一种多肽、抗光老化多肽及其应用的制作方法

本发明属于生物医药，尤其涉及一种多肽、抗光老化多肽及其应用。

背景技术：

1、根据中国香精香料化妆品工业协会发布数据表明，目前女性最关心、最热门的项目服务依次是：抗衰老保养、祛斑与增白。其中，抗衰老提及率达72.2％，从抗衰老消费人群的基本属性上可以看到，目前以女性消费群体为主，占比高达72％。随着抗衰理念逐步年轻化，抗衰消费者年龄结构向两端延伸，对抗不同等级衰老症状的需求将持续增长。

2、皮肤衰老是指皮肤组织在内外环境的不断作用下细胞结构和功能发生退化，出现皮肤质地改变(如弹性、张力等)、色素改变、血管萎缩或增生的生理现象，通常分为内源性老化(自然老化)和外源性老化(光老化等)。

3、阳光对皮肤的影响是深远的，被认为占外源性皮肤老化的90％。周期性和持续暴露于紫外线(uv)辐射是导致皮肤老化的经典和关键因素，称为光老化。光老化的特征是皱纹、炎症、色素沉着、下垂和干燥。虽然uvb仅占总紫外线辐射的一小部分，但它在损伤皮肤表皮和真皮方面最活跃。一些研究报告了uvb照射会增加细胞内活性氧(ros)，例如超氧阴离子，羟基自由基和过氧化氢。ros刺激各种信号通路并启动生物过程，包括细胞死亡、细胞衰老和炎症。目前已有不少肽分子已被发现具有很好的抗氧化活性，但具有抗光老化多肽仍很少。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种多肽、抗光老化多肽及其应用。

2、本发明提供了一种多肽，所述多肽具有：

3、(i)如式i所示的氨基酸序列；

4、xx1-xx2-xx3-xx4-xx5-xx6-xx7-xx8-xx9-xx10式i；或

5、(ii)如式i所示氨基酸序列经缺失、替换、添加和/或修饰一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与如式i所示氨基酸序列功能共同的氨基酸序列；或

6、(iii)与(i)或(ii)所述所氨基酸序列具有80％以上同源性的氨基酸序列；

7、其中，xx1为碱性氨基酸或其对应的d型氨基酸；

8、xx2与xx3各自独立地为酸性氨基酸、含酰胺基氨基酸、酸性氨基酸对应的d型氨基酸或含酰胺基氨基酸对应的d型氨基酸；

9、xx4、xx6与xx7各自独立地为芳香族氨基酸或其对应的d型氨基酸；

10、xx5与xx9各自独立地为含羟基氨基酸、含硫氨基酸、含羟基氨基酸对应的d型氨基酸或含硫氨基酸对应的d型氨基酸；

11、xx8为疏水氨基酸、疏水氨基酸对应的d型氨基酸或疏水氨基酸的甲基化氨基酸；

12、xx10为含羟基氨基酸、含硫氨基酸、含羟基氨基酸对应的d型氨基酸、含硫氨基酸对应的d型氨基酸或上述氨基酸的羧酸端酰胺化。

13、通过细胞实验发现，本发明提供的多肽均能显著抑制紫外光诱导的斑马鱼模式生物尾鳍皱缩、炎症因子释放及氧化应激反应，表明本发明的化学合成多肽具有潜在的抗皱和舒缓功效；同时所述多肽，具有细胞毒性弱，易被人体吸收等优点，在制备具有抗皱、舒缓等功效护肤品中具有较大的应用前景。

14、本发明提供了一种抗光老化多肽，所述抗光老化多肽具有：

15、(i)如式i所示的氨基酸序列；

16、xx1-xx2-xx3-xx4-xx5-xx6-xx7-xx8-xx9-xx10式i；或

17、(ii)如式i所示氨基酸序列经缺失、替换、添加和/或修饰一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与如式i所示氨基酸序列功能共同的氨基酸序列；或

18、(iii)与(i)或(ii)所述所氨基酸序列具有80％以上同源性的氨基酸序列；

19、其中，xx1为碱性氨基酸或其对应的d型氨基酸；

20、xx2与xx3各自独立地为酸性氨基酸、含酰胺基氨基酸、酸性氨基酸对应的d型氨基酸或含酰胺基氨基酸对应的d型氨基酸；

21、xx4、xx6与xx7各自独立地为芳香族氨基酸或其对应的d型氨基酸；

22、xx5与xx9各自独立地为含羟基氨基酸、含硫氨基酸、含羟基氨基酸对应的d型氨基酸或含硫氨基酸对应的d型氨基酸；

23、xx8为疏水氨基酸、疏水氨基酸对应的d型氨基酸或疏水氨基酸的甲基化氨基酸；

24、xx10为含羟基氨基酸、含硫氨基酸、含羟基氨基酸对应的d型氨基酸、含硫氨基酸对应的d型氨基酸或上述氨基酸的羧酸端酰胺化。

25、本发明通过细胞实验发现，所述多肽均能显著抑制光诱导的haca t人永生化表皮细胞的活性氧释放，表明本发明的化学合成多肽具有潜在的抗氧化和促进胶原蛋白再生的功效；同时所述多肽具有细胞毒性弱，抗光老化的作用，在医美领域具有较大的应用前景。

