一种柑橘木虱唾液蛋白编码基因SGP3及应用

：本发明属于生物，主要涉及一种柑橘木虱唾液蛋白编码基因sgp3及应用。

背景技术：

1、柑橘木虱是我国常见的重要的柑橘害虫，广泛分布于东南亚、印度、巴西、沙特阿拉伯和中国的西南、华南、华东、台湾等地。成虫和若虫在柑橘嫩梢幼叶新芽上吸食为害，引起植物嫩梢幼芽干枯萎缩，新叶畸形卷曲，同时若虫的分泌物常引致煤烟病，导致植物生长受到抑制。柑橘木虱除了直接对柑橘产量产生影响意外，其还是柑橘黄龙病自然传播的唯一媒介。黄龙病侵染柑橘以后会严重影响柑橘的产量和品质，并且目前为止，没有一种有效的方式治疗感染黄龙病的果树，并且随着感病时间的增加(3年左右)，会导致柑橘产量显著降低，并会造成柑橘树死亡。目前，对于柑橘黄龙病的防治主要依靠控制其传播媒介进行，但随着果园内农药的使用加剧，柑橘木虱抗药性的增强，导致柑橘木虱的防控越发困难，进而对果园的产量造成影响。为探究新的抗虫的方法，增加柑橘木虱的防控力度，开展研究柑橘木虱的致死基因的功能和作用对新品种的培育及对柑橘木虱的防控具有重要价值。

2、唾液在昆虫取食过程中发挥着重要作用，其能够协助昆虫取食，例如唾液中的消化酶可以在昆虫取食过程中进行初步的消化、一些解毒酶可以帮助昆虫抵御植物有毒化合物等。在刺吸式口器昆虫取食过程中其唾液成分能够形成唾液鞘帮助固定和润滑口针，还会抑制植物防御等帮助其更好的取食。现阶段的研究显示，昆虫唾液蛋白在昆虫的生长发育过程中起重要作用，昆虫缺失某种蛋白时，会严重影响其生长和繁殖，使其发育变慢种群数量降低。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种柑橘木虱唾液蛋白编码基因sgp3，所述基因的核苷酸序列为seq id no.1所示，其编码的蛋白如seq id no.2所示。该唾液在柑橘木虱生长发育过程中起着重要作用，沉默该基因能显著降低柑橘木虱的存活。

2、本发明另一个目的在于提供一种柑橘木虱唾液蛋白编码基因sgp3在防治柑橘木虱中的应用。

3、优选，是沉默柑橘木虱唾液蛋白编码基因sgp3的制剂在防治柑橘木虱中的应用。

4、优选，所述的制剂是柑橘木虱唾液蛋白编码基因sgp3的双链rna。具体是利用试剂盒合成柑橘木虱sgp3编码基因的双链rna(dsrna)，与纳米材料一起孵育制备复合体，喷施到柑橘叶片上，利用纳米材料能够渗透植物的特性将dsrna递送至柑橘叶片中，使其含有双链rna，柑橘木虱在取食过程中，会摄取到dsrna使其生长和存活受到抑制。

5、本发明的所要保护的内容还包括：编码seq id no.2所示氨基酸的核苷酸序列；含有本发明的柑橘木虱唾液蛋白编码基因sgp3或其orf序列全部及部分序列的重组载体，如原核类载体，真核类表达载体及rnai载体均属于本发明的保护范围，包括但不限于prs314载体，pe×p3300，pbargpe1,pan7-1,pan52-1,pbc-hygro。

6、含有本发明的柑橘木虱唾液蛋白编码基因sgp3或其orf序列全部及部分序列的宿主细胞，如含有上述的重组载体的宿主细胞也属于本发明的保护范围，包括但不限于大肠杆菌细胞、农杆菌细胞ea101,ea105,lba4404、毕赤酵母。

7、本申请利用二代测序技术(solexa hiseq2000)对柑橘木虱唾液腺进行转录组测序及de novo拼接。分析找到柑橘木虱中唾液(salivary gland proteins，sgps)蛋白的候选基因并通过纳米材料递送双链rna的方式使植物含有dsrna，当柑橘木虱取食时会摄取到dsrna达到基因沉默效果，进而降低柑橘木虱的存活率。

8、本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中所提及的唾液蛋白编码基因在柑橘木虱生长发育过程中有重要的作用。

9、与现有技术相比，本发明具有以下优点：

10、本发明所提供的柑橘木虱唾液蛋白基因sgp3是从柑橘木虱中克隆并制备所得，通过纳米材料递送的方式使dsrna进入柑橘叶片，在柑橘木虱取食过程中进入柑橘木虱体内，抑制柑橘木虱的生长，达到防治柑橘木虱的目的。柑橘木虱唾液蛋白基因sgp3是柑橘木虱生长发育过程中重要的蛋白，缺少该蛋白柑橘木虱存活率显著下降，且序列具有较强的靶标特异性对其它种类的昆虫及物种均无杀伤作用。因此本发明为柑橘木虱的防治提供新的方向和理论依据。

技术特征：

1.一种柑橘木虱唾液蛋白编码基因sgp3，其特征在于，所述基因的核苷酸序列为seqid no.1所示。

2.权利要求1所述的柑橘木虱唾液蛋白编码基因sgp3在防治柑橘木虱中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，是沉默柑橘木虱唾液蛋白编码基因sgp3的制剂在防治柑橘木虱中的应用。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的制剂是柑橘木虱唾液蛋白编码基因sgp3的双链rna。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，是利用试剂盒合成柑橘木虱sgp3编码基因的双链rna，再与纳米材料一起孵育制备复合体，喷施到柑橘叶片上，利用纳米材料能够渗透植物的特性将dsrna递送至柑橘叶片中，使其含有双链rna，柑橘木虱在取食过程中，会摄取到dsrna使其生长和存活受到抑制。

技术总结
本发明公开了一种柑橘木虱唾液蛋白编码基因SGP3及应用。一种柑橘木虱唾液蛋白编码基因SGP3，其特征在于，所述基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。本发明所提供的柑橘木虱唾液蛋白基因SGP3是从柑橘木虱中克隆并制备所得，通过纳米材料递送的方式使dsRNA进入柑橘叶片，在柑橘木虱取食过程中进入柑橘木虱体内，抑制柑橘木虱的生长，达到防治柑橘木虱的目的。柑橘木虱唾液蛋白基因SGP3是柑橘木虱生长发育过程中重要的蛋白，缺少该蛋白柑橘木虱存活率显著下降，且序列具有较强的靶标特异性对其它种类的昆虫及物种均无杀伤作用。因此本发明为柑橘木虱的防治提供新的方向和理论依据。

技术研发人员：孟翔,刘豪,欧阳革成
受保护的技术使用者：广东省科学院动物研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/3/4