一种巨大芽孢杆菌HY-16及其应用的制作方法

本发明涉及微生物，尤其涉及一种巨大芽孢杆菌hy-16及其应用。

背景技术：

1、农业生产长期依赖化学肥料，不仅大量浪费不可再生资源，还导致土质变差、农产品品质下降和环境污染等问题，极大影响了人类的健康生存。当前，作为一项新的农业措施，施用微生物肥料在发展高产、高效、优质农业和生产绿色食品、保护农业生态环境中的作用已引起国内外学者的高度重视。生物固定的氮量在整个自然界的固氮量中占有很高的比例已经被大量的研究证实，一般是非生物固氮的两倍多，利用生物固氮这一重要途径来提供氮肥给农业生产带来了良好的经济效益、无污染等好处。

2、巨大芽孢杆菌(bacillus megaterium)是一种解磷促钾固氮细菌，能够很好的降解土壤中不能被植物利用的磷、钾，提高土壤肥力，同时固定空气中的氮气，促进作物增产。

3、中国专利cn116333905b文献公开了一种巨大芽孢杆菌cnbg-pgpr-16，其具有产酸能力较强，降低土壤ph以及促蓝莓植株生长的功能。但对巨大芽孢杆菌cnbg-pgpr-16是否具有固氮作用并没有进行研究。而且目前国内对巨大芽孢杆菌在微生物肥料上的研究主要集中在菌株选育、解磷效果、发酵条件优化及与解钾菌相互作用等方面，对巨大芽孢杆菌的固氮作用却不多见。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提出了一种同时具有固氮酶活性和分泌生长素吲哚乙酸功能的一种巨大芽孢杆菌(bacillus megaterium)hy-16。

2、本发明的技术方案是这样实现的：本发明提供了一种巨大芽孢杆菌hy-16，所述巨大芽孢杆菌hy-16的分类名称为巨大芽孢杆菌(bacillus megaterium)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc m 20232604。

3、优选地，所述巨大芽孢杆菌hy-16固氮酶活性为800-1000nmol/(ml·h)。

4、优选地，所述巨大芽孢杆菌hy-16在生长代谢过程中吲哚乙酸的分泌量为120-180mg/l。

5、优选地，所述巨大芽孢杆菌hy-16具有耐酸碱属性，可在ph 5-9条件下生长。

6、优选地，所述巨大芽孢杆菌hy-16具有耐热属性，可在10-45℃温度范围生长。

7、本发明还提供了hy-16菌株的发酵菌液的制备方法，包括如下步骤：将所述巨大芽孢杆菌hy-16接种到lb固体培养基，28-32℃培养12-24h进行活化，挑取单菌落接入lb培养基中，28-32℃恒温振荡培养12-24h，以10-12％的接种量将培养物接种到新鲜lb培养基，28-32℃恒温振荡培养36-72h，离心收集菌体，用无菌去离子水洗涤重悬，调节菌液浓度至5×107-1.5×1010cfu/ml，即得所述发酵菌液。

8、每升所述lb固体培养基包括以下组分：酵母粉4-6g、氯化钠8-12g、蛋白胨8-12g，琼脂粉13-18g，ph 7.0-7.4。

9、每升所述lb培养基包括以下组分：酵母粉4-6g、氯化钠8-12g、蛋白胨8-12g，ph7.0-7.4。

10、本发明还提供了所述巨大芽孢杆菌hy-16或所述复合微生物菌剂在生产吲哚乙酸中的应用。

11、本发明还提供了所述巨大芽孢杆菌hy-16或所述复合微生物菌剂在生产固氮酶中的应用。

12、本发明还提供了所述巨大芽孢杆菌hy-16或所述复合微生物菌剂在促植物生长或改善土壤质量中的应用。

13、本发明的巨大芽孢杆菌hy-16相对于现有技术具有以下有益效果：

14、(1)本发明的巨大芽孢杆菌hy-16具有高效的固氮酶活性和分泌吲哚乙酸的能力，固氮酶活性经测定可达800-1000nmol/(ml·h)，代谢过程中所分泌的吲哚乙酸可达120-180mg/l，能应用在固氮酶和吲哚乙酸的生产，具有工业化的前景。(2)本发明的巨大芽孢杆菌hy-16显示出优异的耐高温和耐酸碱的强抗逆性能，能够在ph 5-9范围内和高达45℃的温度下正常生长。因此巨大芽孢杆菌hy-16可以在不同类型的土壤和气候条件下存活和发挥作用，包括在高温地区或酸碱度较高的土壤中，本菌株在农业生产中具有广泛的应用前景。

