专利名称：微生物溶液制作游离型胆汁酸的工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于ー种新颖的用微生物溶液水解结合型胆汁酸的方法，具体为微生物溶液制作游离型胆汁酸的エ艺。
背景技术：
众所周知，各种动物胆汁中都存在大量胆汁酸盐。从动物胆汁中分离纯化出的各种胆汁酸単体，都是十分重要的医药和エ 业原料。胆汁中的胆汁酸是以结合型(结合甘氨酸或牛黄酸)胆汁酸盐形式存在，提取胆汁酸的关键ー步就是要将结合型的胆汁酸皂化成游离型胆汁酸。一直以来，生物化学行业都是以高浓度的NaOH，在高温或高压状态下长时间水解结合型胆汁酸变为游离型胆汁酸，最后用大量无机酸，酸化得到粗酸。此过程中存在着不安全、高成本并产生大量生产废水，破坏环境等问题。本发明是利用胆汁在微生物溶液的作用下，温和的反应，得到药用游离型胆汁酸，相关皂化工艺的文献主要有陆进、杜守颖、赵丽瑞、张薇发表的“猪去氧酸提取エ艺研究”，《中国中药杂志》，2004年第05期。王国美、张家田发表的“从鹅鸭胆汁中提取鹅去氧胆酸”，《基层中药杂志》，1996年第04期。但是迄今为止，未见有利用微生物溶液的作用水解结合型胆汁酸的研究和报道。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供了ー种微生物溶液制作游离型胆汁酸的エ艺。本发明解决其技术问题的基本思路是依据胆汁酸在动物体内属于肠肝循环的原理，取动物回肠内容物及大肠内容物来培养提取其中的微生物，进而来水解结合型胆汁酸变成游离型胆汁酸。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是ー种微生物溶液制作游离型胆汁酸的エ艺，其特征在于该エ艺分为两步第一步为微生物溶液制作取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物； 在刮出的内容物中，添加内容物体积O. 5-10倍的水稀释混匀，过滤除掉固体杂质，得到滤液；按滤液体积加入O. 1-0. 5倍的MRS培养基，保持温度在35_42°C，培养24_72小吋，
得培养液；用离心机分离培养液，得到沉淀物；加沉淀物重量1-100倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液；常温保存微生物溶液，备用；
第二步为游离型胆汁酸制作取动物胆汁，按胆汁量体积添加微生物溶液O. 5ml-3ml/L混合均匀，得混合液；混合液在25°C _42°C温度条件下，反应24-72小吋，就得到游离型胆汁酸溶液。在反应过程中，可以用G型薄层硅胶板(展开剂为异辛烷醋酸こ酷冰醋酸正丁醇；10 5 1.5 I. 5)，显色剂为10%磷钥酸こ醇溶液)等监控设备定性分析反应情况直至完全反应。本发明的有益效果是，安全、无污染，是ー种温和的微生物的水解エ艺。
具体实施例方式下面结合具体的实施例对本发明进ー步说明。但本发明的应用范围不限于下列实施例。实施例I :取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物；在刮出的内容物中，添加内容物体积O. 5倍的水稀释混匀，用布过滤除掉固体杂质，得到滤液；按滤液体积加入O. I倍的MRS培养基，保持温度在42°C，培养72小时，得培养液；用离心机以5000r/min离心15min,沉淀培养液,得到沉淀物；加沉淀物重量80倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液；常温保存微生物溶液，备用。取去了胆皮的鸭胆汁1000ml，在搅拌装态下，加入上述微生物溶液3ml，升温至32°C，反应24小时，期间用G型薄层硅胶板定性分析，得到药用游离型胆汁酸溶液。实施例2 ；取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物；在刮出的内容物中，添加内容物体积3倍的水稀释混匀，用过滤机过滤除掉固体杂质，得到滤液；按滤液体积加入O. 2倍的MRS培养基，保持温度在40°C，培养70小时，得培养液；用离心机以3000r/min离心18min,沉淀培养液,得到沉淀物；加沉淀物重量1-100倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液；常温保存微生物溶液，备用。取去了胆皮的猪胆汁1000ml，在搅拌装态下，加入微生物溶液2ml，升温至38°C，反应48小吋，期间用G型薄层硅胶板定性分析，得到药用游离型胆汁酸溶液。实施例3 取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物；在刮出的内容物中，添加内容物体积6倍的水稀释混匀，用布过滤除掉固体杂质，得到滤液； 按滤液体积加入O. 2倍的MRS培养基，保持温度在38°C，培养60小时，得培养液；用离心机以4000r/min离心16min,沉淀培养液,得到沉淀物；
加沉淀物重量90倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液；常温保存微生物溶液，备用。取去了胆皮的鸡胆汁1000ml，在搅拌装态下，加入上述微生物溶液O. 8ml，升温至28°C，反应56小时，期间用G型薄层 硅胶板定性分析，得到药用游离型胆汁酸溶液。
权利要求
1.一种微生物溶液制作游离型胆汁酸的エ艺，其特征在于该エ艺分为两步 第一步为微生物溶液制作 取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物； 在刮出的内容物中，添加内容物体积O. 5-10倍的水稀释混匀，过滤除掉固体杂质，得到滤液； 按滤液体积加入O. 1-0. 5倍的MRS培养基，保持温度在35-42°C，培养24-72小时，得培养液； 用离心机分离培养液，得到沉淀物； 加沉淀物重量1-100倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液； 常温保存微生物溶液，备用； 第二步为游离型胆汁酸制作 取动物胆汁，按胆汁量体积添加微生物溶液O. 5ml-3ml/L混合均匀，得混合液； 混合液在25°C _42°C温度条件下，反应24-72小时，就得到游离型胆汁酸溶液。
全文摘要
一种微生物溶液制作游离型胆汁酸的工艺，其特征在于该工艺分为两步第一步为微生物溶液制作取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物；在刮出的内容物中，添加内容物体积0.5-10倍的水稀释混匀，过滤除掉固体杂质，得到滤液；按滤液体积加入0.1-0.5倍的MRS培养基，保持温度在35-42℃，培养24-72小时，得培养液；用离心机沉淀培养液，得到沉淀物；加沉淀物重量1-100倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液；常温保存微生物溶液；第二步为游离型胆汁酸制作取动物胆汁，按胆汁量体积添加微生物溶液0.5ml-3ml/L混合均匀得混合液；混合液在25℃-42℃温度条件下，反应24-72小时，就得到游离型胆汁酸溶液。
文档编号C12P33/00GK102690856SQ201210175310
公开日2012年9月26日 申请日期2012年5月30日 优先权日2012年5月30日
发明者吴宪君, 吴昱隆, 宁玉蓉, 干文冬 申请人:绵阳劲柏生物科技有限责任公司