnwdyfdy（seq id no .21）；

18、所述检测抗体的轻链的互补决定区的氨基酸序列cdr1为：esvdscgvsf（seq id no.22），所述检测抗体的轻链的互补决定区的氨基酸序列cdr2为：vas，所述检测抗体的轻链的互补决定区的氨基酸序列cdr3为：qqsrkvpwt（seq id no .23）。

19、上述抗人st2的单克隆抗体，其中，编码如seq id no .5所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：ggatacacattcactgactacaac（seq id no .10）；

20、编码如seq id no .6所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：attgatcctaacaatggtggtact（seq id no .11）；

21、编码如seq id no .7所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：gcaagatttgatgcttactttagctactggtacttcgatgtc（seq id no .12）。

22、编码如seq id no .8所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：aaaagtgtcagtacatctggctatagttat（seq id no .13）；

23、编码氨基酸序列lvs的核苷酸序列为cttgtatcc；

24、编码如seq id no .9所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：cagcacattagggagcttaacacg（seq id no .14）；

25、编码如seq id no .19所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：gggttttcactgagcacttctggtatgggt（seq id no .24）；

26、编码如seq id no .20所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：atttggtgggatgatgtcaag（seq id no .25）；

27、编码如seq id no .21所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：gctcgattaggcgggaactgggactactttgactac（seq id no .26）；

28、编码如seq id no .22所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：gaaagtgttgacagttgtggcgttagtttt（seq id no .27）

29、编码氨基酸序列vas的核苷酸序列为gttgcatcc；

30、编码如seq id no .23所示的氨基酸序列的核苷酸序列为：cagcaaagtaggaaggttccttggacg（seq id no .28）。

31、本发明的另一方面提供了上述抗人st2的单克隆抗体的应用，将所述抗人st2的单克隆抗体以配对方式，采用双抗夹心的方法，检测样本中的st2含量。

32、上述抗人st2的单克隆抗体的应用，其中，所述双抗夹心的方法包括酶联免疫分析法、免疫层析法。

33、有益效果：

34、本发明提供的抗人st2的单克隆抗体，包括捕获抗体和检测抗体，实验结果显示，捕获抗体和检测抗体均对人st2抗原具有高亲和力、特异性的检测活性，所述抗人st2的单克隆抗体可以双抗夹心的方式用于st2的免疫学分析，包括酶联免疫吸附检测、免疫层析等基于抗原-抗体特异性反应的免疫学分析检测类型，对于st2的高灵敏、准确检测具有重要意义。