一种获取果蝠connexin30蛋白编码cDNA序列、氨基酸序列的方法及其序列的应用与流程

本发明涉及connexin30蛋白的基因序列及其蛋白质序列，尤其是牙买加果蝠（artibeus jamaicesis）和大食果蝠（artibeus lituratus）的该蛋白基因核苷酸序列及其蛋白氨基酸序列。此外，本发明还涉及这些序列在治疗皮肤和听力相关疾病中的应用。通过对这些基因和蛋白序列的研究，我们揭示了它们在治疗皮肤和听力组织相关疾病中的应用潜力。

背景技术：

1、蝙蝠是一类具有回声定位能力且唯一能够真正飞行的哺乳类，得益于这两项特殊的能力，其在全球各地都有广泛分布，并且能够适应多样化的生态环境。在所有使用回声定位能力的动物中，蝙蝠被认为是该能力进化的顶峰，其飞行能力则得益于其特化的手指和皮肤。虽然蝙蝠的回声定位已广泛应用于多项领域技术的发明，例如雷达，然而，目前还没有对与回声定位有关的基因的应用。

2、connexin30蛋白即链接蛋白30，编码该蛋白的基因为gjb6，是属于间隙连接蛋白家族β亚类的成员β6。该蛋白是发现于1996年的一种跨膜蛋白，分子量30kda。其主要功能为在相邻细胞间充当通道的角色，使分子在细胞之间实现交换，信号在细胞之间得以传递。

3、connexin30蛋白基因gjb6在人体中对维持细胞正常的生理功能和信号转导极其重要，有研究证实该蛋白基因与人类的多种听力和皮肤疾病相关，比如角膜炎/鱼鳞病/耳聋综合征、多汗性-外胚层发育不良、非综合性-常染色体显性遗传听障及先天性的耳聋等等。

4、蝙蝠分类的大蝙蝠亚目中，仅有果蝠属成员具有回声定位能力，connexin30蛋白广泛的分布于蝙蝠的听力和皮肤组织中，因此，来自果蝠属成员的间隙链接蛋白30蛋白基因在皮肤和听力组织相关疾病的治疗中具有巨大的开发价值和应用潜力。但目前还没有针对该基因的较好的开发应用。

技术实现思路

1、本发明提供了一种获取果蝠属成员connexin30蛋白基因的编码核苷酸序列和氨基酸序列的方法，以及其在蝙蝠回声定位和皮膜中的重要功能，该蛋白基因编码序列可应用于治疗皮肤或听力组织相关疾病，为今后开发新的治疗产品提供策略和方向。

2、本发明给出了一种技术方案以实现上述目的：

3、本发明提供2种果蝠属成员connexin30蛋白基因编码cdna序列。该基因可编码氨基酸序列如序列表编号9和10之一所示，或者在序列表编号9和10之一所示的氨基酸序列的基础上，经由添加、删除或替换一个或多个氨基酸，形成的与原蛋白具有相同功能的蛋白。

4、本发明所述的这种connexin30蛋白基因编码cdna序列优选的具有如序列表编号7和8所示核苷酸序列之一，优选的可用于表达所述蛋白质，并进而用于治疗皮肤或听力相关的疾病。

5、本发明提供果蝠属成员connexin30蛋白基因编码的蛋白质序列。该蛋白质序列如序列表编号9和10之一所示氨基酸序列，或者在序列表编号9和10之一所示的氨基酸序列的基础上，经由添加、删除或替换一个或多个氨基酸，形成的与原蛋白具有相同功能的蛋白。

6、本发明所述的这种connexin30蛋白基因编码蛋白质序列优选的具有如序列表编号9和10所示氨基酸序列之一，优选的可用于治疗皮肤或听力相关的疾病。

7、本发明还提供了一种方法用以获得本发明所述的果蝠属成员connexin30蛋白基因编码cdna完整序列。该方法具有以下步骤：

8、1) 设计connexin30蛋白基因的简并引物，pcr扩增得到棕果蝠该gjb6基因的部分cdna编码序列；

9、2) 使用上述步骤1）中所得的部分cdna编码序列设计race引物，race扩增得到棕果蝠connexin30蛋白基因gjb6的5‘端和3‘端的完整核苷酸序列。