26、本发明中所述的多肽是指由氨基酸通过肽键相连构成的一类化合物，是不限于氨基酸数目的产物。

27、本发明中对多肽式i所示的氨基酸序列进行氨基酸缺失、替换、添加和/或修饰可以分别进行，也可以通式进行，可以在同一氨基酸位置进行，也可以在不同氨基酸位置进行。

28、本发明所述的氨基酸位置是指在多肽的氨基酸序列中，由氨基端向羧基端依次排列的氨基酸所在的位置数，但氨基酸位置是相对的，当氨基酸序列中进行氨基酸缺失或添加时，氨基酸的位置可能发生变化，这种变化可以由本领域技术人员确定。

29、具体的，在本发明中，多肽的氨基端为xx1端，羧基端为xx10端。

30、具体的，本发明中所述的缺失为xx1、xx2、xx3、xx4、xx5、xx6、xx7、xx8、xx9与xx10中任何一个或两个的缺失。

31、本发明中所述替换和/或添加的氨基酸包括天然氨基酸和非天然氨基酸，其中，天然氨基酸是指自然界存在的氨基酸，非天然氨基酸包括d型氨基酸及其他人工合成的氨基酸。

32、具体的，本发明中所述替换为同类型氨基酸的相互替换。

33、本发明中所述化学修饰是在多肽水平中，使用合适的修饰方法和修饰剂对其进行化学修饰，具体可由本领域技术人员以常规方式确定。

34、具体的，本发明中所述修饰为xx1的氨基与乙酰基、甲酰基或甲磺酰形成酰胺键。

35、具体的，本发明中所述xx1为arg、lys、his、d-his、d-arg或d-lys。

36、具体的，本发明中所述xx2与xx3各自独立地为asp、asn、glu、gln、d-asp、d-asn、d-glu或d-gln。

37、具体的，本发明中所述xx4、xx6与xx7各自独立地为tyr、phe、trp、d-tyr、d-trp或d-phe。

38、具体的，本发明中所述xx5与xx9各自独立地为ser、thr、cys、d-ser、d-thr或d-cys。

39、具体的，本发明中所述xx8为leu、ile、gly、aib、met、ala、d-leu、d-ile、d-gly、d-met或d-ala。

40、具体的，本发明中所述xx10为ser、thr、cys、d-ser、d-thr、d-cys、ser-nh2、thr-nh2、cys-nh2、d-ser-nh2、d-thr-nh2或d-cys-nh2。

41、在本发明提供的一些具体的实施方案中，所述抗光老化多肽具有如分子1～分子43中任一项所示的氨基酸序列：

42、分子1：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.1所示；

43、分子2：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-phe-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.2所示；

44、分子3：h-lys-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.3所示；

45、分子4：h-d-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.4所示；

46、分子5：h-arg-asp-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.5所示；

47、分子6：h-arg-asn-asn-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.6所示；

48、分子7：h-arg-asn-asp-tyr-thr-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.7所示；

49、分子8：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-thr-thr-nh2，如seq id no.8所示；

50、分子9：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-ser-nh2，如seq id no.9所示；

51、分子10：h-arg-asn-asp-tyr-cys-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.10所示；

52、分子11：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-cys-thr-nh2，如seq id no.11所示；

53、分子12：h-arg-asn-asp-tyr-cys-tyr-trp-leu-cys-thr-nh2，如seq id no.12所示；

54、分子13：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-cys-nh2，如seq id no.13所示；

55、分子14：h-arg-asn-asp-phe-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.14所示；

56、分子15：ac-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.15所示；

57、分子16：h-arg-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.16所示；

58、分子17：h-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.17所示；

59、分子18：h-arg-asn-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.18所示；

60、分子19：h-arg-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.19所示；

61、分子20：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-thr-nh2，如seq id no.20所示；

62、分子21：h-d-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.21所示；

63、分子22：h-arg-d-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.22所示；

64、分子23：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-d-thr-nh2，如seq id no.23所示；

65、分子24：h-arg-asn-d-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2，如seq id no.24所示；

66、分子25：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-aib-ser-thr-nh2，如seq id no.25所示；

67、分子26：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-oh，如seq id no.26所示；

68、分子27：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-phe-leu-ser-thr-oh，如seq id no.27所示；

69、分子28：h-lys-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-oh，如seq id no.28所示；

70、分子29：h-d-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-oh，如seq id no.29所示；

