表达模块、重组菌株及其应用的制作方法

本发明涉及生物工程领域，尤其涉及表达模块、重组菌株及其应用。

背景技术：

1、香兰素是一种天然产物，主要存在于植物中，特别是香兰科植物，如兰花和香草。香兰素具有独特的香气，散发出甜美、芳香的味道，因此常用于食品、香水、化妆品和药物等领域。

2、除从兰花、香草等植物中传统提取的制备方式，现有技术中制备香兰素的主要方式有：化学合成和生物合成，化学合成香兰素需要多步反应路径，步骤复杂，制备出的香兰素属于化工品，使用或食用存在健康隐患。

3、一些研究表明，野生菌株可能具有合成香兰素的能力，这些野生菌株可以通过优化培养条件和代谢工程的方法来增加香兰素的产量，采用不同的微生物菌种作为底盘细胞生物转化阿魏酸制备香兰素的技术多样发展，有报道的菌种包括但不限于不同来源的拟无枝酸菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌、大肠杆菌等。但野生菌株通常具有较低的香兰素产量，这意味着要获得足够的香兰素，需要大量的菌株和时间，且容易受到环境条件的影响，导致产量的波动，通过改进野生菌株，可以增加其香兰素合成途径的效率，从而提高产量。如公开号为cn102443551b的中国专利公开了一种枯草芽孢杆菌及其生物转化阿魏酸生产香兰素的方法，采用筛选出的枯草芽孢杆菌b7-s(bacillus subtilis b7-s)以阿魏酸为底物的微生物转化生产香兰素。

4、但野生型菌株性质通常不能直接控制或改变，通过基因工程，调节基因表达、优化培养条件等手段，可以对菌株进行精确的调控，以实现所需的产量和性质。改进野生菌株的一种常见方法是将特定基因引入菌株中，使其获得合成目标产物的能力，现有技术通过基因克隆和合成生物学技术，将香兰素合成途径的基因从适当的来源中克隆或合成，并将其插入到微生物的质粒或基因组中，调节相关基因的表达水平，化进一步提高香兰素的产量和质量。

5、现有技术较为常用的是以阿魏酸或丁香酚作为天然底物，通过微生物代谢制备香兰素。其中阿魏酸作为谷维素水解的产物，能够比较稳定大量的获得，且对微生物毒性作用小，因此被认为是微生物生产香兰素优选的前体物质。

6、以阿魏酸为底物合成香兰素的代谢途径主要有两种方式：1.辅酶因子依赖的去乙酰化(非氧化途径)反应。即在辅因子coash、mg2+和atp的存在条件下，由阿魏酰辅酶a连接酶(femloyl-coenzyme a synthetase，fcs)将底物阿魏酸催化生成阿魏酰辅酶a，再进一步通过烯酷辅酶a水合酶/醒缩酶(enoyl-coenzyme ahydratase/aldolase，ech)催化生成香兰素。2.非辅酶因子依赖的氧化脱竣反应。由阿魏酸脱竣酶(ferulic acid decarboxylase，fdc)将底物阿魏酸催化生成4-乙稀基愈创木紛(4-vinylguaiacol，4-vp)，再进一步由类胡萝卜素裂解加氧酶(caulobactersegnis carotenoid cleavage oxygenases，cso2)催化生成香兰素。第一种路径需要添加辅因子，成本较高，因此第二种路径具有更好的应用前景。现有技术中公开了一种高产香兰素的重组拟无枝酸菌、其构建方法与应用，以重组拟无枝酸菌表达阿魏酸脱羧酶基因(opt fdc)和4-乙烯基愈创木酚加氧酶基因(opt cso2)，实现了香兰素产量的提高。

7、蛋白的可溶性表达是限制香兰素产量的重要原因之一，在蛋白质表达过程中，由于多种因素的作用，一部分蛋白质可能会形成不可溶的聚集体，如包涵体或沉淀物。这些聚集体可能由于错误的折叠、聚集或缺乏正确的后续处理而失去了其可溶性，如何提高可溶性蛋白的表达是提高香兰素产量不可或缺的关键技术问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了表达模块、重组菌株及其应用。本发明以大肠杆菌为底盘细胞，以阿魏酸为底物合成香兰素，尽可能提高可溶性蛋白的表达量，进而提高香兰素的产量。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了整合位点作为靶点在合成香兰素中的应用；

4、所述整合位点包括：大肠杆菌的lacz位点和/或ahr位点。

5、在本发明的一些实施方案中，上述应用中，所述大肠杆菌包括：e.colibl21(de3)。

6、本发明还提供了分子伴侣蛋白在合成香兰素中的应用；

7、所述分子伴侣蛋白包括：内源分子伴侣蛋白和/或外源分子伴侣蛋白；

8、所述内源分子伴侣蛋白来源于：escherichia coli；

9、所述外源分子伴侣蛋白来源于：parageobacillus thermoglucosidasius。

10、在本发明的一些实施方案中，上述应用中，所述内源分子伴侣蛋白来源于：e.colibl21(de3)。

11、在本发明的一些实施方案中，上述应用中，所述外源分子伴侣蛋白来源于：parageobacillus thermoglucosidasiusncimb 11955。

12、在本发明的一些实施方案中，上述应用中，所述内源分子伴侣蛋白包括：grpe、dnak、dnaj和grol中的一种或多种；

13、所述外源分子伴侣蛋白包括：grpe、dnak、dnaj、groes和grol中的一种或多种。

14、在本发明的一些实施方案中，上述应用中，所述dnak和所述dnaj组合表达；所述groes和所述grol组合表达。

15、在本发明的一些实施方案中，上述应用中，所述内源分子伴侣蛋白的grpe具有：

16、(1)、如seq id no:1所示的核苷酸序列；或

17、(2)、如(1)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(1)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

