一种塔城翠雀花中二萜生物碱类化合物及制备方法和用途

本发明涉及医药，具体涉及一种塔城翠雀花中二萜生物碱类化合物及制备方法和用途

背景技术：

1、二萜生物碱是一类结构复杂且活性多样的天然化合物，主要存在于毛茛科乌头属和翠雀属植物中，具有抗心律不齐和镇痛等多种生物活性。塔城翠雀花(delphiniumaemulans navski.)是毛茛科翠雀属植物，分布于新疆西北部、俄罗斯和哈萨克斯坦等中亚地区，生长于海拔1400米的山坡。该植物在新疆地区资源相当丰富，民间用于止痛、祛风寒、治跌打损坏及痛疮等。

2、离子通道在神经系统、心血管系统和肌肉系统中发挥着至关重要的作用，是人体各项生命活动所必需的一类生物大分子，同时也是重要的药物靶点。目前国内外有关塔城翠雀花二萜类生物碱的提取分离和结构鉴定及其相关的药理学研究尚处于初始阶段。因此，对塔城翠雀花中二萜生物碱成分进行系统深入研究，明确其离子通道活性的物质基础，发现特异活性的二萜生物碱类新化合物以及高效低毒的药物先导化合物，具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于，提供一种塔城翠雀花中二萜生物碱类化合物及制备方法和用途。所述化合物以塔城翠雀花药材为原料，用溶剂提取，酸溶碱沉后，溶剂萃取，通过硅胶柱层析法、制备薄层层析或葡聚糖凝胶lh-20柱层析法的两种、三种或四种方式进行分离，得到2个新二萜类生物碱化合物1名称为塔城翠雀宁a；化合物2名称为塔城翠雀宁b。并对所得化合物进行了电压门控钾离子(kv)通道电流的抑制测定，实验结果表明，塔城翠雀宁a和b对电压门控钾离子通道电流(ikv)的抑制作用呈剂量依赖性趋势，且两个化合物抑制电压门控钾离子通道电流(ikv)的ic50值分别为81.80μm和8.90μm的活性。可用于制备抑制电压门控钾离子通道电流(ikv)的药物。

2、本发明所述的一种从塔城翠雀花中分离的二萜生物碱类化合物，该化合物的结构式为：

3、

4、其中：

5、化合物1名称为塔城翠雀宁a；

6、化合物2名称为塔城翠雀宁b。

7、所述塔城翠雀花中二萜生物碱类化合物的制备方法，按下列步骤进行：

8、a、将原料塔城翠雀花全草粉碎后，室温下用体积分数10-95％的乙醇水溶液、甲醇或氯仿，采用冷浸、渗漉法提取、加热回流或超声提取，减压浓缩回收溶剂，得到浸膏；

9、b、将步骤a得到的浸膏用质量分数1-5％硫酸或盐酸分散处理，得到的酸水层，用无水碳酸钠、氨水或氢氧化钠调ph＝9-12，再用有机溶剂氯仿、乙酸乙酯、乙醚或正丁醇萃取，减压浓缩回收有机溶剂，得到总生物碱；

10、c、将步骤b得到的总生物碱经硅胶柱层析法、薄层层析法、葡聚糖凝胶lh-20柱层析法或高效液相色谱法中的两种、三种或四种方式进行分离，得到化合物塔城翠雀宁a和化合物塔城翠雀宁b；

11、其中两种分离：

12、将得到的总生物碱浸膏用正相硅胶柱层析法进行分离，用体积比100:1，80:1，60:1，40:1，20:1，10:1，5:1，3:1，2:1，1:1的氯仿和甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，每500ml收集一个流份，流分经硅胶薄层层析分析，合并相同流分，得到5个组分a-e；

13、将得到的a组分继续用正相硅胶柱层析或反相硅胶柱层析法进行进一步分离，用体积比20:1,10:1,5:1,2:1,1:1和0:1的石油醚-丙酮+0.2％二乙胺或体积比5:95-100:0的甲醇和水为洗脱剂进行梯度洗脱，经硅胶薄层层析和高效液相色谱分析后合并相同流份，得到4个组分a-1到a-4；组分a-3经半制备高效液相色谱法纯化，经体积比20:80-47:53的乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱，得到化合物塔城翠雀宁a；

14、将得到的c组分继续用正相硅胶柱层析或反相硅胶柱层析法进行进一步分离，用体积比20:1,10:1,5:1,2:1,1:1和0:1的石油醚-丙酮+0.2％二乙胺或体积比5:95-100:0的甲醇和水为洗脱剂进行梯度洗脱，经硅胶薄层层析和高效液相色谱分析后合并相同流份，得到4个组分c-1到c-4；组分c-2经半制备高效液相色谱法纯化，体积比22:78-35:65的乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱，得到化合物塔城翠雀宁b；

