用于荧光素酶和核苷磷酸的发光检测的稳定制剂的制作方法

本公开涉及用于测定酶和代谢产物的组合物、方法和试剂盒。

背景技术：

1、荧光素是外消旋化合物，在溶液中，其由d-荧光素外消旋至l-荧光素或者由l-荧光素外消旋至d-荧光素。d-荧光素可以用作荧光素酶的底物而产生光，而l-荧光素很大程度上是抑制性的并且导致发光减少。由于d-荧光素底物的可用性的变化和降低以及l-荧光素的抑制作用，在储存过程中d-荧光素至l-荧光素的缓慢外消旋对于利用荧光素酶活性的测定存在问题。

技术实现思路

1、在某些实施方案中，提供了包含荧光素酶、l-荧光素和d-荧光素的组合物，其中所述组合物基本上不含atp。在某些实施方案中，提供了包含atp、l-荧光素和d-荧光素的组合物，其中所述组合物基本上不含荧光素酶。

2、在一些实施方案中，提供了包含d-荧光素、l-荧光素和atp的组合物。

3、在某些实施方案中，提供了包含荧光素酶、l-荧光素和d-荧光素和atp的组合物，其中所述l-荧光素的浓度超过所述d-荧光素的浓度。

4、在一些实施方案中，提供了包含组合物的试剂盒，所述组合物包含荧光素酶、l-荧光素和d-荧光素，所述组合物基本上不含atp且包装在容器中。所述试剂盒可以包括至少一种额外组分，例如一种或多种洗涤剂，例如十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷，磷酸钾、消泡剂、缓冲剂、盐和螯合剂，例如乙二胺四乙酸(edta)。

5、在一些实施方案中，提供了包含组合物的试剂盒，所述组合物包含d-荧光素、l-荧光素和atp，其中所述l-荧光素的浓度超过所述d-荧光素的浓度。所述试剂盒可以包括至少一种额外组分，例如一种或多种洗涤剂，例如十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷，磷酸钾、消泡剂、缓冲剂、盐和螯合剂，例如乙二胺四乙酸(edta)。

6、在一些实施方案中，提供了包含组合物的试剂盒，所述组合物包含l-荧光素、d-荧光素和atp，所述组合物基本上不含荧光素酶且包装在容器中。所述试剂盒可以包括至少一种额外组分，例如缓冲剂、二价阳离子螯合剂、镁盐、离子型或非离子型洗涤剂、含硫醇化合物，如辅酶a或dtt、一种或多种含硫还原剂或其组合。

7、在一些实施方案中，提供了用于测定样品中atp的存在或量的方法，其中使包含荧光素酶、l-荧光素和d-荧光素的组合物与样品接触并检测和/或测量产生的发光度以测定样品中atp的存在或量。

8、在一些实施方案中，提供了用于测定样品中荧光素酶的存在或量的方法、试剂盒或组合物，其中使包含d-荧光素、l-荧光素和atp的组合物与样品接触，所述样品可以含有表达荧光素酶的细胞。然后检测和/或测量产生的发光度以测定样品中荧光素酶的存在或量。含有表达荧光素酶的细胞的样品可以是裂解的细胞、未加工的细胞提取物或澄清的细胞提取物。

9、在一些实施方案中，提供了用于检测来自表达荧光素酶的细胞的荧光素酶活性的方法，其中荧光素酶在细胞中表达，并且使所述细胞与包含l-荧光素和d-荧光素的混合物接触，在所述混合物中所述l-荧光素与所述d-荧光素的比率为至少约5:95至约75:25。在一些实施方案中，所述混合物包含l-荧光素和d-荧光素，所述l-荧光素和所述d-荧光素的比率为至少约5:95至约55:45，或至少约5:95至约50:50。然后检测和/或测量产生的发光度以测定细胞中荧光素酶的存在或量。

10、在一些实施方案中，提供了用于检测或定量细胞或其他样品中核苷磷酸例如atp或atp源的方法，其中使所述细胞或样品与包含l-荧光素和d-荧光素的混合物和荧光素酶接触，在所述混合物中所述l-荧光素与所述d-荧光素的比率为至少约0.5:1至约2:1。然后检测和/或测量产生的发光度以测定细胞中核苷磷酸的存在或量。

