一种新的荷叶碱制备方法

本发明属于生物提取，具体是一种新的荷叶碱制备方法。

背景技术：

1、荷叶碱是荷叶中的药效成分，具有多种活性，在食品、医药、化妆品领域具有广阔的应用前景。荷叶碱的精制，通常需要使用特殊的分离设备，如制备液相色谱和逆流色谱等，生产成本较高，不适合规模化生产。冷却结晶是一种常用的分离纯化技术，无需特殊设备，具有操作简便、生产成本低等特点，更适合高纯度荷叶碱的规模化生产，但易受杂质含量影响（晶体的形成和整体生长速率）。因此在结晶之前，应尽可能去除杂质（如色素、多酚和多糖等）。发明申请人之前提出的荷叶碱制备方法（申请号cn202210172526.2和cn202210935928.3），正是基于冷却结晶技术进行整体工艺设计的结果。该方法集成了双相溶剂提取（tpse）、固相萃取（spe）和ph依赖液-液萃取（phlle）三项提纯技术，将荷叶碱的纯度由原料中的0.4%提升至80%左右，满足了冷却结晶对于原料纯度的要求。

2、尽管目前我们在这方面的研究已经取得了一些进展，但离荷叶碱的规模化生产还有一段距离。首先，提取环节存在相分离困难、溶剂损失大等问题。众所周知，原料的特征（如粒度和结构等）与提取效率密切相关，一般情况下，粒径越小，表面/体积比越大，提取率越高。此前的研究中，为了获得高提取率，发明申请人选用荷叶粉末为原料，为了减少溶剂挥发损失，选用超声、涡旋为辅助提取技术。双相溶剂提取时，不管选用何种有机溶剂，乳化问题均较为严重，需要长时间静置或离心加以辅助才能实现固-液-液分层，这给今后的规模化生产带来了不便（耗时较长或需要配备氮气保护的防爆离心机，且需要频繁出渣）。如果改用荷叶饮片为原料，以双相溶剂为提取溶剂，超声、涡旋辅助提取的效果极不理想，改用热回流辅助提取后，虽然也能获得不错的提取率，特别是当有机溶剂为比水密度大的碳酸二甲酯时，提取率可达95%（提取条件：荷叶/碳酸二甲酯/5%氨水，1/20/20，w/v/v，1 h，提取1次），但溶剂损失（挥发及残留在药渣和水相中）极大（~20%），后者更是直接限制了药渣的进一步利用和处置（如被用作饲料和肥料或被填埋等）。其次，spe环节存在耗时长、易堵柱、溶剂挥发损失大等问题。上样过程中，脂溶性杂质易在spe柱上段积聚成块，需要不时用玻璃棒搅动才能防止spe柱堵塞；上样速度不宜过快，否则影响吸附，造成上样时间较长，溶剂挥发损失严重。

3、因此，为了满足食品、医药、化妆品工业对于荷叶碱的需求，亟需开发更适合大规模生产的新方法。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种新的荷叶碱制备方法。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种新的荷叶碱制备方法，包括以下步骤：

4、1）取荷叶置于提取容器中，加入一定量的水，热回流辅助提取一定时间，与此同时，以一定流速，将提取液泵入装有一定量大孔树脂的柱中，并将流出物接入提取容器中，以一定量的乙醇为洗脱溶剂洗脱大孔树脂柱，收集洗脱液，减压浓缩至干，即得ebae提取物；

5、2）取ebae提取物，加入一定量的乙酸乙酯和一定浓度的氨水溶液，振摇后静置，分取乙酸乙酯层，即得phlle提取物1；

6、3）取phlle提取物1，加入一定量的一定浓度的盐酸溶液调节ph值，振摇后静置，分取水层，即得phlle提取物2；

7、4）取phlle提取物2，加入一定量的一定浓度的氢氧化钠溶液调节ph值，并加入一定量的石油醚进行萃取，分取有机层，减压浓缩至干，即得phlle最终提取物；

8、5）取phlle最终提取物，加入一定量的乙酸乙酯，采用冷却结晶法进行结晶，过滤，即得荷叶碱粗品；

9、6）取荷叶碱粗品，加入一定量的乙酸乙酯，采用冷却结晶法进行重结晶，过滤分离晶体，减压干燥，即得荷叶碱纯品。

10、优选的，步骤1）所用大孔树脂型号为d101、dm130、ab-8、hpd400、hpd5000、hp20中的一种或几种的混和物，更优选的，步骤1）所用大孔树脂型号为hpd5000。

