肿瘤靶向CLDN18.2治疗耐药标志物及其应用

本发明属于医学诊断，具体地说，涉及肿瘤靶向cldn18.2治疗耐药标志物及其应用。

背景技术：

1、晚期恶性肿瘤失去手术机会，药物治疗为关键手段，但治疗靶点缺乏是长期以来困扰着抗肿瘤精准治疗药物研发的问题。cldn18.2是消化道肿瘤近年来最临床转化潜力的精准靶点。claudin家族跨膜蛋白通过形成紧密连接而充当胞间保护屏障，并调节细胞层之间的渗透和极性，其中cldn18基因能够通过可变剪接产生cldn18.1和cldn18.2两类亚型产物，前者主要表达于正常肺组织，而后者在肿瘤组织和正常组织中都有表达。正常组织中的cldn18.2蛋白通常被掩盖于粘膜下，抗原表位隐藏,而在肿瘤发生后对紧密连接的破坏使得肿瘤细胞外翻，表达的cldn18.2发生暴露，能够被靶向性药物所识别，使其成为理想的治疗靶点。患者队列分析发现cldn18.2除了在胃癌组织中具有较普遍的高表达外（阳性表达率约30-50%），在胰腺癌、胆系肿瘤、食管癌、结直肠癌等消化道肿瘤组织中也具有较高的阳性表达率。目前在国内外有大量关于靶向cldn18.2的临床试验正在开展，涉及单抗、双抗、adc、细胞治疗等多种药物形式、覆盖一线到三线治疗。imab362（zolbetuximab）是首个针对cldn18.2开发的靶向性单克隆抗体药物，采用该药物的fast研究奠定了cldn18.2疗效和安全性的基调，而soptlight和glow临床研究结果提示靶向cldn18.2联合化疗能够实现胃癌患者pfs和os双获益。此外，更多类型cldn18.2靶向药物的临床研究也正在进行中（如靶向cldn18.2的car-t细胞治疗药物ct041取得了迄今为止实体瘤中细胞治疗最高的有效率），势必将推动cldn18.2成为肿瘤新的获批靶点。尽管靶向cldn18.2在肿瘤治疗中的应用具有广阔的前景，但目前尚无针对靶向cldn18.2疗法开发的疗效和耐药标志物。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供肿瘤靶向cldn18.2治疗耐药标志物及其应用。

2、为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种肿瘤靶向cldn18.2治疗耐药标志物，所述标志物为细胞外囊泡（ev）表达的cldn18.2、pd1、pd-l2分子中的至少一种。

3、进一步地，所述标志物为细胞外囊泡表达的cldn18.2、pd1、pd-l2分子中的至少两种。

4、更进一步地，所述标志物为细胞外囊泡表达的cldn18.2、pd1和pd-l2分子。

5、细胞外囊泡携带的cldn18.2、pd1、pd-l2分子（任一种分子或几种分子）高表达对应肿瘤靶向cldn18.2治疗有效率低、无进展生存期pfs短、总生存期os短。

6、第二方面，本发明提供一种肿瘤靶向cldn18.2治疗耐药标志物，所述标志物是基于细胞外囊泡携带的cldn18.2、pd1和pd-l2三种分子中的任意一种、两种或全部的表达水平而建立的评分模型。

7、以一种代表性模型（cpp-score，评分包括-1/0/1/2）为例，cpp-score评分高对应肿瘤靶向cldn18.2治疗有效率低、无进展生存期pfs短、总生存期os短。

8、第三方面，本发明提供用于检测细胞外囊泡表达的cldn18.2、pd1、pd-l2分子的生物制品在制备肿瘤靶向cldn18.2治疗的疗效、敏感性和/或预后评价试剂中的应用。

9、其中，所述疗效包括治疗有效率、无进展生存期pfs、总生存期os。

10、本发明所述细胞外囊泡为细胞释放的各种具有膜结构的微小囊泡结构统称（其中40-100nm粒径的成分称为外泌体，本发明的细胞外囊泡范围包括但不限于外泌体）。

11、本发明所述细胞外囊泡可以来自肿瘤患者体液及衍生物，包括全血、血浆、血清、腹水、胸水、尿液、粪便等。细胞外囊泡检测的定义包括直接对样本进行检测，或经过细胞外囊泡纯化分离后再进行检测。

12、本发明所述生物制品是能够从rna（转录）或蛋白（翻译）水平上检测上述三种分子的物质，包括但不限于抗体、蛋白表达芯片、rna表达芯片，以及借助于rna测序、单细胞测序、质谱蛋白测序、qpcr、western blot、elisa等手段来实现rna和蛋白检测所使用的试剂和/或芯片。