11、在一些实施方案中，提供了用于进行荧光素酶反应的方法。将包含l-荧光素和d-荧光素的混合物在约0℃至约35℃的温度下储存一定时间段。当在荧光素酶活性测定中使用所述混合物时，测量了光输出，即发光度。允许所述混合物与含有或表达荧光素酶，atp或atp源的样品或部分样品接触，以形成反应测定物。然后检测反应测定物中产生的发光度。已经储存一定时间段的含有混合物的反应测定物产生光输出，在某些实施方案中，所述光输出为在储存时间段开始时(时间t＝0)含有所述混合物的可比较的反应测定物的光输出的至少约50％或至少约90％。在某些实施方案中，储存时间段可能为至少约30分钟，至少约1小时，至少约4小时或更长。

12、在一些实施方案中，提供了用于配制用于荧光素酶反应的组分的方法。使d-荧光素和l-荧光素合并以形成混合物，所述混合物在约0℃至约35℃的温度下储存一定时间段，如约1、2、3或4小时或1周或2周的时间段。当在荧光素酶活性测定中使用时，所述混合物允许产生光输出，即发光度，以致在所述时间段之后产生的光输出为在所述时间段开始时的光输出的至少约50％或至少约90％。

13、本公开涉及包含荧光素酶、l-荧光素和d-荧光素的组合物。所述组合物基本上不含atp。所述组合物可以包含至少约0.5:1至约2:1的l-荧光素与d-荧光素的比率。所述组合物可以包含至少约5:95至约55:45的l-荧光素与d-荧光素的比率。所述组合物可以具有至少约5且小于约9的ph。所述荧光素酶可以是甲虫荧光素酶，如萤火虫荧光素酶或叩头虫荧光素酶。d-荧光素可以是d-5'氟荧光素且l-荧光素是l-5'氟荧光素。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：缓冲剂、蛋白质稳定剂、镁离子、金属螯合剂、洗涤剂、消泡剂、无机磷酸盐、焦磷酸盐、amp、辅酶a、还原剂或其组合。所述组合物可以包含硫酸镁和反式-1,2-环己二胺四乙酸(cdta)。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：1,4-哌嗪二乙磺酸、1,2-二氨基环己烷四乙酸、tergitol洗涤剂、mazu消泡剂、硫酸镁、atp、辅酶a、焦磷酸盐、dtt、亚硫酸盐和硫代硫酸盐。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的组分：氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾、乙二胺四乙酸(edta)和amp。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少两种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少三种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少四种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少五种。所述组合物还可以包含镁离子、柠檬酸缓冲剂、mes缓冲剂、氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾和乙二胺四乙酸(edta)。所述组合物还可以包含柠檬酸缓冲剂、hepes缓冲剂、镁离子、乙二胺四乙酸(edta)、磷酸钾、消泡剂、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷和amp。与未包含l-荧光素的组合物相比，当在约0℃至约35℃之间的温度下储存时，所述组合物可以具有增加的储存寿命和/或稳定性。

14、本公开涉及包含d-荧光素、l-荧光素和atp的组合物。所述组合物基本上不含荧光素酶。所述组合物可以包含至少约0.5:1至约2:1的l-荧光素与d-荧光素的比率。所述组合物可以包含至少约5:95至约55:45的l-荧光素与d-荧光素的比率。所述组合物可以具有至少约5且小于约9的ph。所述荧光素酶可以是甲虫荧光素酶，如萤火虫荧光素酶或叩头虫荧光素酶。d-荧光素可以是d-5'氟荧光素且l-荧光素是l-5'氟荧光素。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：缓冲剂、蛋白质稳定剂、镁离子、金属螯合剂、洗涤剂、消泡剂、无机磷酸盐、焦磷酸盐、amp、辅酶a、还原剂或其组合。所述组合物可以包含硫酸镁和反式-1,2-环己二胺四乙酸(cdta)。所述组合物还包含至少一种选自如下的额外组分：1,4-哌嗪二乙磺酸、1,2-二氨基环己烷四乙酸、tergitol洗涤剂、mazu消泡剂、硫酸镁、atp、辅酶a、焦磷酸盐、dtt、亚硫酸盐和硫代硫酸盐。所述组合物还包含至少一种选自如下的组分：氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾、乙二胺四乙酸(edta)和amp。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少两种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少三种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少四种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少五种。所述组合物还可以包含镁离子、柠檬酸缓冲剂、mes缓冲剂、氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾和乙二胺四乙酸(edta)。所述组合物还可以包含柠檬酸缓冲剂、hepes缓冲剂、镁离子、乙二胺四乙酸(edta)、磷酸钾、消泡剂、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷和amp。与未包含l-荧光素的组合物相比，当在约0℃至约35℃之间的温度下储存时，所述组合物可以具有增加的储存寿命和/或稳定性。