15、(3)本发明的巨大芽孢杆菌hy-16能显著提高植物对氮素的吸收效率，促进植物生长，提高农业产量。将本发明的巨大芽孢杆菌hy-16定期施用于土壤，能提高土壤中有机质的含量，增强土壤养分的保持能力，进而优化土壤结构。因此，本发明对降低农业生产中农药、化肥的使用，减少农业面源污染，改善农田土壤生态环境，提高农产品品质等方面均具有重要意义。

技术特征：

1.一种巨大芽孢杆菌hy-16，其特征在于，所述巨大芽孢杆菌hy-16的分类名称为巨大芽孢杆菌(bacillus megaterium)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc m20232604。

2.如权利要求1所述巨大芽孢杆菌hy-16，其特征在于：所述巨大芽孢杆菌hy-16固氮酶活性为800-1000nmol/(ml·h)。

3.如权利要求1所述巨大芽孢杆菌hy-16，其特征在于：所述巨大芽孢杆菌hy-16在生长代谢过程中吲哚乙酸的分泌量为120-180mg/l。

4.如权利要求1所述巨大芽孢杆菌hy-16，其特征在于：所述巨大芽孢杆菌hy-16具有耐酸碱属性，可在ph 5-9条件下生长。

5.如权利要求1所述巨大芽孢杆菌hy-16，其特征在于：所述巨大芽孢杆菌hy-16具有耐热属性，可在10-45℃温度范围生长。

6.hy-16菌株的发酵菌液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将所述巨大芽孢杆菌hy-16接种到lb固体培养基，28-32℃培养12-24h进行活化，挑取单菌落接入lb培养基中，28-32℃恒温振荡培养12-24h，以10-12％的接种量将培养物接种到新鲜lb培养基，28-32℃恒温振荡培养36-72h，离心收集菌体，用无菌去离子水洗涤重悬，调节菌液浓度至5×107-1.5×1010cfu/ml，即得所述发酵菌液。

7.一种复合微生物菌剂，其特征在于，所述微生物复合制剂包含权利要求1所述巨大芽孢杆菌hy-16的活菌。

8.权利要求1所述巨大芽孢杆菌hy-16或权利要求7所述复合微生物菌剂在生产吲哚乙酸中的应用。

9.权利要求1所述巨大芽孢杆菌hy-16或权利要求7所述复合微生物菌剂在生产固氮酶中的应用。

10.权利要求1所述巨大芽孢杆菌hy-16或权利要求7所述复合微生物菌剂在促植物生长或改善土壤质量中的应用。

技术总结
本发明涉及微生物技术领域，提供了一种巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)HY‑16及其应用。该巨大芽孢杆菌HY‑16具有高效的固氮酶活性和吲哚乙酸分泌能力，固氮酶活性可达800‑1000nmol/(mL·h)，代谢过程中分泌的吲哚乙酸浓度为120‑180mg/L，适用于固氮酶和吲哚乙酸的工业生产。此外，巨大芽孢杆菌HY‑16表现出优异的耐高温和耐酸碱的强抗逆性能，在pH 5‑9范围内和高达45℃的温度下均可生长。因此，该菌株能够在多种土壤类型和气候条件下生存和发挥作用，包括高温地区和酸碱度较高的土壤。本发明在农业生产中具有广泛的应用前景，并在不同环境条件下促进植物生长，提高农作物产量。

技术研发人员：徐维烈,罗嘉润,余娜,周继鑫,詹巧春,汪杰,杨涛
受保护的技术使用者：武汉合缘绿色生物股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/31