11、优选的，步骤1）所用荷叶与大孔树脂的比例为1/0.5~1/3（w/w），更优选的，步骤1）所用荷叶与大孔树脂的比例为1/2（w/w）。

12、优选的，步骤1）所用荷叶与水的比例为1/10~1/50（w/v），更优选的，步骤1）所用荷叶与水的比例为1/20（w/v）。

13、优选的，步骤1）所用流速为1~9个循环/h（按照泵流速/提取溶剂体积计算），更优选的，步骤1）所用流速为7.5个循环/h。

14、优选的，步骤1）所用提取时间为2~8 h，更优选的，步骤1）所用提取时间为5 h。

15、优选的，步骤1）所用洗脱溶剂乙醇用量为4~10个柱体积，更优选的，步骤1）所用洗脱溶剂乙醇用量为7个柱体积。

16、优选的，步骤2）所用氨水溶液的浓度为0.25%~25%，更优选的，步骤2）所用氨水溶液的浓度为1%。

17、优选的，步骤2）所用ebae提取物与氨水溶液的比例为1/1~1/20（w/v），更优选的，步骤2）所用ebae提取物与氨水溶液的比例为1/5（w/v）。

18、优选的，步骤2）所用ebae提取物与乙酸乙酯的比例为1/5~1/30（w/v），更优选的，步骤2）所用ebae提取物与乙酸乙酯的比例为1/10（w/v）。

19、优选的，步骤3）所用盐酸溶液的浓度为0.01 mol/l~10 mol/l，更优选的，步骤3）所用盐酸溶液的浓度为0.1 mol/l。

20、优选的，步骤3）所用phlle提取物1与盐酸溶液的比例为1/0.5~1/3（v/v），更优选的，步骤3）所用phlle提取物1与盐酸溶液的比例为1/1.5（v/v）。

21、优选的，步骤4）所用氢氧化钠溶液的浓度为0.1 mol/l~10 mol/l，更优选的，步骤4）所用氢氧化钠溶液的浓度为10 mol/l。

22、优选的，步骤4）所用phlle提取物2与石油醚的比例为1/0.5~1/5（v/v），更优选的，步骤4）所用phlle提取物2与石油醚的比例为1/3（v/v）。

23、本发明的有益效果如下：本发明基于扩张床提取-ph依赖液液萃取-冷却结晶集成创新技术，构建一种新的荷叶碱制备方法，解决原有荷叶碱制备方法中存在的关键技术问题，为荷叶碱的规模化生产扫清障碍。与已有的制备方法相比，本方法更易于大规模生产。

技术特征：

1.一种新的荷叶碱制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

2.根据权利要求1所述的一种新的荷叶碱制备方法，其特征在于：所述的步骤1）所用大孔树脂型号为d101、dm130、ab-8、hpd400、hpd5000、hp20中的一种或几种的混和物。

3.根据权利要求1所述的一种新的荷叶碱制备方法，其特征在于：所述的步骤1）所用荷叶与大孔树脂的重量比例为1/0.5~1/3，步骤1）所用荷叶与水的重量体积比例为1/10~1/50。

4.根据权利要求1所述的一种新的荷叶碱制备方法，其特征在于：所述的步骤1）所用流速为1~9个循环/h。

5.根据权利要求1所述的一种新的荷叶碱制备方法，其特征在于：所述的步骤1）所用提取时间为2~8 h。

6.根据权利要求1所述的一种新的荷叶碱制备方法，其特征在于：所述的步骤1）所用洗脱溶剂乙醇用量为4~10个柱体积。

7.根据权利要求1所述的一种新的荷叶碱制备方法，其特征在于：所述的步骤2）所用氨水溶液的浓度为0.25%~25%。

8.根据权利要求1所述的一种新的荷叶碱制备方法，其特征在于：所述的步骤2）所用ebae提取物与氨水溶液的重量体积比例为1/1~1/20，步骤2）所用ebae提取物与乙酸乙酯的重量体积比例为1/5~1/30。

9.根据权利要求1所述的一种新的荷叶碱制备方法，其特征在于：所述的步骤3）所用盐酸溶液的浓度为0.01 mol/l~10 mol/l，步骤3）所用phlle提取物1与盐酸溶液的体积比例为1/0.5~1/3。

10.根据权利要求1所述的一种新的荷叶碱制备方法，其特征在于：所述的步骤4）所用氢氧化钠溶液的浓度为0.1 mol/l~10 mol/l，步骤4）所用phlle提取物2与石油醚的体积比例为1/0.5~1/5。

技术总结
本发明本发明提供了一种新的荷叶碱制备方法，本发明基于扩张床提取‑pH依赖液液萃取‑冷却结晶集成创新技术，构建一种新的荷叶碱制备方法，解决原有荷叶碱制备方法中存在的关键技术问题，为荷叶碱的规模化生产扫清障碍。与已有的制备方法相比，本方法更易于大规模生产。

技术研发人员：施琦渊,徐嘉欢,柴佳琴,施菁,褚建波,崔勤敏
受保护的技术使用者：杭州医学院
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12