15、三种分离：

16、将得到的总生物碱浸膏经过正相硅胶柱层析或反相硅胶柱层析进行分离，用体积比40:1,20:1,10:1,5:1和1:1的氯仿-甲醇为洗脱剂或体积比为5:95-80:20的甲醇-水为洗脱剂进行梯度洗脱，每500ml收集一个流份，经硅胶薄层层析分析，合并相同流份，得到5段组分a-e；

17、将得到的a组分用反相硅胶柱层析或正相硅胶柱层析进一步分离，用体积比5:95-80:20的甲醇-水或体积比为10:1,5:1,2:1,1:1和0:1的石油醚-丙酮+0.2％二乙胺为洗脱剂进行梯度洗脱，经硅胶薄层层析和高效液相色谱分析后合并相同流份，得到4个组分a-1到a-4；组分a-3经半制备高效液相色谱法纯化，再经体积比20:80-47:53的乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱，得到化合物塔城翠雀宁a；

18、将得到的c组用葡聚糖lh-20凝胶柱层析进一步分离，用体积比1:1或0:1的氯仿-甲醇等度洗脱，经硅胶薄层层析和高效液相色谱分析后合并相同流份，得到4个组分c-1到c-4；c-2经半制备高效液相色谱法纯化，用体积比28:72的乙腈-0.1％甲酸等度洗脱，得到化合物塔城翠雀宁b；

19、四种分离：

20、将得到的总生物碱浸膏用葡聚糖凝胶lh-20柱层析进行分离，经体积比为1:1或0:1的氯仿-甲醇为溶剂系统进行等度洗脱，流分经硅胶薄层层析分析，合并相同流分，得到5段组分a-e；

21、将组分a经过反相硅胶柱层析，用体积比5:95-80:20的甲醇-水溶液梯度洗脱，经tlc和hplc分析后合并相同流份，得4个组分a-1到a-4，组分a-3经半制备高效液相色谱纯化，体积比20:80-47:53的乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱，得到化合物塔城翠雀宁a；

22、将得到的c组分用正相硅胶柱层析，用体积比20:1,10:1,5:1,2:1,1:1和0:1的石油醚-丙酮+0.2％二乙胺为洗脱剂进行梯度洗脱，经硅胶薄层层析和高效液相色谱分析后合并相同流份，得到4个组分c-1到c-4；组分c-2经制备薄层层析法纯化，体积比82:16:2的氯仿-甲醇-水为展开剂展开，得到化合物塔城翠雀宁b。

23、所述从塔城翠雀花中分离的二萜生物碱类化合物在制备抑制电压门控钾离子通道电流活性药物中的用途。

24、本发明所述的一种塔城翠雀花中二萜生物碱类化合物及制备方法和用途，对所获得的化合物塔城翠雀宁a和化合物塔城翠雀宁b，采取薄层层析法或高效液相色谱分析法检测分析，展开系统为体积比20:1,10:1,8:1,5:1,3:1,1:1的氯仿和甲醇混合物，体积比82:16:2或84:14:2的氯仿、甲醇和水的混合物及体积比10:1,5:1或3:1的氨水饱和过的石油醚和丙酮的混合物，得到2个新的二萜生物碱类单体化合物。

25、本发明所述的一种塔城翠雀花中二萜生物碱类化合物及制备方法和用途，所获得的2个新二萜生物碱类化合物进行了对kv通道电流的抑制测定，实验结果表明：从塔城翠雀花中分离的二萜生物碱类化合物具有抑制电压门控钾离子通道电流(ikv)的活性，可用于制备抑制电压门控钾离子通道电流(ikv)的药物。

26、本发明所述的一种塔城翠雀花中二萜生物碱类化合物及制备方法和用途，所述化合物以塔城翠雀花药材为原料，用溶剂提取，酸溶碱沉后，溶剂萃取，通过硅胶柱层析法、制备薄层层析或葡聚糖凝胶lh-20柱层析法的两种、三种或四种方式进行分离，得到2个新二萜类生物碱化合物1名称为塔城翠雀宁a；化合物2名称为塔城翠雀宁b，其中：

27、化合物1名称为塔城翠雀宁a，为白色针状晶体，经hresi(+)ms(m/z 480.2567[m+h]+，理论值480.2592)确定其分子式为c25h37no8；根据1h、13c及二维核磁共振数据和x-单晶衍射确定其结构，化合物1是首次发现的新骨架类型c19-二萜生物碱，将其命名为塔城翠雀宁a(aemulanine a)，其1h和13c nmr数据归属见表1[600mhz(1h)，150mhz(13c)，溶剂：cd3od]；

28、化合物2为塔城翠雀宁b，为白色无定型粉末，经hresi(+)ms(m/z 466.2411[m+h]+,理论值466.2435)确定其分子式为c24h35no8；根据1h、13c及二维核磁共振数据确定其结构，将其命名为塔城翠雀宁b(aemulanine b)，其1h和13c nmr数据归属见表1[600mhz(1h)，150mhz(13c)，溶剂：cd3od]；

29、表1化合物1和2的1h(600mhz)和13c(150mhz)nmr数据[δ(ppm),j(hz)]

30、