18、(3)、与(1)或(2)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列；和/或

19、所述内源分子伴侣蛋白的dnak具有：

20、(4)、如seq id no:2所示的核苷酸序列；或

21、(5)、如(4)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(4)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

22、(6)、与(4)或(5)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列；和/或

23、所述内源分子伴侣蛋白的dnaj具有：

24、(7)、如seq id no:3所示的核苷酸序列；或

25、(8)、如(7)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(7)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

26、(9)、与(7)或(8)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列；和/或

27、所述内源分子伴侣蛋白的grol具有：

28、(10)、如seq id no:4所示的核苷酸序列；或

29、(11)、如(10)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(10)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

30、(12)、与(10)或(11)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列；和/或

31、所述外源分子伴侣蛋白的grpe具有：

32、(13)、如seq id no:5所示的核苷酸序列；或

33、(14)、如(13)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(13)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

34、(15)、与(13)或(14)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列；和/或

35、所述外源分子伴侣蛋白的dnak具有：

36、(16)、如seq id no:6所示的核苷酸序列；或

37、(17)、如(16)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(16)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

38、(18)、与(16)或(17)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列；和/或

39、所述外源分子伴侣蛋白的dnaj具有：

40、(19)、如seq id no:7所示的核苷酸序列；或

41、(20)、如(19)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(19)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

42、(21)、与(19)或(20)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列；和/或

43、所述外源分子伴侣蛋白的groes具有：

44、(22)、如seq id no:8所示的核苷酸序列；或

45、(23)、如(22)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(22)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

46、(24)、与(22)或(23)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列；和/或

47、所述外源分子伴侣蛋白的grol具有：

48、(25)、如seq id no:9所示的核苷酸序列；或

49、(26)、如(25)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(25)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

50、(27)、与(25)或(26)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列。

51、在本发明的一些实施方案中，上述应用中，所述dnak和所述dnaj组合出现，不单独表达。

52、在本发明的一些实施方案中，上述应用中，所述groes和所述grol组合出现，不单独表达。

53、在本发明的一些实施方案中，seq id no:1的序列为：atgagtagtaaagaacagaaaacgcctgaggggcaagccccggaagaaattatcatggatcagcacgaagagattgaggcagttgagccagaagcttctgctgagcaggtggatccgcgcgatgaaaaaattgcgaatctcgaagctcagctggctgaagcccagacccgtgaacgtgacggcattttgcgtgtaaaagccgaaatggaaaacctgcgtcgacgtactgaactggatattgaaaaagcccacaaattcgcgctggagaaattcatcaacgaattgctgccggtgattgatagcctggatcgtgcgctggaagtggctgataaagctaacccggatatgtctgcgatggttgaaggcattgagctgacgctgaagtcgatgctggatgttgtgcgtaagtttggtgttgaagtgatcgccgaaactaacgtgccgctggacccgaatgtgcatcaggctatcgcaatggtggaatctgatgacgttgcgccaggtaacgtactgggcattatgcagaagggttatacgctgaatggtcgtacgattcgtgcggcgatggtaactgtagcgaaagcaaaagcgtaa(escherichia coli(bl21(de3))的grpe)。

54、在本发明的一些实施方案中，seq id no:2的序列为：atgggtaaaataattggtatcgacctgggtactaccaactcttgtgtagcgattatggatggcaccactcctcgtgtgctggagaacgccgaaggcgatcgcaccacgccttctatcattgcctatacccaggatggtgaaactctggttggtcagccggctaaacgtcaggcagtgacgaacccgcaaaacaccctgtttgcgattaaacgcctgattggccgccgcttccaggacgaagaagtacagcgtgatgtttccatcatgccgttcaaaattattgctgctgataacggcgacgcatgggtcgaagttaaaggccagaaaatggcaccgccgcagatctctgctgaagtgctgaaaaaaatgaagaaaaccgctgaagattacctgggtgaaccggtaactgaagctgttatcaccgtaccggcatactttaacgatgctcagcgtcaggcaaccaaagacgcaggccgtatcgctggtctggaagtaaaacgtatcatcaacgaaccgaccgcagctgcgctggcttacggtctggacaaaggtactggcaaccgtactatcgcggtttatgacctgggtggtggtactttcgatatttctattatcgaaatcgacgaagttgacggcgaaaaaaccttcgaagttctggcaaccaacggtgatacccacctgggtggtgaagacttcgacagccgtctgatcaactacctggttgaagaattcaagaaagatcagggcattgacctgcgcaacgatccgctggcaatgcagcgcctgaaagaagcggcagaaaaagcgaaaatcgaactgtcttccgctcagcagaccgacgttaacctgccgtacatcactgcagatgcgaccggtccgaaacacatgaacatcaaagtgactcgtgcgaaactggaaagcctggttgaagatctggtaaaccgttccattgagccgctgaaagttgcactgcaggacgctggcctgtccgtatctgatatcgacgacgttatcctcgttggtggtcagactcgtatgccaatggttcagaagaaagttgctgagttctttggtaaagagccgcgtaaagacgttaacccggacgaagctgtagcaatcggtgctgctgttcagggtggtgttctgactggtgacgtgaaagacgtactgctgctggacgttaccccgctgtctctgggtatcgaaaccatgggcggtgtgatgacgacgctgatcgcgaaaaacaccactatcccgaccaagcacagccaggtgttctctaccgctgaagacaaccagtctgcggtaaccatccatgtgctgcagggtgaacgtaaacgtgcggctgataacaaatctctgggtcagttcaacctggatggtatcaacccggcaccgcgcggcatgccgcagatcgaagttaccttcgatatcgatgctgacggtatcctgcacgtttccgcgaaagataaaaacagcggtaaagagcagaagatcaccatcaaggcttcttctggtctgaacgaagatgaaatccagaaaatggtacgcgacgcagaagctaacgccgaagctgaccgtaagtttgaagagctggtacagactcgcaaccagggcgaccatctgctgcacagcacccgtaagcaggttgaagaagcaggcgacaaactgccggctgacgacaaaactgctatcgagtctgcactgactgcactggaaactgctctgaaaggtgaagacaaagccgctatcgaagcgaaaatgcaggagctggcacaggtttcccagaaactgatggaaatcgcccagcagcaacatgcccagcagcagactgccggtgctgatgcttctgcaaacaacgcgaaagatgacgatgttgtcgacgctgaatttgaagaagtcaaagacaaaaaataa(escherichia coli(bl21(de3))的dnak)。

