专利名称:一种三角帆蚌肉酶解蛋白液的制备方法
技术领域：
本发明属于三角帆蛘肉的综合利用领域，特别涉及一种三角帆蛘肉酶解蛋白液的制备方法。
背景技术：
研究表明，利用蛋白酶可对具有复杂立体结构的低值动、植物蛋白质进行有效切割以得到富含新构象和生物学功能的小分子肽段及游离氨基酸的酶解蛋白液。酶解蛋白液不仅营养丰富，还具有极强的清除自由基的功能；酶解蛋白液作为动物氮源具有改善动物生长性能和提高动物品质的功能。目前酶解蛋白液被广泛应用在保健品、医药及饲料中，具有较高的经济价值，因此开发新蛋白来源的酶解蛋白液也成为近年来食品开发利用的研究 热点之一。
三角帆蛘(HgriopsisCumingii)属瓣觸纲(Lamellibranchia)蛘目(Unionoida)蛘科(Unionidae)帆蛘属，是我国特有的、也是江浙一带淡水育珠的主要品种，采珠后的蛘肉数量相当丰富，仅浙江诸暨就年产蛘肉约700余吨。三角帆蛘肉含有丰富的蛋白质和糖类物质，分别占干物质的54. 07%和35. 85%，且蛘肉蛋白中必需氨基酸及鲜味氨基酸含量高，具有较高的营养价值和很大的开发利用潜力。但因蛘肉肉质粗韧，且具有淡水贝类所特有的土腥味，故往往成了废弃物被直接丢弃或简单烘干用作饲料，一直未得到充分利用。因此，随着珍珠养殖业的发展，取珠后蛘肉的开发利用是亟待解决的问题。
目前对蛘肉的深加工的工作逐年增多，从酶解的蛘肉产物中已成功分离出降血压肽和血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽，可惜产率不高。目前虽有6个公开专利报道了蛘肉蛋白及多肽类产品的提取方法，均属于食品加工或医药技术领域：
，实施中均需要手工切除三角帆蛘内脏，需要较多的人工投入。除此之外，专利公开号为CN 101066086A采用的“碱提酸沉”法提取三角帆蛘蛋白，该专利与中国专利CN 1517099A公开的蛘肉提取物的制备方法的共同缺陷是存在酸或碱废液的排放，对环境有一定污染。中国专利CN 101248866A虽然可从河蛘中同时提取蛘肉提取物、蛋白粉和多肽粉，但需要使用较多的设备，如大容量的离心机，负压过滤装置、冷冻冻干机，且需要数次的离心、负压过滤、透析、冻干等，工艺较为繁琐。中国专利CN 102524797A公开的利用蛘肉制备珠蛘肽钙产品，需要对酶解后的水解液反复冻干、复溶并进行超声改性和氯化钙螯合处理，过程也较为繁琐，且肽得率较低。专利公开号为CN 101503727A的“三角帆蛘酶解多肽的制备和应用”中得到的多肽分子量大(分子质量集中于6100Da和26200Da2个区域)，其添加蛋白酶的方法是按蛘粉中蛋白含量的质量百分比添加的，未考虑加入的碱性蛋白酶的有效酶活力。中国专利CN 101248830A报道的“无腥水解蛘肉蛋白功能制品的制备方法”中接种嗜热链球菌或保加利亚乳酸杆菌对蛘肉蛋白进行发酵水解，虽无酸碱盐排放，但需使用发酵罐等设备，且需考虑接种发酵的纯菌种保存，发酵中杂菌的污染等问题。
发明内容
[0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种三角帆蛘肉酶解蛋白液的制备方法，该方法所需时间短，不需酸碱，对设备要求不高，实用性强，为充分利用三角帆蛘肉资源开辟了一条新的途径。
本发明的一种三角帆蛘肉酶解蛋白液的制备方法，包括
(I)三角帆蛘肉匀浆液的制备
将新鲜的三角帆蛘肉用清水冲洗干净，初步切碎后捣碎均匀，得到三角帆蛘肉匀浆液；
( 2 )三角帆蛘肉的酶解
将上述三角帆蛘肉匀浆液加水稀释，然后调节pH值为6-8，升温到40_45°C，然后加入酶制剂恒温酶解5h，得到酶解蛋白液；再经煮沸灭酶活处理，冷却至室温，离心或过滤 后收集上清液，最后减压浓缩，即制得三角帆蛘肉酶解蛋白液。
