本发明属于生物，具体涉及一种单克隆抗体及其应用，尤其是抗gm-csf抗体及其应用。
背景技术：
1、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（gm-csf），也被称为集落刺激因子2（csf2），是一种单体糖蛋白，由巨噬细胞、t细胞、肥大细胞、自然杀伤细胞、内皮细胞和成纤维细胞分泌，起着细胞因子的作用。
2、由于gm-csf在免疫系统中的多种激活功能，其可视为抗炎疗法的靶点。诸如类风湿性关节炎(ra)、多发性硬化症(ms)、克罗恩(crohn's)病、牛皮癣、哮喘病、特应性皮炎或休克等慢性及急性炎症性疾病可充分受益于gm-csf活性的阻断及随后gm-csf反应细胞有害活性的降低。鉴于抗gm-csf抗体疗法的巨大潜力，当前急需具有高亲和力的可有效阻断gm-csf/gm-csf受体相互作用的人类抗gm-csf抗体。
技术实现思路
1、本发明共获得了5种抗体，其cdr区序列如下：
2、表1 重链cdr序列
3、
4、表2 轻链cdr序列
5、
6、这5种抗体的重链和轻链序列如下：
7、表3 重链序列
8、
9、表4 轻链序列
10、
11、考虑到某些杂交瘤克隆株不稳定的情况，本发明通过pcr获得抗体可变区序列来保存所需的杂交瘤可变区序列，并通过其他高表达抗体的细胞来进行抗体生产。
12、本发明获得抗体轻重链可变区序列具体操作如下：用trizol裂解候选的杂交瘤克隆株并提取总rna，以此为模板合成第一链cdna后，以第一链cdna为模板进行后续pcr扩增，获得杂交瘤细胞所对应的抗体轻重链可变区的核酸，进行琼脂糖凝胶电泳，切胶回收ta克隆后，进行sanger测序获得抗体可变区序列。
13、具体来说，本发明提供以下技术方案：
14、一方面，本发明提供抗体或其抗原结合片段，其特异性结合gm-csf蛋白，其特征在于，所述抗体包含：
15、hcdr1，其包含seq id no:1或seq id no:4或seq id no:7或seq id no:9或seqid no:12所示的序列，与所述序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列，或由其组成；
16、hcdr2，其包含seq id no:2或seq id no:5或seq id no:10或seq id no:13所示的序列，与所述序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列，或由其组成；
17、hcdr3，其包含seq id no:3或seq id no:6或seq id no:8或seq id no:11或seqid no:14所示的序列，与所述序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列，或由其组成；
18、lcdr1，其包含seq id no:15或seq id no:18或seq id no:21或seq id no:24或seq id no:27所示的序列，与所述序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列，或由其组成；
19、lcdr2，其包含seq id no:16或seq id no:19或seq id no:22或seq id no:25所示的序列，与所述序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列，或由其组成；和
20、lcdr3，其包含seq id no:17或seq id no:20或seq id no:23或seq id no:26或seq id no:28所示的序列，与所述序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列，或由其组成。
21、在一些实施方案中，所述抗体包括选自如下组的序列：
22、（a）如seq id no:1所示的hcdr1，如seq id no:2所示的hcdr2，如seq id no:3所示的hcdr3，如seq id no:15所示的lcdr1，如seq id no:16所示的lcdr2，如seq id no:17所示的lcdr3；
23、（b）如seq id no:4所示的hcdr1，如seq id no:5所示的hcdr2，如seq id no:6所示的hcdr3，如seq id no:18所示的lcdr1，如seq id no:19所示的lcdr2，如seq id no:20所示的lcdr3；
24、（c）如seq id no:7所示的hcdr1，如seq id no:5所示的hcdr2，如seq id no:8所示的hcdr3，如seq id no:21所示的lcdr1，如seq id no:22所示的lcdr2，如seq id no:23所示的lcdr3；
25、（d）如seq id no:9所示的hcdr1，如seq id no:10所示的hcdr2，如seq id no:11所示的hcdr3，如seq id no:24所示的lcdr1，如seq id no:25所示的lcdr2，如seq id no:26所示的lcdr3；和
26、（e）如seq id no:12所示的hcdr1，如seq id no:13所示的hcdr2，如seq id no:14所示的hcdr3，如seq id no:27所示的lcdr1，如seq id no:19所示的lcdr2，如seq id no:28所示的lcdr3。
27、在一些实施方案中，所述抗体选自如下项：
28、（a）抗体，其包含如seq id no：29所示的重链氨基酸序列和如seq id no：34所示的轻链氨基酸序列或由其组成；
29、（b）抗体，其包含与如seq id no：29所示的重链氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列和与如seq id no：34所示的轻链氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列或由其组成；
30、（c）抗体，其包含如seq id no：30所示的重链氨基酸序列和如seq id no：35所示的轻链氨基酸序列或由其组成；
31、（d）抗体，其包含与如seq id no：30所示的重链氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列和与如seq id no：35所示的轻链氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列或由其组成；
32、（e）抗体，其包含如seq id no：31所示的重链氨基酸序列和如seq id no：36所示的轻链氨基酸序列或由其组成；
33、（f）抗体，其包含与如seq id no：31所示的重链氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列和与如seq id no：36所示的轻链氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列或由其组成；
34、（g）抗体，其包含如seq id no：32所示的重链氨基酸序列和如seq id no：37所示的轻链氨基酸序列或由其组成；
35、（h）抗体，其包含与如seq id no：32所示的重链氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列和与如seq id no：37所示的轻链氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列或由其组成；
36、（i）抗体，其包含如seq id no：33所示的重链氨基酸序列和如seq id no：38所示的轻链氨基酸序列或由其组成；
37、（j）抗体，其包含与如seq id no：33所示的重链氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列和与如seq id no：38所示的轻链氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%，优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个（优选1个、2个或3个）保守氨基酸突变（优选置换、插入或缺失）的氨基酸序列或由其组成。
38、在一些实施方案中，所述抗原结合片段选自以下各项组成的组：fab、fab'、f(ab')2、fd、fv、dab、fab/c、互补决定区（cdr）片段、单链抗体、双价抗体、结构域抗体。
39、另一方面，本发明提供多核苷酸，其编码如上所述的抗体或其抗原结合片段。
40、另一方面，本发明提供表达载体，其包含如上所述的多核苷酸。
41、另一方面，本发明提供宿主细胞，其包含如上所述的表达载体，所述宿主细胞是用于表达外源蛋白的宿主细胞，例如细菌、酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞。
42、另一方面，本发明提供药物组合物，其含有如上所述的抗体或其抗原结合片段，以及药用载体。
43、另一方面，本发明提供融合蛋白，其含有如上所述的抗体或其抗原结合片段。
44、另一方面，本发明提供检测样品中gm-csf含量的方法，其特征在于，所述方法包括将样品与如上所述的抗体或其抗原结合片段结合的步骤。
45、另一方面，本发明提供如上所述的抗体或其抗原结合片段在制备检测样品中gm-csf含量的试剂盒中的用途。