55、在本发明的一些实施方案中，seq id no:3的序列为：atggctaagcaagattattacgagattttag gcgtttccaaaacagcggaagagcatgaaatcaaaaaggcctacaaacgcctggccatgaaataccacccggaccgtaaccagggtgacaaagaggccgaggcgaaatttaaagagatcaaggaagcttatgaagttctgaccgactcgcaaaaacgtgcggcatacgatcagtatggtcatgctgcgtttgagcaaggtggtatgggcggcggcggttttggcggcggcgcagacttcagcgatatttttggtgacgttttcggcgatatttttggcggcggacgtggtcgtcaacgtgcggcgcgcggtgctgatttacgctataacatggagctcaccctcgaagaagctgtacgtggcgtgaccaaagagatccgcattccgactctggaagagtgtgacgtttgccacggtagcggtgcaaaaccaggtacacagccgcagacctgtccgacctgtcatggttctggtcaggtgcagatgcgtcagggattctttgccgtgcagcagacctgtccacactgtcagggccgcggtacgctgatcaaagatccgtgcaacaaatgtcatggtcatggtcgtgttgagcgcagcaaaacgctgtccgttaaaatcccggcaggggtggacactggagaccgcatccgtcttgcgggcgaaggtgaagcgggcgagcatggcgcaccggcaggcgatctgtacgttcaggttcaggttaaacagcacccgattttcgagcgtgaaggcaacaacctctattgcgaagtcccgatcaacttcgctatggcggcgctgggtggcgaaatcgaagtaccgacccttgatggtcgcgtcaaactgaaagtgcctggcgaaacccagaccggtaagcttttccgtatgcgcggtaaaggcgtcaagtctgtccgcggtggcgcacagggtgatttgctgtgccgcgttgtcgtcgaaacaccggtaggcctgaacgagaagcagaaacagctgctgcaagagctgcaagaaagcttcggtggcccaaccggtgagcacaacagcccgcgctcaaagagcttctttgatggtgtgaagaagttttttgacgacctgacccgctaa(escherichia coli(bl21(de3))的dnaj)。

56、在本发明的一些实施方案中，seq id no:4的序列为：atggcagctaaagacgtaaaattcggtaac gacgctcgtgtgaaaatgctgcgcggcgtaaacgtactggcagatgcagtgaaagttaccctcggtccgaaaggccgtaacgtagttctggataaatctttcggtgcaccgaccatcaccaaagatggtgtttccgttgctcgtgaaatcgaactggaagacaagttcgaaaatatgggtgcgcagatggtgaaagaagttgcctccaaagcgaacgacgctgcaggcgacggtaccaccactgcaaccgtactggctcaggctatcatcactgaaggtctgaaagctgttgctgcgggcatgaacccgatggacctgaaacgtggtatcgacaaagcggttaccgctgcagttgaagaactgaaagcgctgtccgtaccgtgctctgattctaaagcgattgctcaggttggtaccatctccgctaactccgacgaaaccgtaggtaaactgatcgcagaagcgatggacaaagtcggtaaagaaggcgttatcaccgttgaagacggtaccggtctgcaggacgaactggacgtggttgaaggtatgcagttcgaccgtggctacctgtctccttacttcatcaacaagccggaaactggcgcagtagaactggaaagcccgttcatcctgctggctgacaagaaaatctccaacatccgcgaaatgctgccggttctggaagctgttgcaaaagcaggtaaaccgctgctgatcatcgctgaagatgtagaaggcgaagcgctggcaactctggttgttaacaccatgcgtggcatcgtgaaagtcgctgcggttaaagcaccgggcttcggcgatcgtcgtaaagctatgctgcaggatatcgcaaccctgactggcggtaccgtgatctctgaagagatcggtatggagctggaaaaagcaaccctggaagacctgggtcaggctaaacgtgttgtgatcaacaaagacaccaccactatcatcgatggcgtgggtgaagaagctgcaatccagggccgtgttgctcagatccgtcagcagattgaagaagcaacttctgactacgaccgtgaaaaactgcaggaacgcgtagcgaaactggcaggcggcgttgcagttatcaaagtaggtgctgctaccgaagttgaaatgaaagagaaaaaagcacgcgttgaagatgccctgcacgcgacccgtgcagcggtagaagagggcgtggttgctggtggtggtgttgcgctgatccgcgtagcgtctaaactggctgacctgcgtggtcagaacgaagaccagaacgtgggtatcaaagttgcactgcgtgcaatggaagctccgctgcgtcagatcgtattgaactgcggcgaagaaccgtctgttgttgctaacaccgttaaaggcggcgacggcaactacggttacaacgcagcaaccgaagaatacggcaacatgatcgacatgggtatcctggatccaaccaaagtaactcgttctgctctgcagtacgcagcttctgtggctggcctgatgatcaccaccgagtgcatggttaccgacctgccgaaaaacgatgcagctgacttaggcgctgctggcggtatgggcggcatgggtggcatgggcggcatgatgtaa(escherichia coli(bl21(de3))的grol)。

