PTEN、TSC1和TSC2基因在马兜铃酸敏感性检测中的应用

本发明属于生物医学，具体涉及 pten、 tsc1和 tsc2基因的在马兜铃酸敏感性检测中的应用。

背景技术：

1、马兜铃酸（aristolochic acids，aas）是一类硝基菲类羧酸，具有肾脏毒性和致癌性。在马兜铃酸类化合物中，主要的毒性成分为马兜铃酸ⅰ（aa-ⅰ）和马兜铃酸ⅱ（aa-ⅱ）。已报道的大量马兜铃酸肾病（aan）病例中，有些aan患者后续发生尿路上皮癌和膀胱癌。泌尿系统致癌性的发现使马兜铃酸被列为ⅰ类致癌物。现在存于2020版药典中的马兜铃科植物仅有细辛一种，细辛临床应用广泛，主要用于治疗过敏性哮喘、鼻炎、咳嗽以及新冠病毒感染等症。除了入汤剂外，大量的中成药制剂中亦含有细辛。申请人前期使用质谱检测了中国药典中收载的含有细辛的中成药中aa-ⅰ的含量，在人参再造丸、珠贝定喘丸、小青龙汤口服液、通天口服液、儿童清肺口服液、九味羌活颗粒、辛芩颗粒、养血清脑丸颗粒、参芪十一味颗粒、醒脑再造丸胶囊、参三七伤药胶囊中未检测出aa-ⅰ；鹭鸶咯丸、同仁大活络丸、散风活络丸、十一味参芪片、胃炎宁颗粒、小青龙汤颗粒中的aa-ⅰ含量在质谱检测限以下；在平肝舒络丸、乌梅丸、风湿安泰片、参三七伤药片、鼻炎灵片、猴枣牛黄散、正天丸、痧气丸、追风透骨片、鼻渊舒口服液、齿痛消炎灵颗粒、镇脑宁胶囊、感特灵胶囊、辛芳鼻炎胶囊、十一味参芪胶囊中检测出aa-ⅰ含量范围在0.01-0.05μg/g。

2、药物摄入体内后经肝组织代谢，机体的遗传背景不同、以及是否处于疾病状态会影响机体对药物的代谢，导致机体对药物出现不同的反应，因此筛选药物敏感性基因对临床安全用药至关重要。含马兜铃酸中药在临床应用一直争议较大，aa-ⅰ长期给药造成肾脏损伤及肾纤维化，而针对aa-ⅰ是否能诱导肝脏损伤，各个研究团队结果并不一致。临床结果显示马兜铃酸肾病患者具有性别差异性，以女性患者居多。由此推测马兜铃酸毒性可能具有人群易感性，本技术旨在提供马兜铃酸毒性易感基因，为临床安全用药提供科学依据。

3、 pten基因突变会导致错构瘤综合征，为常染色体显性遗传病。患者会发生乳腺癌、甲状腺癌、子宫内膜癌和其他癌症。 tsc1、 tsc2基因突变会导致结节性硬化症，其为一种多器官受累的常染色体显性遗传病，临床诊断指标为大脑皮质结节、室管膜下巨细胞和星形细胞瘤、肾脏的血管肌脂肪瘤、淋巴管性肌瘤病、心脏横纹肌瘤、面部血管纤维瘤、皮肤皮革样病变和白斑。tsc1与tsc2在体内是以复合体形式存在，tsc2敲除后会导致tsc1的降解。

4、现有技术中尚未公开 pten、 tsc1和 tsc2基因在马兜铃酸敏感性检测中的应用。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供了 pten、 tsc1和 tsc2可作为马兜铃酸敏感性基因分子标志物，用于马兜铃酸毒性反应个体化差异的早期监测。

2、一方面，本发明提供了一种用于检测分子标志物的试剂在制备马兜铃酸敏感性检测产品中的应用，所述的分子标志物为 pten、 tsc1或 tsc2中的至少一种。

3、具体地，所述的产品用于检测对马兜铃酸毒性的敏感性。

4、所述的 pten、 tsc1或 tsc2的基因突变会诱导马兜铃酸毒性增强。

5、进一步具体地，所述的产品用于检测 pten、 tsc1或 tsc2的表达量，即 pten、 tsc1或 tsc2mrna和蛋白表达可以诊断马兜铃酸毒性的个体化差异。

6、更进一步具体地，所述的 pten、 tsc1、 tsc2基因测序fpkm数值小于0.5以下判断临床个体为马兜铃酸毒性敏感个体。

7、具体地，所述的试剂为特异性结合 pten、 tsc1或 tsc2的试剂。

8、优选地，所述的特异性结合 pten、 tsc1或 tsc2的试剂可以是pten、tsc1或tsc2的抗体。

9、具体地，所述的试剂为特异性结合 pten、 tsc1或 tsc2的核酸的试剂。

10、具体地，所述的试剂为用于检测 pten、 tsc1或 tsc2表达量的试剂。

11、优选地，所述的试剂为特异性扩增 pten、 tsc1或 tsc2基因的引物和特异性识别 pten、 tsc1或 tsc2的 mrna的探针。

12、具体地，所述的产品包括但不限于：特异性分析 pten、 tsc1或 tsc2的芯片或试剂盒。

13、在一些实施例中，所述的产品为芯片；所述的芯片包括但不限于：固相载体和特异性识别 pten、 tsc1或 tsc2的探针。

14、在一些实施例中，所述的产品为试剂盒；所述试剂盒的包括但不限于：核酸抽提试剂、荧光染料、探针和引物中的一种或多种。

15、在另一些实施例中，所述的产品为试剂盒；所述的试剂盒为检测pten、tsc1或tsc2的elisa试剂盒；所述试剂盒的包括特异性识别pten、tsc1或tsc2的抗体；所述试剂盒的还包括固相载体、标准品、底物、终止液和缓冲液中的一种或多种。

16、具体地，所述的产品针对的检测组织包括但不限于：血清、肝组织、肾组织、心脏组织、神经组织、皮肤组织、子宫组织、甲状腺组织、乳腺组织、血管或心脏组织。

17、又一方面，本发明提供了检测马兜铃酸敏感性的方法。

18、所述的方法中包括：药物喂食小鼠，检测小鼠组织中 pten、 tsc1或 tsc2的表达量。

19、所述的组织包括但不限于：血清、肝组织、肾组织、心脏组织、神经组织、皮肤组织、子宫组织、甲状腺组织、乳腺组织、血管或心脏组织。

20、本发明所取得的技术效果： pten、 tsc1或 tsc2的基因突变会诱导马兜铃酸毒性增强。 pten、 tsc1或 tsc2的基因突变会导致 pten、 tsc1或 tsc2mrna和蛋白质表达水平下降，因此检测 pten、 tsc1或 tsc2的mrna和蛋白表达可以诊断马兜铃酸毒性的个体化差异。