15、本公开涉及包含d-荧光素、l-荧光素和atp的组合物，其中所述l-荧光素的浓度超过所述d-荧光素的浓度。所述组合物可以具有至少约5且小于约9的ph。所述荧光素酶可以是甲虫荧光素酶，如萤火虫荧光素酶或叩头虫荧光素酶。d-荧光素可以是d-5'氟荧光素且l-荧光素是l-5'氟荧光素。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：缓冲剂、蛋白质稳定剂、镁离子、金属螯合剂、洗涤剂、消泡剂、无机磷酸盐、焦磷酸盐、amp、辅酶a、还原剂或其组合。所述组合物可以包含硫酸镁和反式-1,2-环己二胺四乙酸(cdta)。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：1,4-哌嗪二乙磺酸、1,2-二氨基环己烷四乙酸、tergitol洗涤剂、mazu消泡剂、硫酸镁、atp、辅酶a、焦磷酸盐、dtt、亚硫酸盐和硫代硫酸盐。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的组分：氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾、乙二胺四乙酸(edta)和amp。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少两种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少三种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少四种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少五种。所述组合物还可以包含镁离子、柠檬酸缓冲剂、mes缓冲剂、氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾和乙二胺四乙酸(edta)。所述组合物可以包含柠檬酸缓冲剂、hepes缓冲剂、镁离子、乙二胺四乙酸(edta)、磷酸钾、消泡剂、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷和amp。与未包含l-荧光素的组合物相比，当在约0℃至约35℃之间的温度下储存时，所述组合物可以具有增加的储存寿命和/或稳定性。

16、本公开涉及具有增加的储存寿命和/或稳定性的组合物。所述组合物可以包含荧光素酶、l-荧光素和d-荧光素，其中所述组合物基本上不含atp。所述荧光素酶可以是甲虫荧光素酶。所述甲虫荧光素酶可以是萤火虫荧光素酶或叩头虫荧光素酶。所述组合物可以包含至少约0.5:1至约2:1的l-荧光素与d-荧光素的比率。所述组合物可以包含至少约5:95至约55:45的l-荧光素与d-荧光素的比率。与未包含l-荧光素的组合物相比，当在约0℃至约35℃的温度下储存时，所述反应混合物可具有增加的储存寿命和/或稳定性。所述组合物可以具有至少约5且小于约9的ph。d-荧光素可以是d-5'氟荧光素，且l-荧光素是l-5'氟荧光素。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：缓冲剂、蛋白质稳定剂、镁离子、金属螯合剂、洗涤剂、消泡剂、无机磷酸盐、焦磷酸盐、amp、辅酶a、还原剂或其组合。所述组合物可以包含硫酸镁和反式-1,2-环己二胺四乙酸(cdta)。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：1,4-哌嗪二乙磺酸、1,2-二氨基环己烷四乙酸、tergitol洗涤剂、mazu消泡剂、硫酸镁、atp、辅酶a、焦磷酸盐、dtt、亚硫酸盐和硫代硫酸盐。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的组分：氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾、乙二胺四乙酸(edta)和amp。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少两种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少三种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少四种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少五种。所述组合物还可以包含镁离子、柠檬酸缓冲剂、mes缓冲剂、氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾和乙二胺四乙酸(edta)。所述组合物可以包含柠檬酸缓冲剂、hepes缓冲剂、镁离子、乙二胺四乙酸(edta)、磷酸钾、消泡剂、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷和amp。