57、在本发明的一些实施方案中，seq id no:5的序列为：atggagaaagaacgcgatgtggcgcaag aacaagctacatacgaacaggagtcgccaaatgcagagcggcaagaggaactaaaggagaatgagcatcaggagaaaaacgcgccagaagagcaggaaaaggtccgggaagaaaacggccggcaggatgcgcaaaaagatgaaataggcgatccggaaaaagcgaaagaagaacaaaacgaagaattggcggcggcaaacgccaaaattgccgaattggaagcgaaaataaaagagatggaaaaccgctatcttcgtttatatgctgattttgaaaatttccgccgccgcacgcgacgagaaatggaagcggcagaaaaataccgcgcccagagcttagttagcgatcttttgcctgttttggacaactttgaacgcgcgttaaaaataaaggcggaagacgaacaagccaaatcgattttgcaaggaatggaaatggtgtaccgttccgtattggacgcgctgaaaaaagaaggagtcgaagcgatcgaagcggtcggcaaaccgttcgacccgcatttgcatcaggcggtgatgcaagtggaagacagcaactatgagccgaacacggttgtggaagagctgcaaaaaggctataagctaaaagatcgcgtcattcgtccagcaatggtcaaagtgagccaataa(parageobacillus thermoglucosidasius ncimb 11955的grpe)。

58、在本发明的一些实施方案中，seq id no:6的序列为：atgagtaaaattatcgggattgacttaggaa caaccaactcatgcgtcgctgtccttgagggcggtgagccaaaagtaattccaaacccggaaggaagccggacaactccttctgttgtggcgtttaaaaacggggaacgtctagtcggggaagtcgcgaaacgccaagcaatcacaaacccaaacacgatcatttcgattaaacgccatatgggaacggactataaagtagagatcgaaggcaaaaaatatacgccgcaagaaatttctgcgattattttacaatacttaaaatcgtatgcggaagactatttgggcgagccggtgacaagagcggttattaccgttccagcttactttaatgatgcgcaacgtcaagcaacaaaagacgctggacgtatcgccggtttacaagtagagcgcatcattaacgagccgacagccgctgcgcttgcgtacggtttggataaagaagaagatcaaacgatcctcgtttatgacttgggaggcggtacgtttgacgtatcgattcttgagcttggcgacggcgtgtttgaagtaaaagcgacggccggcgataaccatcttggcggggatgacttcgaccaagtgattatcgactacttagtggaacaattcaaacaagaacacggcattgatttatccaaagacaaaatggcgctgcaacgtcttaaagacgctgcggaaaaggcgaaaaaagaactttctggcgtaacgcaaacgcaaatttcgctgccgtttatcagcgcgaacgaaacagggccgctgcacattgaaacaacattaacaagagcgaaatttgaagagctgtctgcccatcttgttgaacggacaatgggaccggtccgccaggcgttgcaagatgcgggcttgactcctgccgatatcgacaaagtgatccttgtcggcggttcgacacgcattccggctgtgcaggaagcgattaaacgtgagcttggaaaagagccgcataaaggggttaacccggatgaagttgtagcgattggcgcggcgatccaaggcggtgtgatcgctggagaagtgaaagatgttgttctgcttgacgtcactccgctgtcgcttggcattgaaacaatgggcggcgtgttcacaaaattaattgaacgcaacacgacgattccgacaagcaaatcgcaaattttcactaccgcggcggataaccagacgacggtcgatattcatgtactgcaaggcgaacgtccgatggcagccgacaacaaaacgctcggccgtttccaattaaccgatattccgccggcaccgcgcggcgtaccacaaatcgaagtaacatttgatatcgacgccaacggtattgttcatgtccgcgcaaaagatttagggacaaacaaagagcaatcgataacgataaaatcgtcatcaggtctttccgaagaagaaatccagcgcatgattaaagaagcggaagaaaatgccgaagcggacagaaaacggaaagaagcggcagaactccgcaatgaagcggatcacttagtgttcacaacggaaaaaacgttgaaagaagtggaaggaaaagtagacgaagcggaagtgaaaaaagcgcgcgaagcaaaagacgcgttaaaagcggcgcttgagaaaaacgacatcgatgacattcgcaaaaagaaagaagcgcttcaggaaatcgtgcagcagctttccgttaagctgtacgaacaagcagcaaaacaagcgcaagcccaacaacagacgggagccggcgacgctgcgaaaaaagacgataatgttgtcgatgcggaattcgaagaagtgaaagacgacaacaaataa(parageobacillus thermoglucosidasius ncimb 11955的dnak)。

59、在本发明的一些实施方案中，seq id no:7的序列为：atggcgaaacgagattattatgaaattctc ggagttagcaaaaacgcgacaaaagaagagataaaaaaagcgtatcggaaactttcgaaaaaatatcatccagatattaataaagaaccggatgcggcagaaaagttcaaagaaattaaagaagcgtacgaagtgctaagcgatgaccaaaagcgggcgcattacgatcagtttgggcatgcggatccgaaccaaggtttcggcgggtttcgcagcgatgattttgactttggcggtttcagcggtttcagtggcttcgatgatattttcagcaccttttttggcggcgggcgccggcgtgatccaaatgcgccaagagctggcgccgatttgcaatatacgatgacattgacgtttgaagaggcggtattcggcaaagaaacggatattgaaattccaagggaagaaacatgcaatacttgccatggcacaggagctaagccaggcacgaaaaaagaaacatgttcatattgccatggaacagggcaaatcagcacagagcaatcgacaccgtttggccgcatcgtcaatcgccgcacatgcccatattgcggcggaaccgggcaatacattaaggaaagatgcacaacatgcggcggcactggccgcgtaaaacggcggaaaaaaatccatgtgaaaattccggctggaatcgatgatggtcagcaattacgtgtcgctggccaaggagaaccgggcattaacggcgggcctccgggggatttatatatcgttttccacgtagagccgcatgaattttttgagcgcgatggcgacgacatttattgtgaaatcccgcttacatttgctcaagctgcgcttggcgacgaaattgaagtgccgacacttcatggaaaagtgagactgaaaataccggcaggcacgcaaacaggcacaaaattccgcttgaaaggaaagggagtgccgaatgtccgcggctacggctatggcgaccagcatgtgattgtccgtgttgtgacaccgacaaaactgacggaaaagcagaagcaattgttgcgcgaatttgatcaattaggcggttcaagcatgcatcaaggaccacacggccgcttttttgaaaaagtaaaaaaagcgtttaaaggggaatcatga(parageobacillus thermoglucosidasius ncimb 11955的dnaj)。