71、分子30：h-arg-asp-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-oh，如seq id no.30所示；

72、分子31：h-arg-asn-asn-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-oh，如seq id no.31所示；

73、分子32：h-arg-asn-asp-tyr-thr-tyr-trp-leu-ser-thr-oh，如seq id no.32所示；

74、分子33：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-thr-thr-oh，如seq id no.33所示；

75、分子34：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-ser-oh，如seq id no.34所示；

76、分子35：h-arg-asn-asp-tyr-cys-tyr-trp-leu-ser-thr-oh，如seq id no.35所示；

77、分子36：h-arg-asn-asp-tyr-cys-tyr-trp-leu-cys-thr-oh，如seq id no.36所示；

78、分子37：h-arg-asn-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-oh，如seq id no.37所示；

79、分子38：h-arg-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-oh，如seq id no.38所示；

80、分子39：h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-thr-oh，如seq id no.39所示；

81、分子40：h-d-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-oh，如seq id no.40所示；

82、分子41：h-arg-d-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-oh，如seq id no.41所示；

83、分子42：h-arg-d-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-met-ser-thr-oh，如seq id no.42所示；

84、分子43：h-arg-d-asn-asn-tyr-ser-tyr-trp-met-ser-thr-oh，如seq id no.43所示。

85、本发明提供的多肽可以抑制受到uvb辐射的细胞中ros的释放，从而减少细胞损伤，并且该多肽为合成多肽，具有稳定性好，细胞毒性弱，易制备等优点，在制备具有抗光老化功效的护肤品中具有较大的应用前景。

86、本发明中上述的多肽或抗光老化多肽为合成多肽，可按照本领域技术人员通用的化学合成方法进行合成即可。

87、具体的，本发明采用固相合成的方法制备上述的多肽或抗光老化多肽。

88、在本发明提供的一些具体的实施例方法中，根据多肽或抗光老化多肽的氨基酸序列，使用多肽合成仪合成。

89、本发明还提供了一种上述的多肽或抗光老化多肽在制备具有抗光老化的药物和/或化妆品中的应用。

90、具体的，所述多肽或抗光老化多肽通过抑制细胞ros释放来实现抗光老化的作用。

91、所述的多肽或抗光老化多肽在制备具有细胞抗光老化的药物和/或化妆品中的应用。

92、具体的，所述多肽或抗光老化多肽通过抑制细胞ros释放来实现细胞抗光老化的作用。

93、本发明还提供了一种上述的多肽或抗光老化多肽在制备用于细胞修复的药品、化妆品或细胞培养基质中的应用。

94、本发明还提供了一种上述的多肽或抗光老化多肽在制备促进细胞胶原生成的药品、化妆品或细胞培养基质中的应用。

95、本发明还提供了一种上述的多肽或抗光老化多肽在制备用于皮肤光老化损伤的组织再生和修复的产品中的应用。

96、本发明还提供了一种上述的多肽或抗光老化多肽在制备抗紫外辐射、抗氧化和/或抗衰老的药物和/或化妆品中的应用。

97、本发明还提供了一种上述的多肽或抗光老化多肽在制备治疗和/或于防氧化损伤疾病的药物和/或化妆品中的应用。

98、本发明还提供了一种上述的多肽或抗光老化多肽在制备用于抗皱的药物和/或化妆品中的应用。

99、本发明还提供了一种上述的多肽或抗光老化多肽在制备用于舒缓的药物和/或化妆品中的应用。

100、本发明还提供了一种上述的多肽或抗光老化多肽在制备用于抑制炎症因子生成的药物和/或化妆品中的应用。

101、本发明还提供了一种上述的多肽或抗光老化多肽在制备用于皮肤炎症损伤修复的产品中的应用。

102、在本发明中，上述的化妆品具体为护肤品。

103、具体的，本发明中所述氧化包括并不限于活性氧(ros)，包括超氧化物(o2·-)、羟基(ho·)、过氧(roo·)、烷氧基(ro·)和一氧化氮(no·)。

104、在本发明提供的一些具体的实施方案中，将所述多肽添加到细胞培养基中，测定多肽处理后被uvb辐射细胞的ros释放量，结果表明所述多肽均表现出显著抑制ros释放的能力，表明所述多肽具有潜在抗光老化的作用。

105、在本发明提供的一些具体的实施方案中，将市售的多肽与arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2在抗光老化试验中均进行了haca t细胞uvb辐射处理，结果发现市售多肽的ros释放显著高于未处理组别，而应用arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2处理后发现其具有显著抑制ros释放活性。

106、在本发明提供的一些具体的实施方案中，通过对多肽分子库的实体筛选测试，获取具有高抗光老化活性的多肽，通过光老化细胞模型的复测，筛选出具有高活性的抗光老化多肽如序列h-arg-asn-asp-tyr-ser-tyr-trp-leu-ser-thr-nh2。