步骤(I)中所述的三角帆蛘肉为取珠后的三角帆蛘肉。
步骤(2)中所述的加水稀释中三角帆蛘肉匀浆液与水的体积比为1:2 1:3。
步骤(2)中所述的调节pH值为采用盐酸或氢氧化钠调节。
步骤(2)中所述的酶制剂为碱性蛋白酶Alcalase 2. 4L。
步骤(2)中所述酶制剂的用量为每克三角帆蛘肉匀浆液中加入800-1500U。
步骤(2)中所述离心的离心速度为5000-10000rpm,离心时间为5_20min。
本发明的三角帆蛘肉酶解蛋白液的制备方法不用大量酸碱，所需时间短，生产的三角帆蛘肉酶解蛋白液富含寡肽，克服现有的提取蛘肉蛋白及多肽制品的缺陷。本发明具体将大规模采珠后的副产品-蛘肉通过酶解处理来制备具有丰富小分子肽段的酶解蛋白制品。此工艺不仅具有很强的实用性，使充分开发采珠后蛘肉资源规模化生产能得以稳定进行，还可解决蛘肉简单丢弃造成资源浪费及污染环境的现状，为充分利用三角帆蛘肉资源、提高产品附加值开辟了一条新的途径，也为酶解研究提供有价值的理论数据。
与已有技术相比，本发明的主要特点在于
本发明仅采用一种蛋白酶即可获得较高水解度的三角帆蛘肉酶解蛋白液，尤其是该酶解蛋白液中寡肽百分比含量高；利用本发明提供的方法能通过酶解条件的微调实现精确控制酶解蛋白液的水解度，所制备的三角帆蛘肉酶解蛋白液产品质量优良，成本低，且无三废排出；本发明工艺合理，操作简单，生产操作安全。
有益效果
(I)本发明的方法简单，可操作性强，采用的仪器设备少，仅用生物酶进行酶解提取，未使用任何有机溶剂和化学物质，对环境无污染，生产成本低，有利于推广应用，适用于普通饲料加工业中广泛利用，对饲料新蛋白源开发有积极的意义；
(2)本发明是利用取珠后的三角帆蛘肉为原料，使大量的废弃物得到合理利用，充分利用了三角帆蛘肉资源，避免了浪费，也对环境保护做出来积极的贡献；
(3)本发明的方法与现有同类方法相比，蛘肉中氮回收高，有效寡肽含量丰富，产品用途广，酶解蛋白液或直接添加到饲料配方中，或采用喷雾干燥等技术制成耐储存的粉剂形式添加到饲料配方中，也可用常规方法进一步纯化出特定分子量大小的纯小肽制品，通过添加不同的辅料，制成多种食品添加剂或保健药品的重要原料。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求
书所限定的范围。
实施例I
( I)三角帆蛘匀浆液的制备将新鲜的三角帆蛘肉用清水冲洗干净，初步切碎，放入高速组织捣碎机，以3000rpm匀浆l_3min，制得匀浆液。经测定该三角帆蛘肉匀浆液的水分含量为86. 78%，粗蛋白含量为47. 25% (干基)。
( 2 )三角帆蛘肉的酶解
按照1:2. 5 (三角帆蛘肉匀浆液水)的比例加水到1000克的三角帆蛘肉匀浆液中，搅拌均匀，通过添加0. lmol/LHCl调节pH值到6. 6，并升温到43°C，然后按照1000U/克(三角帆蛘肉匀浆液)的比例加入碱性蛋白酶Alcalase 2. 4L (酶活力为11万单位/克)，43°C恒温酶解5h后，将酶解蛋白液煮沸15min，进行灭酶活处理；然后等酶解蛋白液冷却至室温，9000rpm离心15min，收集上清液，再经减压浓缩，即制得三角帆蛘肉酶解蛋白液。
通过本发明提供的以三角帆蛘肉为原料的酶解蛋白液的制备方法，所获得的三角帆蛘肉酶解蛋白液中，水解度为25. 81%，总氮回收率为65. 22%，酶解蛋白液中游离氨基酸含量低于2%，且小于5个氨基酸组成的功能寡肽含量高达22. 11%，具体多肽组成见表I :
表I三角帆蛘肉酶解蛋白液中不同分子量多肽组成分布