60、在本发明的一些实施方案中，seq id no:8的序列为：gtgataaagccattaggtgatcgcgttgtca ttgaaatcgttgaaacggaagaaaaaactgcaagcggtatcgtattgccagatactgcaaaagaaaaaccgcaagaaggcaaagttgttgc cgttggaaaaggacgcgtacttgacaacggtcaacgcgtagctccagaagtggaagttggcgatcgcattatcttctcgaaatatgcgggta cagaagtgaaatatgacggcaaagaatacttaattttgcgtgaaagcgatattttggctgtgattggttaa(geobacillusthermogl ucosidasius ncimb 11955的groes)。

61、在本发明的一些实施方案中，seq id no:9的序列为：atggcaaaagaaattaaattcagcgaaga agctcgtcgtgcgatgctgcgcggtgttgacaaactagctgatgcagtaaaagtaacgttaggtccaaaaggccgtaacgttgtattagagaaaaaattcggttctccattaattacaaacgacggtgttacgatcgcgaaagaaatcgaattagaagacccatttgaaaacatgggtgcgaagcttgttgctgaagttgcaagcaaaacaaacgatgttgctggggacggtacaacaacagcgacagttttagctcaagcgatgatccgtgaaggcttaaagaacgtaacagctggcgcaaacccaatgggaatccgcaaaggtattgaaaaagcggttgctgtagcggtagaagaattaaaagcaatctccaaaccaatccaaggaaaagaatcgatcgcgcaagttgcggctatttctgcggctgacgaagaagttggccaattaattgcagaagcaatggaacgcgtcggcaacgacggtgttatcacattagaagaatcaaaaggtttcacaacagaattagatgttgtggaaggtatgcaatttgaccgcggttatgcgtctccatacatgatcacagatacagaaaaaatggaagcagtgcttgaaaatccatatatcttaatcactgacaaaaaaatctcgaacattcaagacatcttgcctatcttagaacaagttgttcaacaaggcaaaccattgttaatcatcgcggaagacgtcgaaggcgaagcgcttgcaacattagttgttaacaaacttcgcggcacgttcactgcggtagcggttaaagcgcctggcttcggtgatcgccgtaaagcaatgttggaagacatcgcaatcttaactggcggtgaagtcatctccgaagaattaggacgcgaattaaaatcaacaacaattgcatcacttggccgcgcttcgaaagttgttgtaacgaaagaaaatacaacaatcgttgaaggcgctggcgattctgaacgcattaaagctcgcatcaaccaaatccgcgctcaattagaagaaactacttctgaattcgaccgcgaaaaattacaagaacgtttggcaaaacttgctggcggcgtagcggtcatcaaagttggtgcagcgacagaaacagaattgaaagaacgcaaattgcgcattgaagacgcgctcaactctactcgtgcggctgtcgaagaaggtatcgtagccggcggtggtacggcattaatgaacgtatataacaaagttgctgcgatcgaagcagaaggcgacgaagcaactggtgtgaaaatcgttcttcgcgcaatcgaagagccagttcgccaaatcgcgcaaaacgctggtttggaaggctctgtcattgttgaacgcttaaaatccgaaaaacctggcatcggcttcaacgctgctactggcgaatgggtaaacatgatcgaagctggtattgttgacccaacgaaagtaactcgctccgctctgcaaaacgcagcttctgttgccgctatgttcttaacaacagaagcagttgtcgctgacaaaccagaagaaaacaaaggcggcaatagcggaatgcctgacatgggcggaatgatgtaa(geobacillus thermoglucosidasius ncimb 11955的grol)。

62、本发明还提供了启动子在合成香兰素中的应用；

63、所述启动子包括：j23105、j23109和j23119中的一种或多种。

64、本发明还提供了表达模块，包括：第一表达模块和/或第二表达模块；

65、所述第一表达模块包括：上述应用中的所述内源分子伴侣蛋白；

66、所述第二表达模块包括：上述应用中的所述外源分子伴侣蛋白。

67、在本发明的一些实施方案中，上述表达模块中，所述第一表达模块包括：grpe、grol、dnak-dnaj、grpe-grol、grpe-dnak-dnaj、dnak-dnaj-grol或grpe-dnak-dnaj-grol。

68、在本发明的一些实施方案中，上述表达模块中，所述第二表达模块包括：grpe、dnak-dnaj、groes-grol、grpe-dnak-dnaj、grpe-groes-grol、dnak-dnaj-groes-grol或grpe-dn ak-dnaj-groes-grol。

69、在本发明的一些实施方案中，上述表达模块还包括上述应用中的所述启动子。

70、在本发明的一些实施方案中，上述表达模块中，所述第一表达模块包括：j23105-grpe-dnak-dnaj-grol、j23109-grpe-dnak-dnaj-grol或j23119-grpe-dnak-dnaj-grol。

71、在本发明的一些实施方案中，上述表达模块中，所述第一表达模块包括：j23105-grpe-dnak-dnaj-groes-grol、j23109-grpe-dnak-dnaj-groes-grol或j23119-grpe-dnak-dnaj-gro es-grol。