10、3）使用上述步骤2）中所得的5‘端和3‘端的核苷酸序列设计引物，pcr扩增得到牙买加果蝠和大食果蝠的connexin30蛋白基因gjb6的完整cdna编码序列。

11、通过以上步骤，本发明成功获取了2种果蝠属成员connexin30蛋白基因gjb6的完整cdna编码序列。

12、此外，本发明还通过分析得到2种果蝠属成员connexin30蛋白基因gjb6编码的蛋白质氨基酸序列及其在皮肤和听力组织中的重要作用。

13、本发明所述果蝠属成员connexin30蛋白基因gjb6及其编码的蛋白质在皮肤和听力组织相关疾病的治疗中具有巨大的应用潜力，包括但不限于：

14、一种果蝠属成员connexin30蛋白基因gjb6的核苷酸序列及其蛋白的氨基酸序列在听力和皮肤组织中的应用；

15、一种果蝠属成员connexin30蛋白基因gjb6的核苷酸序列及其蛋白的氨基酸序列在开发治疗皮肤或听力相关疾病的药物或疗法中的应用；

16、本发明的方法及应用与现有技术相比具有以下优点：

17、利用race方法的协助成功获得了2种果蝠属成员的connexin30蛋白基因gjb6的完整cdna编码序列，

18、通过分析获得的cdna编码序列得到其蛋白质氨基酸序列，及其在蝙蝠独特的听力及飞行能力中的重要功能信息，这为皮肤和听力组织相关疾病的治疗提供了新的策略和方向

19、果蝠属成员connexin30蛋白基因gjb6的核苷酸序列及其蛋白的氨基酸序列具备后续改造条件，可为进一步研究和开发相关治疗产品提供基础。

20、总而言之，本发明提供了一种获取connexin30蛋白基因完全编码信息的方法及其应用，所提供的新的cdna编码序列和氨基酸序列资源，可以为听力和皮肤组织相关疾病的治疗开辟新的途径，并为进一步研究和开发新的治疗产品提供有力的支持。

技术特征：

1.权利要求1： 所述是一种间隙链接蛋白成员蛋白，其特征在于，其氨基酸序列与序列表编号9和10所示的氨基酸序列中的任一序列相对应。或者，通过在序列表编号9和10所示的氨基酸序列中的任一序列的基础上，添加、删除或替换一个或多个氨基酸所形成的与原蛋白具有相同功能的蛋白。

2.权利要求2： 根据权利要求1所述的蛋白，其特征在于，该蛋白是牙买加果蝠和大食果蝠的connexin30蛋白基因的产物之一。

3.权利要求3： 一种编码如权利要求1或权利要求2所述的蛋白的cdna编码序列，其特征在于，该cdna编码序列与序列表编号7和8所示的核苷酸序列中的任一序列相对应。或者，通过在序列表编号7和8所示的核苷酸序列中的任一序列的基础上，添加、删除或替换一个或多个核苷酸所形成的与原cdna序列具有相同编码功能的cdna序列。

4.权利要求4： 根据权利要求3所述的cdna编码序列，其特征在于，该cdna编码序列是牙买加果蝠和大食果蝠的connexin30蛋白基因的完整cdna编码序列之一。

5.权利要求5： 使用权利要求2或权利要求4所述的蛋白或编码序列在皮肤和听力组织中的应用。

6.权利要求6： 使用权利要求2或权利要求4所述的蛋白或编码序列开发治疗皮肤或听力相关疾病的药物或疗法。

技术总结
本专利揭示了果蝠connexin30蛋白基因GJB6的完整cDNA编码序列以及相应的氨基酸序列。同时，还提供了一种创新的方法，通过简并引物的设计，从棕果蝠组织样本中得到该基因部分序列，然后设计RACE引物得到该基因5’端和3‘端完整序列，继而在其5’端和3‘端设计引物得到其他2种果蝠（牙买加果蝠、大食果蝠）的编码该connexin30蛋白的基因完整cDNA序列，并经由分析分别获得其对应的氨基酸完整序列。进一步的研究表明，该发明的蛋白基因在蝙蝠特殊的皮肤和听力组织中起着重要作用，说明该发明成果具有巨大的商业化潜力，可为治疗皮肤及听力相关疾病开发出具有重要价值的产品。

技术研发人员：雷鸣,何灵江,茹炳华
受保护的技术使用者：嘉兴元圣生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/29