一种增加scFv二聚体的方法与流程

本申请涉及scfv二聚体生产，特别是涉及一种增加scfv二聚体的方法。

背景技术：

1、单链抗体(single chain antibody fragment，scfv)，是由抗体重链可变区和轻链可变区通过短肽(linker)连接而成的抗体。研究显示，scfv二聚体的活性通常明显高于单体；然而，由于scfv没有fc(fragment crystallizable)，为使scfv产品以二聚体为主，通常是通过纯化离子交换层析技术，将细胞上清液中的二聚体捕获并提纯。业界也有通过分子设计，将一价scfv设计成二价，这样从分子水平就设计成二聚体，从而获得更多更纯的scfv二聚体。

2、目前，通过纯化层析分离提纯scfv二聚体是行业内的通常做法，但对部分产品，因为scfv缺乏链间二硫键，单体通常是通过非共价键结合形成scfv二聚体甚至多聚体，在细胞表达时，形成的二聚体比例远低于单体，从而导致scfv二聚体纯化收率极低，丧失商业化价值。通过分子设计从根源上解决二聚体问题也是一种方法，但是，分子设计不确定性高、研发时间长、部分分子设计难度大、表达量低。

3、因此，如何简单有效的增加scfv二聚体仍然是本领域的技术难题。

技术实现思路

1、本申请的目的是提供一种新的增加scfv二聚体的方法。

2、为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：

3、本申请公开了一种增加scfv二聚体的方法，包括对细胞收获液进行冷冻处理，以增加scfv二聚体的量。其中，细胞收获液是指细胞培养结束后，去除细胞获得的含有scfv和scfv二聚体的溶液。

4、需要说明的是，本申请研究偶然发现，对细胞收获液进行冷冻处理，能够增加scfv二聚体的量；因此，创造性的提出通过对细胞收获液进行冷冻处理，以增加scfv二聚体的量。

5、本申请的一种实现方式中，冷冻处理的温度为-15℃至-30℃。

6、需要说明的是，本申请深入研究发现，对细胞收获液进行-15℃、-20℃、-25℃或-30℃冷冻都能够不同程度的增加scfv二聚体的量，其中，尤其是-20℃冷冻效果最佳。本申请的一种实现方式中，从native-page电泳图可以看出-20℃冷冻处理后scfv二聚体的量明显更多。

7、本申请的一种实现方式中，冷冻处理的时间为至少12小时。

8、需要说明的是，本申请研究发现，-20℃冷冻处理条件下随着冷冻时间的增加scfv二聚体的量呈一定程度的增加，冷冻处理至少12小时能够获得较好的scfv二聚体量的增加。可以理解，原则上，只要对细胞收获液进行-20℃冷冻，并且能够使细胞收获液冻结成冰，然后再解冻，即可实现scfv二聚体量增加的效果。

9、本申请的一种实现方式中，细胞收获液为细胞培养液经过离心获得的上清液，或者经过过滤获得的滤液。

10、需要说明的是，本申请的关键在于对细胞收获液进行冷冻处理，至于细胞收获液的获得方式可以参考现有技术，包括但不仅限于离心或过滤。

11、本申请的一种实现方式中，离心获得细胞收获液离心的条件为室温5220g离心5min。

12、由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：

13、本申请增加scfv二聚体的方法，通过简单的冷冻处理即可有效的增加scfv二聚体的量，为收获更多更纯的scfv二聚体提供了一种简单有效的方法。

技术特征：

1.一种增加scfv二聚体的方法，其特征在于：包括对细胞收获液进行冷冻处理，以增加scfv二聚体的量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述冷冻处理的温度为-15℃至-30℃。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述冷冻处理的时间为至少12小时。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述细胞收获液为细胞培养液经过离心获得的上清液，或者经过过滤获得的滤液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述离心的条件为室温3800~5220g离心5~30min。

技术总结
本申请公开了一种增加scFv二聚体的方法。本申请增加scFv二聚体的方法，包括对细胞收获液进行冷冻处理，以增加scFv二聚体的量。本申请增加scFv二聚体的方法，通过简单的冷冻处理即可有效的增加scFv二聚体的量，为收获更多更纯的scFv二聚体提供了一种简单有效的方法。

技术研发人员：孙妍,乐文民,李彪,马婷婷,苏庆茹
受保护的技术使用者：深圳市乐土生命科技投资有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/24