17、本公开涉及具有增加的储存寿命和/或稳定性的组合物。所述组合物包含d-荧光素、l-荧光素和atp，其中所述组合物基本上不含荧光素酶。所述组合物可以包含至少约0.5:1至约2:1的l-荧光素与d-荧光素的比率。所述组合物可以包含至少约5:95至约55:45的l-荧光素与d-荧光素的比率。与未包含l-荧光素的组合物相比，当在约0℃至约35℃的温度下储存时，所述反应混合物可以具有增加的储存寿命和/或稳定性。所述组合物可以具有至少约5且小于约9的ph。d-荧光素可以是d-5'氟荧光素，且l-荧光素是l-5'氟荧光素。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：缓冲剂、蛋白质稳定剂、镁离子、金属螯合剂、洗涤剂、消泡剂、无机磷酸盐、焦磷酸盐、amp、辅酶a、还原剂或其组合。所述组合物可以包含硫酸镁和反式-1,2-环己二胺四乙酸(cdta)。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：1,4-哌嗪二乙磺酸、1,2-二氨基环己烷四乙酸、tergitol洗涤剂、mazu消泡剂、硫酸镁、atp、辅酶a、焦磷酸盐、dtt、亚硫酸盐和硫代硫酸盐。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的组分：氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾、乙二胺四乙酸(edta)和amp。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少两种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少三种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少四种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少五种。所述组合物还可以包含镁离子、柠檬酸缓冲剂、mes缓冲剂、氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾和乙二胺四乙酸(edta)。所述组合物可以包含柠檬酸缓冲剂、hepes缓冲剂、镁离子、乙二胺四乙酸(edta)、磷酸钾、消泡剂、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷和amp。

18、本公开涉及具有增加的储存寿命和/或稳定性的组合物。所述组合物包含d-荧光素、l-荧光素和atp，其中所述l-荧光素的浓度超过所述d-荧光素的浓度。与未包含l-荧光素的组合物相比，当在约0℃至约35℃的温度下储存时，所述反应混合物可以具有增加的储存寿命和/或稳定性。所述组合物可以具有至少约5且小于约9的ph。d-荧光素可以是d-5'氟荧光素，且l-荧光素是l-5'氟荧光素。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：缓冲剂、蛋白质稳定剂、镁离子、金属螯合剂、洗涤剂、消泡剂、无机磷酸盐、焦磷酸盐、amp、辅酶a、还原剂或其组合。所述组合物可以包含硫酸镁和反式-1,2-环己二胺四乙酸(cdta)。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：1,4-哌嗪二乙磺酸、1,2-二氨基环己烷四乙酸、tergitol洗涤剂、mazu消泡剂、硫酸镁、atp、辅酶a、焦磷酸盐、dtt、亚硫酸盐和硫代硫酸盐。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的组分：氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾、乙二胺四乙酸(edta)和amp。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少两种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少三种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少四种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少五种。所述组合物还可以包含镁离子、柠檬酸缓冲剂、mes缓冲剂、氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾和乙二胺四乙酸(edta)。所述组合物还可以包含柠檬酸缓冲剂、hepes缓冲剂、镁离子、乙二胺四乙酸(edta)、磷酸钾、消泡剂、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷和amp。

19、本公开涉及包含包装在至少一个容器中的如上所述的组合物的试剂盒。

20、本公开涉及试剂盒，所述试剂盒包含包装在第一容器中的如上所述的组合物和第二容器，所述第二容器包含至少一种选自如下的组分：柠檬酸缓冲剂、mes缓冲剂、氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾、乙二胺四乙酸(edta)和amp。与未包含l-荧光素的组合物相比，当在约0℃至约35℃之间的温度下储存时，所述组合物可以具有增加的储存寿命和/或稳定性。