72、在本发明的一些实施方案中，上述表达模块中，所述第一表达模块于上述应用中的所述lacz位点表达；和/或

73、所述第二表达模块于上述应用中的所述ahr位点表达。

74、本发明还提供了表达质粒，包括：上述表达模块及可接受的基因元件。

75、本发明还提供了菌株，转化和/或转染上述表达质粒。

76、在本发明的一些实施方案中，上述菌株中，还转化和/或转入了质粒；所述质粒包括：pgrna-lacz和/或pgrna-ahr。

77、在本发明的一些实施方案中，所述pgrna-lacz的序列为：ttgagtgagctgataccgctcgccgca gccgaacgaccgagcgcagcgagtcagtgagcgaggaagcggaagagcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatatgctggatccttgacagctagctcagtcctaggtataatactagtgctaccattaccagttggtcgttttagagctagaaatagcaagttaaaataaggctagtccgttatcaacttgaaaaagtggcaccgagtcggtgctttttttgaattctctagagtcgacctgcagaagcttagatctattaccctgttatccctactcgagttcatgtgcagctccataagcaaaaggggatgataagtttatcaccaccgactatttgcaacagtgccgttgatcgtgctatgatcgactgatgtcatcagcggtggagtgcaatgtcatgagggaagcggtgatcgccgaagtatcgactcaactatcagaggtagttggcgtcatcgagcgccatctcgaaccgacgttgctggccgtacatttgtacggctccgcagtggatggcggcctgaagccacacagtgatattgatttgctggttacggtgaccgtaaggcttgatgaaacaacgcggcgagctttgatcaacgaccttttggaaacttcggcttcccctggagagagcgagattctccgcgctgtagaagtcaccattgttgtgcacgacgacatcattccgtggcgttatccagctaagcgcgaactgcaatttggagaatggcagcgcaatgacattcttgcaggtatcttcgagccagccacgatcgacattgatctggctatcttgctgacaaaagcaagagaacatagcgttgccttggtaggtccagcggcggaggaactctttgatccggttcctgaacaggatctatttgaggcgctaaatgaaaccttaacgctatggaactcgccgcccgactgggctggcgatgagcgaaatgtagtgcttacgttgtcccgcatttggtacagcgcagtaaccggcaaaatcgcgccgaaggatgtcgctgccgactgggcaatggagcgcctgccggcccagtatcagcccgtcatacttgaagctagacaggcttatcttggacaagaagaagatcgcttggcctcgcgcgcagatcagttggaagaatttgtccactacgtgaaaggcgagatcaccaaggtagtcggcaaataagatgccgctcgccagtcgattggctgagctcataagttcctattccgaagttccgcgaacgcgtaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgttctttcctgcgttatcccctgattctgtggataaccgtattaccgcct。(如seq idno:11所示)

78、在本发明的一些实施方案中，所述pgrna-ahr的序列为：ttgagtgagctgataccgctcgccgca gccgaacgaccgagcgcagcgagtcagtgagcgaggaagcggaagagcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatatgctggatccttgacagctagctcagtcctaggtataatactagttctccgcccgcttcttttgtgacgcagtaccgatgaccctgttttagagctagaaatagcaagttaaaataaggctagtccgttatcaacttgaaaaagtggcaccgagtcggtgctttttttgaattctctagagtcgacctgcagaagcttagatctattaccctgttatccctactcgagttcatgtgcagctccataagcaaaaggggatgataagtttatcaccaccgactatttgcaacagtgccgttgatcgtgctatgatcgactgatgtcatcagcggtggagtgcaatgtcatgagggaagcggtgatcgccgaagtatcgactcaactatcagaggtagttggcgtcatcgagcgccatctcgaaccgacgttgctggccgtacatttgtacggctccgcagtggatggcggcctgaagccacacagtgatattgatttgctggttacggtgaccgtaaggcttgatgaaacaacgcggcgagctttgatcaacgaccttttggaaacttcggcttcccctggagagagcgagattctccgcgctgtagaagtcaccattgttgtgcacgacgacatcattccgtggcgttatccagctaagcgcgaactgcaatttggagaatggcagcgcaatgacattcttgcaggtatcttcgagccagccacgatcgacattgatctggctatcttgctgacaaaagcaagagaacatagcgttgccttggtaggtccagcggcggaggaactctttgatccggttcctgaacaggatctatttgaggcgctaaatgaaaccttaacgctatggaactcgccgcccgactgggctggcgatgagcgaaatgtagtgcttacgttgtcccgcatttggtacagcgcagtaaccggcaaaatcgcgccgaaggatgtcgctgccgactgggcaatggagcgcctgccggcccagtatcagcccgtcatacttgaagctagacaggcttatcttggacaagaagaagatcgcttggcctcgcgcgcagatcagttggaagaatttgtccactacgtgaaaggcgagatcaccaaggtagtcggcaaataagatgccgctcgccagtcgattggctgagctcataagttcctattccgaagttccgcgaacgcgtaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgttctttcctgcgttatcccctgattctgtggataaccgtattaccgcct。(如seq id no:12所示)

79、本发明还提供了重组质粒，包括：编码阿魏酸脱竣酶的核酸分子、编码类胡萝卜素裂解加氧酶的核酸分子及骨架质粒。

80、在本发明的一些实施方案中，上述重组质粒中，所述阿魏酸脱竣酶来源于：短小芽孢杆菌(bacillus pumilus)。

81、在本发明的一些实施方案中，上述重组质粒中，所述类胡萝卜素裂解加氧酶来源于：黑弧菌(signeria sibiricus)。

82、在本发明的一些实施方案中，上述重组质粒中，所述骨架质粒包括：pet21a、pet20b、pet22b、pet28a、pacycduet、pcdfduet、petduet和prsfduet中的任意一种。

