一株简单芽胞杆菌CYG04及其应用的制作方法

本发明属于微生物生防菌领域，具体涉及一株简单芽胞杆菌cyg04及其应用。

背景技术：

1、茶树多生长在温暖、湿润的热带和亚热带地区，这些地区的气候也有利于茶树病害的滋生。茶饼病和轮斑病是茶叶的两种重要病害，在全世界茶叶种植区均有报道，在我国茶区也普遍发生，可造成茶叶大幅度减产，品质下降，严重影响茶叶生产。其中，其中，茶饼病病原菌为坏损外担菌exobasidium vexans(介绍茶饼病和轮斑病的病原菌)，属于专性寄生菌，不能离体培养，这为该病害的研究带来了难度。目前有报道pseudomonasfluorescens pf1对茶饼病田间具有一定的防控效果，但pseudomonas这类生防菌以营养体形式存在，无芽胞，造成货架期较短，推广应用存在很大困难，另外有枯草芽胞杆菌bacillus subtilis b-9报道对茶饼病病原菌有一定抑菌活性。目前茶饼病国内只有多抗霉素、枯草芽孢杆菌和补骨脂种子提取物3种农药获得登记，防控药剂较为缺乏。茶轮斑病主要由拟盘多毛孢属真菌(pestalotiopsis spp.)引起，sanjay等从茶园土壤中分离哈慈木霉(trichoderma harzianum)、绿粘帚霉(gliocladium virena)和荧光假单胞杆菌(pseudomonas fluorescens)，田间防治效果均在40％以下，效果不甚理想。另外有报道贝莱斯芽胞杆菌cy30对茶轮病有一定的防效，目前无茶轮斑病的登记药剂。使用化学杀菌剂仍是防治茶饼病和轮斑病的主要手段，但是化学杀菌剂的施用极易引起病菌抗药性，同时会造成农药残留和环境污染。

2、施肥是影响茶叶品质与产量、土壤可持续利用的关键农业措施之一，肥料对茶叶的提质增效的效果十分显著。传统茶园以施用尿素、复合肥等速效化肥为主，并且化肥施用量较大，造成土壤酸化、板结导致了茶叶品质下降等问题，生产上亟需解决上述问题。

3、目前关于简单芽孢杆菌在防控病害的报道，p10菌株对马铃薯晚疫病病原菌致病疫霉具有良好的抑菌效果，sty005菌株对马铃薯疮痂病具有良好的防效，fjat-47158菌株对尖孢镰刀菌具有良好的抑菌效果，而茶饼病菌属于担子菌，与上述植物病原菌分类学具有差显著差异。另外，上述菌株均不是分离自茶树根际土壤，非茶园土著微生物，在根部和茶园土壤定殖能力与土著微生物会有差异，进而影响对茶树促生增产效果。

4、针对上述问题，本发明从茶树根际土壤分离筛选一株简单芽胞杆菌cyg04，对茶饼病和、轮斑病和灰霉病的防控效果、茶树根际定殖能力和茶树促生增产作用进行了研究，上述研究旨在为后期cyg04在茶树的应用奠定基础。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供了一株分离的简单芽胞杆菌，所述的简单芽胞杆菌命名为简单芽胞杆菌(bacillus simplex)cyg04，保藏编号为：cctcc no:m 20231901。

2、本发明的另一个目的在于提供了一株分离的简单芽胞杆菌的应用，该菌株可用于制备成具有茶叶防病和/或促生的微生物制剂，包括用于防治茶饼病、轮斑病和灰霉病，促进茶叶生长。

3、为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

4、一株分离的简单芽胞杆菌，通过对茶轮斑和灰霉病病筛选获得，通过16s rdna比对结合生理生化鉴定确定为简单芽胞杆菌，该菌株已于2023年10月16日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏，分类命名：bacillus simplex cyg04；保藏编号为：cctcc no:m20231901；地点：中国，武汉，武汉大学。

5、该菌在na培养基菌落生长良好，菌落淡黄色(图1)。

6、本发明的保护范围包括简单芽胞杆菌cyg04的发酵液，获得发酵液过程中使用的培养基包括但不限于lb培养基、或培养基：玉米粉10-12g/l、豆粕6-8g/l、酵母粉10-12g/l、磷酸二氢钾0.2-0.5g/l，硫酸镁0.4-0.6g/l，ph6-7。