21、本公开涉及用于测定样品中atp的存在或量的方法，其包括使如上所述的组合物与样品接触，以及检测所产生的发光度，由此测定样品中atp的存在或量。所述样品可以包含完整的细胞。所述样品包括未加工的细胞裂解物或澄清的细胞裂解物。所述细胞可以为原核细胞或真核细胞。所述样品可以包含经纯化的酶，所述酶产生或使用atp。与未包含l-荧光素的组合物相比，当在约0℃至约35℃之间的温度下储存时，所述组合物可以具有增加的储存寿命和/或稳定性。

22、本公开涉及用于检测表达荧光素酶的细胞中荧光素酶活性的方法，所述方法包括在细胞中表达荧光素酶；使所述荧光素酶、所述细胞或其组合与包含l-荧光素和d-荧光素的混合物接触以及检测发光度，在所述混合物中所述l-荧光素和所述d-荧光素的比率为(i)至少约5:95至约75:25，(ii)至少约5:95至约50:50，(iii)至少约5:95至约25:75或(iv)至少约5:95至约20:80。所述细胞可以被裂解，并且包含荧光素酶的裂解的细胞可以与所述混合物接触。可以使裂解的细胞澄清以形成包含荧光素酶的澄清的细胞提取物，以及使所述澄清的细胞提取物与所述混合物接触。所述细胞可以为真核细胞，如哺乳动物细胞。所述混合物可能增加发光信号的半衰期。可以用荧光素酶编码序列瞬时转染所述细胞。所述混合物可以具有至少约6.5至小于约7.8的ph，或者至少约6.6至至少约6.8的ph。d-荧光素可以是d-5'氟荧光素且l-荧光素是l-5'氟荧光素。与未包含l-荧光素的组合物相比，当在约0℃至约35℃之间的温度下储存时，所述组合物可以具有增加的储存寿命和/或稳定性。所述混合物可以具有至少约5至约9的ph。

23、本公开涉及用于进行荧光素酶反应的方法。所述方法包括：(a)将包含l-荧光素和d-荧光素的混合物在约0℃至约35℃之间的温度下储存至少约4小时的时间段，其中当在包含荧光素酶和atp的测定物中与样品合并时，所述储存的混合物允许产生光输出，并且其中所述时间段之后的光输出为所述时间段开始时的光输出的至少约50％；以及(b)在步骤(a)之后，允许所述储存的混合物与(i)样品和(ii)atp或atp源、荧光素酶或其组合合并以形成反应测定物以及检测所产生的发光度。所述时间段可以为至少约12小时，所述温度可以为约0℃至约6℃或约20℃至约35℃。所述样品可以包含荧光素酶，且所述混合物包含atp。所述样品可以包含atp，且所述混合物包含荧光素酶。所述时间段之后的光输出为所述时间段开始时的光输出的至少约75％。所述混合物可以基本上不含atp或荧光素酶。所述温度为约20℃至约35℃。所述温度可以为约0℃至约6℃，且所述时间段为至少约2周。所述时间段可以为至少约12周。所述时间段可以为至少约26周。所述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出的至少约90％。所述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出的至少约50％。所述方法还可以包括在步骤(b)之后，将所述储存的混合物与(i)荧光素酶和、(ii)atp或atp源或(iii)其组合合并以形成第二混合物，以及检测所述第二混合物中所产生的发光度。所述混合物可以具有至少约5至约9的ph。所述混合物可以包含至少约5:95至约75:25的l-荧光素与d-荧光素的比率。

24、本公开涉及用于配制用于荧光素酶反应的组分的方法。所述方法包括：(a)将d-荧光素和l-荧光素合并以形成混合物，(b)将所述混合物在约0℃至约35℃的温度下储存至少约2天的时间段。当在包含荧光素酶的测定物中与样品合并时，所述混合物允许产生光输出，并且其中所述时间段之后的光输出为所述时间段开始时的光输出的至少约50％。所述混合物可以基本上不含atp或荧光素酶。所述温度可以为约20℃至约35℃。所述温度可以为约0℃至约6℃，并且所述时间段为至少约2周。所述时间段可以为至少约12周。所述时间段可以为至少约26周。所述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出的至少约90％。所述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出的至少约50％。所述方法还可以包括在步骤(b)之后，将所述储存的混合物与(i)荧光素酶、(ii)atp或atp源或(iii)其组合合并以形成第二混合物，以及检测所述第二混合物中所产生的发光度。所述混合物可以具有至少约5至约9的ph。所述组合物可以包含至少约5:95至约75:25的l-荧光素与d-荧光素的比率。

25、本公开涉及用于增加发光信号的半衰期的方法。所述方法包括：(a)使包含荧光素酶的样品与包含d-荧光素、l-荧光素和atp的混合物接触以形成反应测定物；以及(b)检测发光度；其中与包含d-荧光素且基本上不含l-荧光素的可比较的反应测定物相比，发光信号的半衰期增加。所述发光信号的半衰期可增加至少约25％。所述发光信号的半衰期可增加至少约5倍。所述样品可以包括表达荧光素酶的细胞。所述细胞可以被裂解，并且所述样品可以包含裂解的细胞，所述裂解的细胞包含荧光素酶。所述样品可以包括澄清的细胞提取物，所述细胞提取物包含荧光素酶。所述细胞可以为原核细胞或真核细胞。d-荧光素可以为d-5'氟荧光素，l-荧光素为l-5'氟荧光素，并且其中可比较的反应测定物包含d-5'氟荧光素且基本上不含l-5'氟荧光素。

26、本公开涉及用于进行荧光素酶反应的方法。所述方法包括：(a)将组合物与样品和atp或atp源、荧光素酶或其组合合并以形成反应测定物，所述组合物包括l-荧光素和d-荧光素；以及(b)检测产生的发光度，其中与未包含l-荧光素的组合物相比，如果所述组合物在约0℃至约35℃的温度下储存至少约4小时的时间段，则所述组合物具有增加的稳定性。当在包含荧光素酶和atp的测定物中与样品合并时，所述储存的组合物允许产生光输出，并且其中所述时间段之后的光输出为所述时间段开始时的光输出的至少约50％。所述增加的稳定性可以包括增加的储存寿命和/或增加的信号稳定性。所述时间段可以为至少约12小时，所述温度为约0℃至约6℃或约20℃至约35℃。所述样品可以包含荧光素酶，且所述组合物可以包含atp。所述样品可以包含atp，且所述混合物包含荧光素酶。所述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出的至少约75％。所述组合物可以基本上不含atp或荧光素酶。所述温度可以为约20℃至约35℃。所述温度可以为约0℃至约6℃，且所述时间段为至少约2周。所述时间段可以为至少约12周。所述时间段可以为至少约26周。所述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出的至少约90％。所述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出的至少约50％。所述方法还包括在步骤(b)之后，将所述组合物与(i)荧光素酶、(ii)atp或atp源或(iii)其组合合并以形成混合物，以及检测所述混合物中所产生的发光度。所述组合物可以具有至少约5至约9的ph。所述组合物可以包含至少约5:95至约75:25的l-荧光素与d-荧光素的比率。

27、本公开涉及用于配制用于荧光素酶反应的组分的方法，所述方法包括将d-荧光素和l-荧光素合并以形成组合物，其中与未包含l-荧光素的组合物相比，如果所述组合物在约0℃至约35℃的温度下储存至少4小时的时间段，则所述组合物具有增加的稳定性，其中当在包含荧光素酶和atp的测定物中与样品合并时，所述储存的组合物允许产生光输出，并且其中所述时间段之后的光输出为所述时间段开始时的光输出的至少约50％。所述增加的稳定性可包括增加的储存寿命和/或增加的信号稳定性。所述组合物可以基本上不含atp或荧光素酶。所述温度可以为约20℃至约35℃。所述温度可以为约0℃至约6℃，且所述时间段为至少约2周。所述时间段可以为至少约12周。所述时间段可以为至少约26周。所述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出的至少约90％。所述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出的至少约50％。所述方法还包括在步骤(b)之后，将所述组合物与(i)荧光素酶、(ii)atp或atp源或(iii)其组合合并以形成混合物，以及检测所述混合物中所产生的发光度。所述组合物可以具有至少约5至约9的ph。所述组合物可以包含至少约5:95至约75:25的l-荧光素与d-荧光素的比率。

28、通过考虑详细的说明书和附图，本发明的其他方面将会变得显而易见。