一种苏云金芽孢杆菌及其应用的制作方法

本发明涉及水环境治理，具体为一种苏云金芽孢杆菌及其应用。

背景技术：

1、随着经济发展的加速，工业化程度越来越深，含氮等污染物的排放量增加，造成水体污染和富营养化，给农业、生活等水体环境造成的危害不断加剧。氮素污染是水体富营养化的主要原因之一，因此废水中的氮的污染及其控制是主要的污水治理目标之一。

2、在污染水体中，氮元素以大分子有机态氮、氨态氮、硝态氮以及亚硝态氮等多种形式存在，其中而氨态氮是主要的存在形式之一，尤其是有机废水中，例如水产养殖水体、生活污水、食品加工企业的污水、畜禽养殖业产生的冲洗废水等。因此，加强废水脱氮的研究和应用显得尤为重要。

3、近年来，生物法去除废水中的高浓度氨氮越来越受到人们的关注。多种细菌被筛选出应用于消除高浓度氨氮的研究和应用报道。例如光合细菌、硝化细菌、酵母菌、丝状真菌及芽孢杆菌等均对养殖水体中的氨氮具有较强的降解能力。但是，光合细菌在培养、应用条件(温度、ph等)等方面要求较高，使用中受到一定的限制。硝化细菌通过典型的硝化反应、反硝化反应最终完成脱氮。但是，硝化细菌是自养型微生物，生长速度慢。异养型微生物可以较短的时间内，例如有的菌在几十分钟内即可完成菌数倍增，而硝化细菌则需要在1-2天内才能完成。此外，硝化细菌对水环境要求高，适合在有机物浓低的水体中生存，水中过量的有机物抑制硝化细菌的生长繁殖，导致该菌对水质的快速恶化问题难以快速适应。因此，硝化细菌不适用于在高密度养殖、污水处理要求高、负荷大等现代工业化条件下的污水的高效脱氮处理。

4、苏云金芽孢杆菌是常作为用于农业害虫防治的一种杀虫微生物，也被用于重金属、农药和石油衍生物等有毒有害污染物的生物修复。近年来，苏云金芽孢杆菌的消除氮的能力也受到了关注。在高浓度氨氮的情况下，一些细菌的生长会受到抑制，但是苏云金芽孢杆菌在此方面有独特生长优势。一项研究发现，从养牛场消化池中分离出的苏云金芽孢杆菌em-a1，可有效消除100mg/l的无机氮，最大nh4+-n、no3--n和no2-n消除率分别为4.88、2.57和3.06mg/l/h(chenyu d,tengxia h.bacillus thuringiensis em-a1:a novelbacterium for high concentration of ammonium elimination with low nitriteaccumulation.[j].chemosphere,2023,338.)。另外，苏云金芽孢杆菌也被开发应用于高盐度有机废水的生化治理(合肥工业大学.一种苏云金芽孢杆菌的分离纯化及其驯化方法与用途:cn201010182472.5[p].2010-10-13.)。

5、因此，开发利用新型的氨氮降解菌，例如苏云金芽孢杆菌，值得探索。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种苏云金芽孢杆菌及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种苏云金芽孢杆菌；

3、拉丁名称：bacillus thuringiensisluy3；

4、保藏机构：中国典型培养物保藏中心(武汉)；

5、保藏机构地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号；

6、保藏编号为：cctcc m 20231033；

7、保藏日期：2023年06月15日。

8、优选的，该苏云金芽孢杆菌制备包括以下步骤：

9、s1、样品采集，从各个鱼塘水体、养殖废水中取样，以降氨氮和亚硝酸盐为指标，筛选并分离培养微生物；

10、s2、准备培养基，根据不同的配方准备培养基：

11、菌株活化、常规培养基：lb培养基(g/l)：

12、

13、

14、实验中培养基配方：

15、无机盐配方(g/l)：

16、 成分 nacl k2hpo4 mgso4 含量 5 15 5

17、富集培养基一(g/l)：

18、 成分 glu (nh4)2so4 无机盐(ml) 含量 10 2 100

19、富集培养基二(g/l)：

20、 成分 glu (nh4)2so4 无机盐(ml) 含量 5 4 100

21、分离培养基(g/l)：

22、 成分 glu (nh4)2so4 无机盐(ml) 琼脂 含量 0.5 0.75 100 20

23、s3、菌株分离，菌株分离方法包括：

24、s3.1、第一阶段富集培养，取含有微生物的水样，在富集培养基一中进行富集培养，富集培养体积100ml/瓶，每种水样各接2瓶，每瓶接种5ml水样，放入37℃，180rpm摇床培养24h；

25、s3.2、第二阶段富集培养，在富集培养基二中进行富集培养基，取第一阶段富集培养的含菌液体加入到富集培养基二中。培养体积100ml/瓶，样品编号与富集培养基一中是一一对应，分别接种富集培养基一5ml，放入37℃，180rpm摇床培养24h；

26、s3.3、分离培养-涂布平板法，固体培养基，倒平板后，冷却，直接接入100μl富集培养基二，进行涂布，涂布均匀后放入37℃培养箱中培养24h。长出混合菌落，单菌落；

27、s3.4、分离培养-单菌落分离，挑取分离培养基中获得的单菌落，在分离培养基平板划线，培养12-24h后，再挑取单菌落接种于分离培养基，获得纯培养，菌株编号luy3，进行超低温冰箱保存，同时进行菌种鉴定；

28、s4、菌种鉴定，菌株luy3进行16s rdna测序。

29、苏云金芽孢杆菌应用于养殖废水、城市生活污水等高氨氮污水治理。

30、与现有技术相比，本发明提供了一种苏云金芽孢杆菌及其应用，具备以下有益效果：该苏云金芽孢杆菌及其应用，从水体等样品中分离出氨氮去除菌，该菌投入到污水中后，可以利用污水的中的氨氮、含氮物质以及其他有机物作为营养源实现菌体的不断生长繁殖，同时促进水体生态系统中微生物菌群的形成，进而对水体中的含氮有机物分解，降低水体的氨氮含量，达到净化水质的效果。