一种微生物发酵生产齐墩果酸的方法

本发明涉及生产齐墩果酸的方法，具体涉及利用微生物发酵生产齐墩果酸的方法，属于微生物发酵。

背景技术：

1、齐墩果酸是从龙胆科植物獐牙菜属的青叶胆全草或女贞子的果实中分离提取而得一种五环三萜类化合物，以游离体和配糖体存在于多种植物中，已成为临床上常用的保肝药物，对四氯化碳引起的大鼠急性和慢性肝损害有明显保护作用，可使升高的alt和ast下降，炎症、坏死和间质炎症反应减轻，阻止纤维化形成，促进肝细胞的再生，加速坏死组织的恢复作用。

2、目前，齐墩果酸的制备方法主要为从植物中提取，主要提取来源木犀科植物齐墩果的叶；女贞果实；龙胆科植物青叶胆全草；川西獐牙菜；伞形科植物大星芹的叶、根；五加科植物楤木的根皮及茎皮；葫芦科植物大籽雪胆、可爱雪胆、中华雪胆(金龟莲、罗锅底)的块根。然而齐墩果酸在植物中的累积量较少，如果直接从植物中提取存在工艺复杂、能耗高、生产周期较长等问题，且提取工艺往往需要高温和有机溶剂，不仅提取成本高，也会造成环境污染。

技术实现思路

1、针对以上缺陷，本发明解决的技术问题是提供一种生物发酵生产齐墩果酸的方法。

2、本发明微生物发酵生产齐墩果酸的方法，所述微生物为pfyn01或pfwt01，其中，pfyn01的保藏号为cctcc no：m2016174，pfwt01的保藏号为cctcc no：m2016175。

3、在一个具体实施方式中，本发明微生物发酵生产齐墩果酸的方法，包括以下步骤：将微生物在含钒的培养基中培养，收集代谢产物，提纯，得到齐墩果酸。

4、在本发明的一个实施方式中，所述含钒的培养基为五价钒离子浓度为100～500mg/l的lb培养基。在一些具体实施例中，含钒的培养基为五价钒离子浓度为200～300mg/l的lb培养基。

5、在本发明的一个实施方式中，培养为恒温振荡培养，培养基的ph为3～11，培养温度为25～40℃，培养时间为1～5天。

6、在一些具体实施例中，培养基的ph为5～7，培养温度为30℃，培养时间为3～5天。

7、作为优选方案，当微生物为pfwt01时，含钒的培养基为五价钒离子浓度为300mg/l的lb培养基，培养温度30℃，培养基的ph为7，培养时间为5天；当微生物为pfyn01时，含钒的培养基为五价钒离子浓度为200mg/l的lb培养基，培养温度30℃，培养基的ph为5，培养时间为3天。

8、在本发明的一个实施方式中，振荡速率为100～200rpm。优选的，振荡速率为120rpm。

9、在本发明的一个实施方式中，收集代谢产物方法为：将培养液离心后去上清，得到代谢产物。

10、在本发明的一个实施方式中，离心条件为3000～5000rpm，5～15min。在一个具体实施例中，离心条件为4000rpm，10min。

11、在本发明的一个实施方式中，提纯方法为：将代谢产物用乙醇回流提取，固液分离，液体浓缩得到浓缩物，浓缩物与石油醚混合超声提取后，固液分离，取固体，干燥。

12、在本发明的一个实施方式中，超声提取的温度为30～50℃，超声频率为30～50khz。优选的，超声提取的温度为40℃，超声频率为40khz。

13、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

14、本发明采用pfyn01或pfwt01为菌种，利用微生物发酵方法生产齐墩果酸，生长周期短、过程可控，能够缓解对植物资源的依赖，具有可观的经济效益和绿色环保的社会效益。

15、本发明方法简单，安全无污染，所得齐墩果酸的产量高，为人工合成齐墩果酸奠定了基础。

技术特征：

1.一种微生物发酵生产齐墩果酸的方法，其特征在于：所述微生物为pfyn01或pfwt01，其中，pfyn01的保藏号为cctcc no：m2016174，pfwt01的保藏号为cctcc no：m2016175。

2.根据权利要求1所述的微生物发酵生产齐墩果酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的微生物发酵生产齐墩果酸的方法，其特征在于：所述含钒的培养基为五价钒离子浓度为100～500mg/l的lb培养基；优选含钒的培养基为五价钒离子浓度为200～300mg/l的lb培养基。

4.根据权利要求2所述的微生物发酵生产齐墩果酸的方法，其特征在于：培养为恒温振荡培养，培养基的ph为3～11，培养温度为25～40℃，培养时间为1～5天；优选培养基的ph为3～11，培养温度为25～40℃，培养时间为1～5天。

5.根据权利要求4所述的微生物发酵生产齐墩果酸的方法，其特征在于：当微生物为pfwt01时，含钒的培养基为五价钒离子浓度为300mg/l的lb培养基，培养温度30℃，培养基的ph为7，培养时间为5天；当微生物为pfyn01时，含钒的培养基为五价钒离子浓度为200mg/l的lb培养基，培养温度30℃，培养基的ph为5，培养时间为3天。

6.根据权利要求4所述的微生物发酵生产齐墩果酸的方法，其特征在于：振荡速率为100～200rpm；优选振荡速率为120rpm。

7.根据权利要求2所述的微生物发酵生产齐墩果酸的方法，其特征在于：收集代谢产物方法为：将培养液离心后去上清，得到代谢产物。

8.根据权利要求7所述的微生物发酵生产齐墩果酸的方法，其特征在于：离心条件为3000～5000rpm，5～15min；优选离心条件为4000rpm，10min。

9.根据权利要求2所述的微生物发酵生产齐墩果酸的方法，其特征在于：提纯方法为：将代谢产物用乙醇回流提取，固液分离，液体浓缩得到浓缩物，浓缩物与石油醚混合超声提取后，固液分离，取固体，干燥。

10.根据权利要求9所述的微生物发酵生产齐墩果酸的方法，其特征在于：超声提取的温度为30～50℃，超声频率为30～50khz；优选超声提取的温度为40℃，超声频率为40khz。

技术总结
本发明涉及生产齐墩果酸的方法，具体涉及利用微生物发酵生产齐墩果酸的方法，属于微生物发酵技术领域。本发明解决的技术问题是提供一种生物发酵生产齐墩果酸的方法。该方法利用微生物PFYN01或PFWT01发酵生产齐墩果酸，其中，PFYN01的保藏号为CCTCCNO：M2016174，PFWT01的保藏号为CCTCC NO：M2016175。本发明采用PFYN01或PFWT01为菌种，利用微生物发酵方法生产齐墩果酸，生长周期短、过程可控，能够缓解对植物资源的依赖，具有可观的经济效益和绿色环保的社会效益。本发明方法简单，安全无污染，所得齐墩果酸的产量高，为人工合成齐墩果酸奠定了基础。

技术研发人员：彭书明,姜浩,滕一,陈立粒,毛志强,黄艺
受保护的技术使用者：成都理工大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/17