肽段大小百分比(％)
100个AA以上的肽段L87
30-100 个 AA 的肽段56.89
I5-3O个氨基酸的小分子肽5.66
5-15个氨基酸的小分子肽11.76
2-5个氨基酸组成的功能寡肽22.11
游离氨基酸1.71
本工艺的特点是依据碱性蛋白酶酶解蛋白质大分子的特点，通过控制蛋白水解度的方式，制定了富含寡肽的三角帆蛘肉酶解蛋白液的加工技术，符合现代营养学中寡肽吸收的特点，使三角帆蛘肉酶解蛋白液中总氮回收率达65. 22%，且2-5个氨基酸组成的功能寡肽从现有报道的14. 96%提高到22. 11%，而游离氨基酸含量则不足2%。所得酶解蛋白液既能直接应用于养殖生产及饲料企业，也可通过进一步纯化得到特定分子量大小的纯小肽制品。
权利要求
1.一种三角帆蛘肉酶解蛋白液的制备方法，包括 (1)将新鲜的三角帆蛘肉用清水冲洗干净，组织捣碎机捣碎，得到三角帆蛘肉匀浆液； (2)将上述三角帆蛘肉匀浆液加水稀释，调节pH值为6-8，加入酶制剂后，于40-45°C恒温酶解5h，得到酶解蛋白液；再将酶解蛋白液煮沸灭酶活处理，冷却至室温，离心或过滤收集上清液，最后减压浓缩，即制得三角帆蛘肉酶解蛋白液。
2.根据权利要求
I所述的一种三角帆蛘肉酶解蛋白液的制备方法，其特征在于步骤(O中所述的三角帆蛘肉为取珠后的三角帆蛘肉。
3.根据权利要求
I所述的一种三角帆蛘肉酶解蛋白液的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述的加水稀释中三角帆蛘肉匀浆液与水的体积比为1:2 1:3。
4.根据权利要求
I所述的一种三角帆蛘肉酶解蛋白液的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述的调节pH值为采用盐酸或氢氧化钠调节。
5.根据权利要求
I所述的一种三角帆蛘肉酶解蛋白液的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述的酶制剂为碱性蛋白酶Alcalase 2. 4L。
6.根据权利要求
I所述的一种三角帆蛘肉酶解蛋白液的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述酶制剂的用量为每克三角帆蛘肉匀浆液中加入800-1500U。
7.根据权利要求
I所述的一种三角帆蛘肉酶解蛋白液的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述离心的离心速度为5000-10000rpm,离心时间为5_20min。
专利摘要
本发明涉及一种三角帆蚌肉酶解蛋白液的制备方法，包括(1)将新鲜的三角帆蚌肉用清水冲洗干净，初步切碎后捣碎均匀，得到三角帆蚌肉匀浆液；(2)将上述三角帆蚌肉匀浆液加水稀释，然后调节pH值为6-8，加入酶制剂，40-45℃恒温酶解，得到酶解蛋白液；再经煮沸灭酶活处理，冷却至室温后，离心或过滤收集上清液，最后减压浓缩，即制得三角帆蚌肉酶解蛋白液。本发明的方法简单，可操作性强，采用的仪器设备少，仅用生物酶进行酶解提取，未使用任何有机溶剂和化学物质，对环境无污染，生产成本低；本发明得到酶解蛋白液中氮回收高，有效寡肽含量丰富，产品用途广。
文档编号C12P21/06GKCN102952841SQ201210448680
公开日2013年3月6日 申请日期2012年11月9日
发明者黄艳青, 陆建学, 龚洋洋, 高露姣, 房文红 申请人:中国水产科学研究院东海水产研究所导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan