一种从黑果腺肋花楸果中分离花青素的方法与流程

一种从黑果腺肋花楸果中分离花青素的方法，属于食品。

背景技术：

1、花青素是天然的水溶性色素，存在于橙色，红色，紫色和蓝色的水果、蔬菜和鲜花中。花青素已被报告具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗糖尿病、抗心血管疾病、预防肥胖和低血糖、增强记忆等诸多药理作用。近年来，随着人们对食品安全和自身健康的重视日益提高，并且花青素作为一种天然食用色素，与合成色素相比，具有安全性高、有一定的营养价值和药理作用等优点，所以花青素已经越来越受到消费者和研究者的关注。

2、在黑果腺肋花楸果中提取花青素的过程中会使植物细胞壁遭到破损，细胞壁破碎后，除花青素以外还会有其余的蛋白质、多糖和有机酸等杂质溶出，即得到的提取物均为粗提物。而粗提物中的花青素纯度较低，且多为原花青素低聚体和高聚体的混合物，难以被人体肠道吸收利用。因此，为提高花青素的纯度和促进花青素的被摄取率，发明一种具有高提取率的黑果腺肋花楸果中分离提取花青素的方法，对社会进步与发展具有非常重要的意义。

技术实现思路

1、为了克服现有技术领域存在的上述技术问题，本发明的目的在于，提供一种从黑果腺肋花楸果中分离花青素的方法流程。

2、本发明提供一种从黑果腺肋花楸果中分离花青素的方法，包括以下步骤：

3、步骤（1）黑果腺肋花楸果的粉碎均质处理

4、取一定量的黑果腺肋花楸果，清洗进行破碎均质化处理，将破碎后的原料中加入一定量的纯化水，然后边搅拌边加入稀醋酸调节ph值，在一定温度下搅拌一定时间，得到富含黑果腺肋花楸果的均质混合溶液；

5、步骤（2）黑果腺肋花楸果的预酶解

6、取一定量粉碎均质处理后的黑果腺肋花楸果的混合溶液放于烧杯中，加入一定量的纤维素酶和界面活性剂tween-20，并在一定温度下的恒温水浴中酶解一段时间后，过滤实现固液分离，得到经过预酶解的澄清黑果腺肋花楸果的澄清液；

7、步骤（3）微波协同酶法提取

8、取一定量预酶解后的澄清黑果腺肋花楸果澄清液于烧杯中，继续加入一定量的纤维素酶和菠萝蛋白酶，并在一定的微波功率，微波一段时间后，设置一定的酶解温度，酶解一段时间，经混合溶液在一定转速下离心分离出富含花青素的上清液；

9、步骤（4）柱层析法纯化提取

10、选择合适的固相萃取柱，并使用合适的溶剂进行激活和平衡，取一定离心后提取的富含花青素的上清液加入到固相萃取柱中，待目标化合物被萃取柱吸附后，非目标化合物被洗脱后，目标化合物被洗脱收集，将收集后的花青素溶液通过离心分离、旋转蒸发、干燥后得到纯化提取后的花青素粉末；

11、或者使用超临界萃取仪对富含花青素的上清液进行提取分离，然后干燥得到纯化提取后的花青素粉末；

12、超临界预萃取仪，包括机体和萃取设备，机体上设置有工作腔，萃取设备均匀的安装在工作腔内，萃取设备还包括装夹机构、固定装置和密封装置，机体上设置有多组安装槽，多组固定装置分别穿过对应的安装槽和机体滑动连接，固定装置的底端和工作腔的底端连接，工作腔的左右两端设置有凹槽，密封装置穿过凹槽和机体滑动套装。

13、本发明在通过将萃取瓶放置进工作腔的过程中，萃取瓶按压装夹机构带动装夹机构将其进行装夹，在此过程中，滑动固定装置将其在安装槽内滑动对工作腔内的萃取瓶进行固定，将密封装置和工作腔内的凹槽进行连接将萃取瓶进行密封，以此来在保证设备密封的过程中，提高萃取瓶更换的速度，提高了设备萃取的效率。

14、作为优选，本发明的超临界预萃取仪，装夹机构还包括放置板、弹簧、齿条、齿轮、丝杆和夹块，工作腔的底端设置有滑槽，放置板穿过滑槽和工作腔滑动连接，多组弹簧的顶端均与放置板的底端连接，多组弹簧的底端均与工作腔的底端连接，多组齿条的连接端分别和放置板的左右两端连接，多组齿轮的连接端分别和工作腔的左右两端转动连接，多组齿轮和工作腔贯穿设置有螺纹孔，多组丝杆分别穿过对应的螺纹孔和对应的丝杆螺纹连接且与工作腔滑动连接，多组齿轮的输出端均与对应的齿条的输出端啮合，多组夹块的连接端分别和对应的丝杆的连接端铰接。

15、作为优选，本发明的超临界预萃取仪，固定装置还包括卡板、销子、销块、固定板和碟簧，工作腔和多组安装槽贯穿设置有多组穿透孔，多组固定板分别穿过对应的穿透孔和工作腔滑动连接，多组碟簧均匀的安装在对应的固定板上，多组销块的底端均与安装槽的底端连接，多组销子的顶端分别和对应的卡板的底端连接，多组卡板分别穿过对应的安装槽和机体滑动连接。

16、作为优选，本发明的超临界预萃取仪，密封装置还包括密封盖、顶簧、按钮、连接块和卡块，密封盖的顶端贯穿有连接孔，连接块穿过连接孔和密封盖滑动连接，按钮的底端和连接块的顶端连接，密封盖上设置有多组安装座，多组卡块的连接端分别穿过对应的安装座和密封盖转动连接，多组卡块上均设置有贯穿孔，连接块的多组连接端分别穿过对应的贯穿孔和对应的卡块转动连接，顶簧均匀的安装在连接块上。

17、作为优选，本发明的超临界预萃取仪还包括导轨，多组导轨均匀的安装在对应的安装槽内，多组导轨上均设置有长槽，多组卡板分别穿过对应的长槽和对应的导轨滑动连接。

18、作为优选，步骤（1）黑果腺肋花楸果的粉碎均质处理包括取10~20g黑果腺肋花楸果，清洗进行破碎均质化处理，将破碎后的原料中加入50~100ml的纯化水，然后边搅拌边加入0.1~0.5mol/l的稀醋酸调节ph值至3~6，在40~50℃的温度下搅拌1~2h，得到富含黑果腺肋花楸果的均质混合溶液。

19、本方法中使用破碎后的黑果腺肋花楸果进行花青素的提取，破碎均质化操作能有效的破碎黑果腺肋花楸果细胞中的花青素释放出来，再均质破碎处理后加入适量稀醋酸，调节ph至合适范围，能够有效避免释放出来的花青素，在暴露在空气中不易被空气中的氧气等氧化，提高后续提取花青素的纯度。

20、作为优选，步骤（2）黑果腺肋花楸果的预酶解包括（21）界面活性剂tween-20的制备即取5~10g的将山梨醇加入反应釜中，加热至80~120℃的反应温度；缓慢加入50~100ml氧化乙烯，确保反应温度在80~120摄氏度和压力为1~2个大气压，反应完成后，将产生的tween-20溶液经过蒸馏、过滤等操作，以得到纯净的tween-20。

21、本方法中为了提高预酶解的酶解效果，创造性的在预酶解过程中加入界面活性剂tween-20，通过tween-20的加入可以增加酶与底物的接触面积，提高反应效率，从而提高产物的提纯效率。

22、作为优选，步骤（2）黑果腺肋花楸果的预酶解包括（22）黑果腺肋花楸果的预酶解取20~30ml粉碎均质处理后的黑果腺肋花楸果的混合溶液放于烧杯中，加入剂量为0.1%~0.3%的纤维素酶和1~3gtween-20，并在35~45℃的恒温水浴中酶解1~3h后，过滤实现固液分离，得到经过预酶解的澄清黑果腺肋花楸果的澄清液。

23、本方法中使用纤维素酶对均质处理后的黑果腺肋花楸果混合溶液进行预酶解，其过程能够使混合溶液中的花青素大部分发生酶解，结合后续提取过程中的微波酶解过程中，能够使得花青素在双重酶解以及微波提取过程中更进一步的提高花青素的提取程度。

24、作为优选，步骤（3）微波协同酶法提取包括取10~15ml预酶解后的澄清黑果腺肋花楸果澄清液于烧杯中，继续加入剂量为0.1%~0.3%的纤维素酶和0.1%~0.3%菠萝蛋白酶，并在500~600w微波功率下，微波1~2min，设置35~45℃的酶解温度，酶解1~2h，经混合溶液在3000~4000r的转速下离心分离出富含花青素的上清液。

25、本方法中，创新的使用了预酶解后结合微波协同酶解法提取分离花青素，能够在多重有效的提取过程中提高花青素的提取程度，在微波提取过程中适当的温度和酶解时间都能有效提高提取分离的效果。

26、步骤（4）柱层析法纯化提取包括选择c8固相萃取柱，选用甲醇作为溶剂对固相萃取柱进行激活和平衡，取7~10ml一定离心后提取的富含花青素的上清液加入到固相萃取柱中，萃取1~2h后待目标化合物被萃取柱吸附后，非目标化合物被洗脱，将目标化合物被洗脱收集，然后加入0.1~0.5mol/l的稀醋酸调节ph值至2.5~5，然后将收集后的花青素溶液通过离心分离、旋转蒸发、干燥后得到纯化提取后的花青素粉末。

27、本方法中，使用与花青素极性结合非常好的甲醇作为柱层析的萃取、激活以及平衡的溶剂，能够极大的再一次提高花青素的分离效果。在经过预酶解、微波协同酶解法提取后，再经过柱层析法可对黑果腺肋花楸果的花青素提取的纯度达到85%以上。

28、采用本发明，分离制备的花青素粉末的提取率≥82%，具有制备工艺简单、分离效率高、制备产物纯度高等优点。