83、在本发明的一些实施方案中，上述重组质粒具有：

84、(28)、如seq id no:10所示的核苷酸序列；或

85、(29)、如(28)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(28)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

86、(30)、与(28)或(29)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列。

87、在本发明的一些实施方案中，seq id no:10的序列为：taatacgactcactataggggaattgtga gcggataacaattcccctctagaaataattttgtttaactttaagaaggagatataccatgggcagcagccatcatcatcatcatcacagcagcggcctggtgccgcgcggcagccatatgactgcacgtttcccaaacacccgtgaatttactggcgccctgtaccgtccgtcccgtttcgaaggtgaagttttcgatctggaggttgatggtcagctgccgacggacattgatggcaccttcttctctgttgctccggatgcagctttcccaccgatgcgtgaagacgacatcttttttaacggcgatggcgctgtctctgcctttcgtttcggcggtggtcacgttgattttcagcgccgttatgttcgtactcagcgcctggaagcgcagcgtgccgcccgtcgttctctgcacggcgtttaccgtaacccgagcaccaacgacccgagcgtgctgggcctgaataacagcaccgcaaacaccaacgttctggaacacgcaggtgtactgctggctatgaaagaagactccctgccgtacgcactggacccgctgaccctggaaaccaaaggcctgtggaacttcggtggtcagctgaccgacgcacctttcactgcgcatccgaagattgacccactgactggcgacatgatcgcattcggttatgaggctcgcggtgacggtagccgtgatatcgtctactacgagttcgacgagcatggtgcgaaaacccgcgagatctgggttcaggcccctgtgtctgctatggtgcacgatttcgcggtgaccgagcgttttgttgtattcccgatcatcccgctgtccgtagatgttgagcgtctgcgccagggtggtcgtcactttcagtggcagccggatctgccgcagtatttcggtgtcatgcgccgcgatggtgatggtggtgatctgcattggtttactgctccaaacggctttcaaggccacaccctgaacgcattcgacgacggtgaaaaagtttacgcggatatgacgtccactaacggcaacgtgttctatttcttcccgccggcagatggtttcgtgccatctccggaaaccctggtttcccagctggttcgttggacgtttgacctgtccgtgaagggtggtcgtctggatatgagcccgctgactccattcccggctgaatttccgcgtattgatgaccgtgttgcgctgcgtcctcatcgccacggctggatgatggcgatggacccgaccaaaccttatgcggaagaccgcgttggtccgcgcccgtttcagtttttcaaccagctggcccatctgaacatcgcgactggtaagatccagacctggtttgctgatgaagcgtcctgcttccaagaaccggtttttgtgccgcgtacgggttcctctcgcgagggtgatggctatctgctgtccctggtgaaccgtctggatgaacgtaccaccgacatggtcgttctggacgcactgcgtctgggcgaaggtccggtcgctaccgttaaactgccgctgcgtatgcgtatggcactgcacggtaattggagccgtgctgtgtccccatcctctatcaaagcagtcctagaaataattttgtttaactttaagaaggagatataccatgggcagcagccatcatcatcatcatcacagcagcggcctggtgccgcgcggcagccatatggatcagtttgttggtctgcacatgatctatacctatgaaaatggttgggaatatgaaatctatatcaagaatgaccacaccattgattatcgcattcatagcggtatggttggcggccgctgggttcgtgatcaggaagtgaatattgttaaactgaccaaaggc

88、gtgtataaagtgagctggaccgaaccgaccggtaccgatgtgagtctgaattttatg

89、ccggaagaaaaacgcatgcatggcgtgattttctttccgaaatgggttcatgaacgt

90、ccggatattaccgtgtgttatcagaatgattatatcgatctgatgaaggaaagccgc

91、gaaaaatatgaaacctatccgaaatatgtggttccggaatttgccgatattacctat

92、attcatcatgccggcgttaatgatgaaaccattattgcagaagcaccgtatgaaggt

93、ctgaccgatgaaattcgcgcaggccgtaaataaaagcttgcggccgcactcgagcaccaccaccaccac

94、cactgagatccggctgctaacaaagcccgaaaggaagctgagttggctgctgccaccgctgagcaataactagcataaccccttggggcc

95、tctaaacgggtcttgaggggttttttgctgaaaggaggaactatatccggattggcgaatgggacgcgccctgtagcggcgcattaagcgc

96、ggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccac

97、gttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatt

98、agggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttcc

99、aaactggaacaacactcaaccctatctcggtctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaa

100、caaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaatttcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttattttt

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103、attccgactcgtccaacatcaatacaacctattaatttcccctcgtcaaaaataaggttatcaagtgagaaatcaccatgagtgacgactgaatc

104、cggtgagaatggcaaaagtttatgcatttctttccagacttgttcaacaggccagccattacgctcgtcatcaaaatcactcgcatcaaccaaa

105、ccgttattcattcgtgattgcgcctgagcgagacgaaatacgcgatcgctgttaaaaggacaattacaaacaggaatcgaatgcaaccggcg

106、caggaacactgccagcgcatcaacaatattttcacctgaatcaggatattcttctaatacctggaatgctgttttcccggggatcgcagtggtg

107、agtaaccatgcatcatcaggagtacggataaaatgcttgatggtcggaagaggcataaattccgtcagccagtttagtctgaccatctcatctg

108、taacatcattggcaacgctacctttgccatgtttcagaaacaactctggcgcatcgggcttcccatacaatcgatagattgtcgcacctgattgc

109、ccgacattatcgcgagcccatttatacccatataaatcagcatccatgttggaatttaatcgcggcctagagcaagacgtttcccgttgaatatg

110、gctcataacaccccttgtattactgtttatgtaagcagacagttttattgttcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtca

111、gaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcgg

112、tggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtag

113、ccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgat

114、aagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagccc

115、agcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcgg

116、acaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtc

117、gggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggccttttta

118、cggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgttctttcctgcgttatcccctgattctgtggataaccgtattaccgcctttgagtgagctgat

119、accgctcgccgcagccgaacgaccgagcgcagcgagtcagtgagcgaggaagcggaagagcgcctgatgcggtattttctccttacgca

120、tctgtgcggtatttcacaccgcatatatggtgcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagtatacactccgctatcgctac

121、gtgactgggtcatggctgcgccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagac

122、aagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgaggcagctgcggtaaagctcatcagc

123、gtggtcgtgaagcgattcacagatgtctgcctgttcatccgcgtccagctcgttgagtttctccagaagcgttaatgtctggcttctgataaagc

124、gggccatgttaagggcggttttttcctgtttggtcactgatgcctccgtgtaagggggatttctgttcatgggggtaatgataccgatgaaacga

125、gagaggatgctcacgatacgggttactgatgatgaacatgcccggttactggaacgttgtgagggtaaacaactggcggtatggatgcggc

126、gggaccagagaaaaatcactcagggtcaatgccagcgcttcgttaatacagatgtaggtgttccacagggtagccagcagcatcctgcgat

127、gcagatccggaacataatggtgcagggcgctgacttccgcgtttccagactttacgaaacacggaaaccgaagaccattcatgttgttgctc

128、aggtcgcagacgttttgcagcagcagtcgcttcacgttcgctcgcgtatcggtgattcattctgctaaccagtaaggcaaccccgccagccta

129、gccgggtcctcaacgacaggagcacgatcatgcgcacccgtggggccgccatgccggcgataatggcctgcttctcgccgaaacgtttg

130、gtggcgggaccagtgacgaaggcttgagcgagggcgtgcaagattccgaataccgcaagcgacaggccgatcatcgtcgcgctccagc

131、gaaagcggtcctcgccgaaaatgacccagagcgctgccggcacctgtcctacgagttgcatgataaagaagacagtcataagtgcggcg

132、acgatagtcatgccccgcgcccaccggaaggagctgactgggttgaaggctctcaagggcatcggtcgagatcccggtgcctaatgagtg

133、agctaacttacattaattgcgttgcgctcactgcccgctttccagtcgggaaacctgtcgtgccagctgcattaatgaatcggccaacgcgcg

134、gggagaggcggtttgcgtattgggcgccagggtggtttttcttttcaccagtgagacgggcaacagctgattgcccttcaccgcctggccct

135、gagagagttgcagcaagcggtccacgctggtttgccccagcaggcgaaaatcctgtttgatggtggttaacggcgggatataacatgagct

136、gtcttcggtatcgtcgtatcccactaccgagatatccgcaccaacgcgcagcccggactcggtaatggcgcgcattgcgcccagcgccatc

137、tgatcgttggcaaccagcatcgcagtgggaacgatgccctcattcagcatttgcatggtttgttgaaaaccggacatggcactccagtcgcct

138、tcccgttccgctatcggctgaatttgattgcgagtgagatatttatgccagccagccagacgcagacgcgccgagacagaacttaatgggcc

139、cgctaacagcgcgatttgctggtgacccaatgcgaccagatgctccacgcccagtcgcgtaccgtcttcatgggagaaaataatactgttga

140、tgggtgtctggtcagagacatcaagaaataacgccggaacattagtgcaggcagcttccacagcaatggcatcctggtcatccagcggata

141、gttaatgatcagcccactgacgcgttgcgcgagaagattgtgcaccgccgctttacaggcttcgacgccgcttcgttctaccatcgacacca

142、ccacgctggcacccagttgatcggcgcgagatttaatcgccgcgacaatttgcgacggcgcgtgcagggccagactggaggtggcaacg

143、ccaatcagcaacgactgtttgcccgccagttgttgtgccacgcggttgggaatgtaattcagctccgccatcgccgcttccactttttcccgcg

144、ttttcgcagaaacgtggctggcctggttcaccacgcgggaaacggtctgataagagacaccggcatactctgcgacatcgtataacgttact

145、ggtttcacattcaccaccctgaattgactctcttccgggcgctatcatgccataccgcgaaaggttttgcgccattcgatggtgtccgggatctc

146、gacgctctcccttatgcgactcctgcattaggaagcagcccagtagtaggttgaggccgttgagcaccgccgccgcaaggaatggtgcatg

147、caaggagatggcgcccaacagtcccccggccacggggcctgccaccatacccacgccgaaacaagcgctcatgagcccgaagtggcg

148、agcccgatcttccccatcggtgatgtcggcgatataggcgccagcaaccgcacctgtggcgccggtgatgccggccacgatgcgtccggcgtagaggatcgagatctcgatcccgcgaaat。

149、本发明还提供了重组菌株，取上述重组质粒转入和/或导入上述菌株。

150、本发明还提供了上述表达模块、上述表达质粒、上述菌株、上述重组质粒和/或上述重组菌株在合成香兰素中的应用。

151、本发明还提供了合成香兰素的方法，取上述重组菌株培养，诱导后，去除上清，超声后与阿魏酸反应，获得所述香兰素。

152、本发明提供了整合位点作为靶点在合成香兰素中的应用；

153、所述整合位点包括：大肠杆菌的lacz位点和/或ahr位点。

154、本发明提供产香兰素的重组大肠杆菌，该重组大肠杆菌表达阿魏酸脱竣酶(fdc)和类胡萝卜素裂解加氧酶(cso2)的基因，该重组大肠杆菌用于以阿魏酸为底物生物合成香兰素。本发明的主要改进点在于，对底盘细胞(大肠杆菌)进行改造，提高可溶性蛋白(fdc和cso2)的表达量。