13、进一步地，细胞外囊泡携带的cldn18.2、pd1、pd-l2表达水平可利用蛋白表达芯片（如ev expression array）、蛋白质谱、elisa、western blot等手段检测上述三种分子的蛋白表达水平，或经rna表达芯片、转录组rna-sequencing、qpcr等手段检测上述三种分子的rna表达水平。

14、进一步地，对细胞外囊泡携带的cldn18.2、pd1、pd-l2进行蛋白表达检测时使用的抗体包括以该三种分子为检测目标的任何类型及品牌的抗体。

15、本发明用于肿瘤靶向cldn18.2治疗的药物包括但不限于靶向cldn18.2的细胞治疗药物和/或靶向cldn18.2的抗体类药物。例如，以car-t为代表的靶向cldn18.2的细胞治疗药物，以单抗、双抗、抗体偶联药物（adc）为代表的具有cldn18.2靶向性的抗体类药物，以及涉及上述治疗药物的各种联合用药方案。

16、本发明所述肿瘤为适用于接受靶向cldn18.2治疗的肿瘤，包括但不限于胃癌、胰腺癌、胆系肿瘤、食管癌、结直肠癌等），及其下细分的各个组织、病理、基因分子亚型。

17、借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

18、本发明揭示了细胞外囊泡（ev）携带的cldn18.2、pd1、pd-l2表达及其衍生组合评分或模型作为肿瘤靶向cldn18.2治疗方案疗效和耐药标志物的用途，能够划分有效人群、预测治疗效果、监测耐药发生，且对细胞治疗类药物和抗体类药物都具有明确的标志物潜力，有望推动靶向cldn18.2治疗方案的伴随诊断手段的开发，为今后cldn18.2靶向治疗药物的临床实践积累宝贵经验。

技术特征：

1.肿瘤靶向cldn18.2治疗耐药标志物，其特征在于，所述标志物为细胞外囊泡表达的cldn18.2、pd1、pd-l2分子中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述标志物为细胞外囊泡表达的cldn18.2、pd1、pd-l2分子中的至少两种。

3.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述标志物为细胞外囊泡表达的cldn18.2、pd1和pd-l2分子。

4.肿瘤靶向cldn18.2治疗耐药标志物，其特征在于，所述标志物是基于细胞外囊泡携带的cldn18.2、pd1和pd-l2三种分子中的任意一种、两种或全部的表达水平而建立的评分模型。

5.用于检测细胞外囊泡表达的cldn18.2、pd1、pd-l2分子的生物制品在制备肿瘤靶向cldn18.2治疗的疗效、敏感性和/或预后评价试剂中的应用；

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述细胞外囊泡为细胞释放的所有具有膜结构的微小囊泡，包括外泌体。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述细胞外囊泡来自肿瘤患者体液及衍生物，包括全血、血浆、血清、腹水、胸水、尿液、粪便。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述生物制品是能够从rna或蛋白水平上检测上述三种分子的物质，包括抗体、蛋白表达芯片、rna表达芯片，以及借助于rna测序、单细胞测序、质谱蛋白测序、qpcr、western blot、elisa来实现rna和蛋白检测所使用的试剂和/或芯片。

9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，用于肿瘤靶向cldn18.2治疗的药物包括靶向cldn18.2的细胞治疗药物和/或靶向cldn18.2的抗体类药物。

10.根据权利要求5-9任一项所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为适用于接受靶向cldn18.2治疗的肿瘤，包括胃癌、胰腺癌、胆系肿瘤、食管癌、结直肠癌。

技术总结
本发明属于医学诊断技术领域，公开了肿瘤靶向CLDN18.2治疗耐药标志物及其应用。本发明揭示了细胞外囊泡（EV）携带的CLDN18.2、PD1、PD‑L2表达及其衍生组合评分或模型作为肿瘤靶向CLDN18.2治疗方案疗效和耐药标志物的用途，能够划分有效人群、预测治疗效果、监测耐药发生，且对细胞治疗类药物和抗体类药物都具有明确的标志物潜力，有望推动靶向CLDN18.2治疗方案的伴随诊断手段的开发，为今后CLDN18.2靶向治疗药物的临床实践积累宝贵经验。

技术研发人员：沈琳,章程,马明洋,齐长松,李健,龚继芳
受保护的技术使用者：北京肿瘤医院（北京大学肿瘤医院）
技术研发日：
技术公布日：2024/3/17