7、本发明的保护范围还包括：上述简单芽胞杆菌或含有该简单芽胞杆菌活菌的发酵液在制备植物病原菌抑菌剂中的应用；

8、优选的，所述的抑菌剂的抑制对象为：茶拟盘多毛孢(pestalotiopsis theae)、灰葡萄孢(botrytis cinerea)、坏损外担菌(exobasidium vexans)、辣椒疫霉(phytophthoracapsici)、核盘菌(sclerotinia sclerotiorum)、立枯丝核菌(rhizoctonia solani)、禾谷炭疽菌(colletotrichum graminicola)、尖孢镰刀菌(fusarium oxysporum)和/或链格胞(alternariaalternata)。

9、上述简单芽胞杆菌或含有该简单芽胞杆菌活菌的发酵液在制备茶叶生防剂中的应用；

10、优选的，所述的生防剂的防治对象为茶饼病、轮斑病和/或灰霉病；

11、上述简单芽胞杆菌或含有该简单芽胞杆菌活菌的发酵液在促进茶叶生长中的应用。

12、以上所述的应用，所述抑菌剂或者生防剂的的使用方式是喷施；

13、以上所述的应用，所述的促进茶叶生长的方式是灌根。

14、与现有技术相比，本发明具有以下优点：

15、(1)本发明提供了一株简单芽胞杆菌，该菌株抗逆性强，易于大量发酵，首次报道能够同时防控茶饼病和轮斑病。

16、(2)菌株兼具对茶树促生活性，使用方便，无残留和污染，可以有效减少化肥和农药施用。

17、(3)本发明的简单芽胞杆菌分离自茶树根际，可定殖于茶树植株，也是首次分离发现可定殖于茶树的简单芽胞杆菌。

技术特征：

1. 一株分离的简单芽胞杆菌（bacillus simplex），所述的简单芽胞杆菌为简单芽胞杆菌cyg04，保藏编号为：cctcc no: m 20231901。

2. 权利要求1所述的简单芽胞杆菌或含有该简单芽胞杆菌活菌的发酵液在制备植物病原菌抑菌剂中的应用，所述的抑菌剂的抑制对象为：茶拟盘多毛孢（pestalotiopsis theae）、灰葡萄孢（botrytis cinerea）、坏损外担菌(exobasidium vexans)、辣椒疫霉（phytophthora capsici）、核盘菌（sclerotinia sclerotiorum）、立枯丝核菌（rhizoctonia solani）、禾谷炭疽菌（colletotrichum graminicola）、尖孢镰刀菌（fusarium oxysporum）和/或链格胞（alternaria alternata）。

3. 权利要求1所述的简单芽胞杆菌或含有该简单芽胞杆菌活菌的发酵液在抑制植物病原菌中的应用，所述的植物病原菌为：茶拟盘多毛孢（pestalotiopsis theae）、灰葡萄孢（botrytis cinerea）、坏损外担菌(exobasidium vexans)、辣椒疫霉（phytophthora capsici）、核盘菌（sclerotinia sclerotiorum）、立枯丝核菌（rhizoctonia solani）、禾谷炭疽菌（colletotrichum graminicola）、尖孢镰刀菌（fusarium oxysporum）和/或链格胞（alternaria alternata）。

4.权利要求1所述的简单芽胞杆菌或含有该简单芽胞杆菌活菌的发酵液在制备茶叶生防剂中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，所述的生防剂的防治对象为茶饼病、轮斑病和/或灰霉病。

6.权利要求1所述的简单芽胞杆菌或含有该简单芽胞杆菌活菌的发酵液在促进茶叶生长中的应用。

7.根据权利要求2或4所述的应用，所述的抑菌剂或者生防剂的的使用方式是喷施。

8.根据权利要求6所述的应用，所述的促进茶叶生长的方式是灌根。

技术总结
本发明属于农业微生物领域，公开了一株简单芽胞杆菌CYG04及其应用，所述的简单芽胞杆菌为简单芽胞杆菌（Bacillus simplex）CYG04，保藏编号为：CCTCC M 20231901，该菌株首次被报道用于叶面喷雾防治茶树茶饼病、轮斑病和灰霉病，灌根对茶树的促生增产作用，在农业生产中具有广阔的应用前景。

技术研发人员：黄大野,曹春霞,姚经武,杨丹,郑娇莉,王蓓蓓,金若珩
受保护的技术使用者：湖北省生物农药工程研究中心
技术研发日：
技术公布日：2024/2/21