一种整合素α6靶向荧光分子探针及其使用

本发明涉及靶向性荧光探针，尤其涉及一种整合素α6靶向荧光分子探针及其使用。

背景技术：

1、整合素是一种跨膜的异质二聚体，它由两个非共价结合的跨膜亚基(α亚基和β亚基)组成。细胞外球形结构域可以与细胞外基质蛋白结合，细胞内的尾部则与肌动蛋白相连。具有联系细胞内外结构的作用。能够作为靶向探针或靶向性治疗药物的靶点，在临床肿瘤成像和治疗中已有应用。整合素α6是整合素的一种α亚基，在细胞中可分别与整合素β1亚基和整合素β4亚基组成整合素α6β1或α6β4。在肝癌、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤等多种肿瘤细胞表面高表达，与肿瘤发生、发展、侵袭、转移等行为密切相关。此外，相关文献表明，整合素α6表达水平高的肿瘤患者，其生存时间显著较短。因此，整合素α6是肿瘤进展和患者预后的重要标志物，对于肿瘤的诊断具有重要意义。

2、中国专利cn113817021a公开了一种整合素α6靶向多肽及其应用，其基序为rwyd，对整合素α6具有更强的亲和力，平衡解离常数kd可达到nm级别。且无生物毒性，在体内稳定且分布合理。可作为靶向配体用于荧光分子探针的合成。

3、但是仍然存在较低的肿瘤信背比，特异性低的问题，为了更高的效果连接peg形成二倍体或多倍体也增加了合成的难度和结构的复杂性。

技术实现思路

1、本申请实施例通过提供一种整合素α6靶向荧光分子探针及其使用，解决了现有技术中较低的肿瘤信背比，特异性低的问题，实现了一种信背比，高特异性的荧光探针。

2、本申请的一种整合素α6靶向荧光分子探针，其基序为rwyd-cy7；

3、进一步的，是由整合素α6靶向性多肽rwyd和荧光分子cy7脱水缩合而成。

4、进一步的，具体制备过程为：(1)脱水缩合反应：将sulfo cy7-se与rwyd多肽溶于pbs缓冲溶液中，通过脱水缩合反应得到含有rwyd-cy7荧光分子探针的混合物；(2)纯化：将混合物经柱层析纯化后得到荧光分子探针rwyd-cy7。

5、进一步的，所述探针利用产生1000-1700nm谱段的nir-ii荧光进行成像。

6、进一步的，一种整合素α6靶向荧光分子探针肝癌术中在体荧光成像和手术导航和术中获取组织的离体快速病理染色应用

7、本申请实施例中提供的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：

8、其一，本发明提供了一种靶向整合素α6的靶向性nir-ii荧光分子探针。利用对整合素α6具有高亲和力的多肽rwyd，和具有nir-ii荧光信号的小分子荧光染料cy7，构建能够高特异性靶向肝癌肿瘤细胞表面整合素α6的nir-ii荧光分子探针，且无生物毒性。探针在体内分布稳定且分布合理，能够实现肿瘤在体和离体水平的nir-ii荧光分子成像，实时检测肿瘤整合素α6表达水平。进一步能够作为肿瘤术中nir-ii荧光成像和nir-ii荧光手术导航的荧光分子探针。

9、其二，本发明的nir-ii荧光分子探针rd-cy7通过在中性缓冲液中进行温和的脱水缩合反应即可实现，制备工艺较为简单，成本较低。

10、其三，cy7是一种小分子花菁类染料，在nir-ii具有荧光拖尾，且不与正常肝脏细胞结合，由此两种分子反应合成的rd-cy7荧光分子探针具有较高肿瘤信背比，且穿透深度更高，能够辅助肝癌肿瘤的全面精准切除。

11、以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。

技术特征：

1.一种整合素α6靶向荧光分子探针，其特征在于，其基序为rwyd-cy7。

2.如权利要求1所述的一种整合素α6靶向荧光分子探针，其特征在于，是由整合素α6靶向性多肽rwyd和荧光分子cy7脱水缩合而成。

3.如权利要求2所述的一种整合素α6靶向荧光分子探针，其特征在于，具体制备过程为：(1)脱水缩合反应：将sulfo cy7-se与rwyd多肽溶于pbs缓冲溶液中，通过脱水缩合反应得到含有rwyd-cy7荧光分子探针的混合物；(2)纯化：将混合物经柱层析纯化后得到荧光分子探针rwyd-cy7。

4.如权利要求3所述的一种整合素α6靶向荧光分子探针，其特征在于，所述pbs溶液ph为6.8-7。

5.如权利要求3所述的一种整合素α6靶向荧光分子探针，其特征在于，所述脱水缩合反应在常温条件下进行。

6.如权利要求1所述的一种整合素α6靶向荧光分子探针，其特征在于，所述探针利用产生1000-1700nm谱段的nir-ii荧光进行成像。

7.如权利要求1-6任一项所述的一种整合素α6靶向荧光分子探针的使用，其特征在于，应用于术中快速病理和荧光手术导航。

8.如权利要求7所述的一种整合素α6靶向荧光分子探针的使用，其特征在于，应用于体外组织时，将离体组织在80nm的rd-cy7荧光分子探针溶液完全浸泡孵育5min，随后使用pbs缓冲液或生理盐水重复冲洗3次，每次冲洗5min。

9.如权利要求8所述的一种整合素α6靶向荧光分子探针的使用，其特征在于，所述荧光分子探针溶液为荧光分子探针溶于pbs溶液中，pbs的ph为6.8-7，溶液温度为37℃。

10.如权利要求9所述的一种整合素α6靶向荧光分子探针的使用，其特征在于，离体组织孵育结束后，利用nir-ii荧光成像系统对组织进行nir-ii荧光成像，根据荧光强度可半定量判断组织的整合素α6表达量。

技术总结
本申请公开了一种整合素α6靶向荧光分子探针及其使用，涉及荧光探针技术领域，其通过脱水缩合反应和纯化后得到一种基于RWYD多肽和小分子荧光染料Cy7的整合素α6靶向性NIR‑II荧光分子探针；能够实现能够高特异性靶向肝癌病灶，并有肝癌术中在体荧光成像与手术导航和术中获取组织的离体快速病理的应用。

技术研发人员：田捷,胡振华,史小静
受保护的技术使用者：中国科学院自动化研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/3/17