专利名称：能水解结合型胆汁酸的微生物溶液的制备方法
技术领域：
本发明属于ー种微生物溶液的制备方法，具体为能水解结合型胆汁酸的微生物溶液的制备方法。用该微生物溶液水解结合型胆汁酸变为エ业上需要的游离型胆汁酸。
背景技术：
各种动物胆汁中都存在着与甘氨酸和牛磺酸结合的胆汁酸盐，一直以来，人们分离エ业和医药胆汁酸单体都是首先用高浓度的NaoH，在长时间高温或高压条件下，水解结合型胆汁酸变为游离型胆汁酸，如曹荣安、李良玉、刘妍妍、范淼、张丽萍发表的“猪胆汁中 胆酸皂化工艺研究”(见《食品科技》2009年第11期)。寻找ー种温和、安全的水解方法，是水解结合型胆汁酸变为游离型胆汁酸的发展方向。已有文献还表明，胆汁酸是胆汁的重要成分，在脂肪代谢中起着重要作用。胆汁酸主要存在于肠肝循环系统并通过再循环起一定的保护作用。只有ー少部分胆汁酸进入外围循环。促进胆汁酸肠肝循环的动力是肝细胞的转运系统一吸收胆汁酸并将其分泌入胆汁、缩胆囊素诱导的胆囊收缩、小肠的推进蠕动，回肠黏膜的主动运输及血液向门静脉的流入。胆汁酸在肠中通过两种机理被机体重新吸收。进餐后，胆囊在胰酶分泌素作用下发生收缩。在收缩过程中，胆囊的作用像马达，驱动肠肝循环。通常情况下，在进餐消化后30分钟内，十二指肠中的胆汁酸浓度急剧升高。在肠道中，各种形式的胆汁酸充分发挥各自的生理功能，并再次决定了自身的命运。肠道上段胆汁酸与脂类的消化吸收有夫。肠道下段(即回肠及近侧结肠)胆汁酸自身发生变化在肠内微生物作用下发生转化，并在肠黏膜中大部分以原来的或转化的形式按主动运输或被动运输机理被重新吸收。只有一小部分随食物残渣排出体外。胆汁酸盐极性越差，越容易与未吸收的纤维素或微生物结合，也越容易通过被动扩散被吸收。肠内微生物主要集中在回肠内容物及大肠内容物中。所述内容物主要指肠内待排泄物。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明抛开了常规的用NaoH皂化结合型胆汁酸的エ艺，依据胆汁酸在动物体内属于肠肝循环的原理，采用ー种有效方法，从肠内内容物中提取出能水解结合型胆汁酸的微生物溶液。本发明解决其技术问题的基本思路是依据胆汁酸在动物体内属于肠肝循环的原理，取动物回肠内容物及大肠内容物来培养提取其中的微生物，进而来水解结合型胆汁酸变成游离型胆汁酸。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一种能水解结合型胆汁酸的微生物溶液的制备方法，其特征是取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物；在刮出的内容物中，添加内容物体积O. 5-10倍的水稀释混匀，过滤除掉固体杂质，得到滤液；按滤液体积加入O. 1-0. 5倍的MRS培养基，保持温度在35_42°C，培养24_72小吋，
得培养液；用离心机分离培养液，得到沉淀物；加沉淀物重量1-100倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液；常温保存微生物溶液，备用。本发明中，所述内容物主要指肠内待排泄物。MRS为(肉汤)培养基。
本发明的有益效果是，这种微生物溶液能水解结合型胆汁酸变为エ业上需要的游离型胆汁酸。进而还可以从鸭胆汁中用大孔树脂等方法分离其中的鹅去氧胆酸(CDCA)。
具体实施例方式下面结合具体的实施例对本发明进ー步说明。但本发明的应用范围不限于下列实施例。实施例I :取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物；在刮出的内容物中，添加内容物体积O. 5倍的水稀释混匀，用布过滤除掉固体杂质，得到滤液；按滤液体积加入O. I倍的MRS培养基，保持温度在42°C，培养72小时，得培养液；用离心机以5000r/min离心15min,沉淀培养液,得到沉淀物； 加沉淀物重量80倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液；常温保存微生物溶液，备用。实施例2 取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物；在刮出的内容物中，添加内容物体积3倍的水稀释混匀，用过滤机过滤除掉固体杂质，得到滤液；按滤液体积加入O. 2倍的MRS培养基，保持温度在40°C，培养70小时，得培养液；用离心机以3000r/min离心18min,沉淀培养液,得到沉淀物；加沉淀物重量1-100倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液；常温保存微生物溶液，备用。实施例3:取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物；在刮出的内容物中，添加内容物体积6倍的水稀释混匀，用布过滤除掉固体杂质，得到滤液；按滤液体积加入O. 2倍的MRS培养基，保持温度在38°C，培养60小时，得培养液；用离心机以4000r/min离心16min,沉淀培养液,得到沉淀物；加沉淀物重量90倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液；常温保存微生物溶液，备用。实施例4 取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物；在刮出的内容物中，添加内容物体积6倍的水稀释混匀，用布过滤除掉固体杂质，得到滤液；按滤液体积加入O. 4倍的MRS培养基，保持温度在36°C，培养72小时，得培养液；用离心机以6000r/min离心IOmin,沉淀培养液,得到沉淀物；
加沉淀物重量20倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液；常温保存微生物溶液，备用。实施例5 取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物；在刮出的内容物中，添加内容物体积3倍的水稀释混匀，用布过滤除掉固体杂质，得到滤液；按滤液体积加入O. 26倍的MRS培养基，保持温度在38°C，培养42小时，得培养液；用离心机以4000r/min离心15min,沉淀培养液,得到沉淀物；加沉淀物重量5倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液；常温保存微生物溶液，备用。
权利要求
1.一种能水解结合型胆汁酸的微生物溶液的制备方法，其特征是 取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物； 在刮出的内容物中，添加内容物体积O. 5-10倍的水稀释混匀，过滤除掉固体杂质，得到滤液； 按滤液体积加入O. 1-0. 5倍的MRS培养基，保持温度在35-42°C，培养24-72小时，得培养液； 用离心机分离培养液，得到沉淀物； 加沉淀物重量1-100倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液； 常温保存微生物溶液，备用。
全文摘要
一种能水解结合型胆汁酸的微生物溶液的制备方法，其特征是取动物回肠及大肠，刮出回肠和大肠中的内容物；在刮出的内容物中，添加内容物体积0.5-10倍的水稀释混匀，过滤除掉固体杂质，得到滤液；按滤液体积加入0.1-0.5倍的MRS培养基，保持温度在35-42℃，培养24-72小时，得培养液；用离心机沉淀培养液，得到沉淀物；加沉淀物重量1-100倍的无菌生理盐水混悬，得到能水解结合型胆汁酸的微生物溶液；常温保存微生物溶液，备用。这种微生物溶液能水解结合型胆汁酸变为工业上需要的游离型胆汁酸。进而还可以从鸭胆汁中用大孔树脂等方法分离其中的鹅去氧胆酸(CDCA)。
文档编号C12N1/00GK102703320SQ201210175319
公开日2012年10月3日 申请日期2012年5月30日 优先权日2012年5月30日
发明者吴宪君, 吴昱隆, 宁玉蓉, 干文冬 申请人:绵阳劲柏生物科技有限责任公司