用于处理纺织品的增大纤维素酶组合物的制作方法

专利名称：用于处理纺织品的增大纤维素酶组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及在洗涤剂和处理纺织品方面具有卓越性能的新型纤维素酶组合物，本发明还涉及这种组合物的生产和利用这种组合物处理和/或洗涤纺织品的方法，本发明具体涉及用经修饰以使可增加其大小和/或改变其结构特性的组分粘附于其上的纤维素酶处理或洗涤纺织品。
现有技术纤维素酶是能水解纤维素中的β-D-糖苷键的酶，按惯例，纤维素分解酶被分为三大类内切葡聚糖酶，外切葡聚糖酶或纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶(Knowles，J等.(1987)，TIBTECH 5，255-261)；已知大量细菌、酵母和真菌可产生纤维素酶。
纤维素分解酶已开发的主要应用涉及将(木质)纤维素浆状物降解为糖以生产(生物)乙醇，如‘石洗’和‘生物抛光’之类的纺织品处理和用于洗涤剂组合物中。因此，已知纤维素酶可用于处理机械纸浆(例见PCT公开号WO92/16687)。另外，已知纤维素酶可用作饲料添加剂(例见PCT公开号WO91/04673)和用于谷物湿磨工艺中。
然而，纤维素酶主要的用途是处理纺织品，即在洗涤剂组合物中帮助除去污物或灰色脱落物(例见英国申请2,075,028，2,095,275和2,094,826，这些申请阐明当洗涤剂中加入纤维素酶时可改善清洗效果)，或者在售出纺织品前对其进行处理以改善纺织品的手感和外观。因此，英国申请1,358,599阐明了洗涤剂中的纤维素酶可降低含棉织物之粗糙程度的用途，并且，在处理纺织品时使用纤维素酶，可通过使其颜色更加鲜亮而重新调理旧织物(例见ShizuokaPrefectural Hammamatsu纺织品工业研究所报告，第24卷，p54-61(1986))。例如，重复洗涤含棉织物会导致织物的颜色灰暗，据信这是由于机械作用导致的受损和杂乱小纤维所致，这种小纤维有时也被称为“小球(pill)”。有色织物上的这种发灰颜色特别显眼，因此，纤维素酶除去杂乱的纤维上层从而改善织物整体外观的能力是有价值的。
因此，纤维素酶已显示出在很多工业方法中都有效，本领域趋向于寻求在一个或多个特别应用方面具有特别有效的性能分布的特殊纤维素酶组合物或组分。从此观点出发，人们广泛筛选和仔细考查了真菌和细菌产生(表达)的纤维素酶。例如，如木霉属之种(尤其是Trichoderma longibrachiatum)的某些真菌产生的纤维素酶已受到广泛关注，因为通过发酵法易于大量产生能降解晶体形式纤维素的完整纤维素酶系统。已深入分析了这一特殊的纤维素酶复合物，以测定其特殊组分的特性和所述组分在工业方法中行使的功能。例如，Wood等，“酶学方法”，160，25，p234以及下列等等(1988)中公开了完整的真菌纤维素酶系统含有几种不同类型的酶，包括那些被鉴定为外切纤维二糖水解酶(EC3.2.1.91)(“CBH”)、内切葡聚糖酶(EC3.2.1.4)(“EG”)和β-葡糖苷酶(EC3.2.1.21)(“BG”)的酶。CBH、EG和BG类真菌纤维素酶的范围可进一步扩展，在各个类别中包括多个组分。美国专利5,475,101(Ward等)公开了Trichoderma longibrachiatum中EGIII的纯化和分子克隆。PCT公开号94/28117公开了得自Trichoderma reesei的20-25 kD纤维素酶(称为EGV)的分离方法和其序列。
然而，尽管得自木霉属或包括腐质霉属、芽孢杆菌属、嗜热单孢菌属和镰孢属之种的其它细菌和真菌之种的很多组分可用于工业方法中，但它们在其它方面显示出次优特性。例如，某些纤维素酶组分在改善触感或手感、提供石洗外观或从织物上除去小球或小纤维方面具有优良的纺织品处理特性，但却具有会导致强度损失过大的缺点。
研究人员一直在寻找具有卓越特性的其它纤维素酶组合物或组分，美国专利5,246,853中公开了用不含某些外切纤维二糖水解酶组分的纤维素酶组合物处理含棉织物的方法。
PCT公开号WO95/24471中公开了纤维素酶的应用，所述纤维素酶选自由家族7纤维素酶和这些纤维素酶含有核心及任选含有至多由10个氨基酸组成的C-末端连接物的变体组成之组，尤其是在第55位具有色氨酸、酪氨酸或苯丙氨酸和/或具有深度至少为12埃的底物结合裂隙的纤维素酶。根据申请人的观察，这些纤维素酶在洗涤剂所用的碱性pH范围中表现出增强的活性。
PCT公开号WO95/02675中公开了含有两种纤维素酶的洗涤剂组合物。第一种纤维素酶保留了类型活性，优选在pH8.5时对纤维三糖具有催化活性，相当于Kcat至少为0.01/sec，并能除去颗粒状的尘土。第二种纤维素酶具有多个区域，所述区域包括至少一个与催化区附着的非催化区，优选每1mg纤维素酶蛋白对Red Avicel7.5的催化活性大于10-4IU，并能澄清颜色。
PCT公开号WO95/26398中公开了经化学改性的纤维素酶，由于通过例如将胺与谷氨酸或天冬氨酸残基的羧基基团偶联使pI改变成比亲本或天然纤维素酶的pI高至少一个pH单位，因此改性纤维素酶的性能得到改善。
已揭示多重酶聚集体可通过增加其大小来降低组分酶的变应原性。例如，PCT公开号WO94/10191中公开了比单体亲本蛋白质的变应原性低的寡聚体蛋白质，并建议了几种增加亲本酶大小的一般技术。另外，酶聚集体在分离的环境中显示出改善的特性。例如，Naka等，化学通讯，第8卷，p1303-1306(1991)中公开了通过经由2-丁基-2-噁唑啉和2-甲基-2-噁唑啉之间的2阶段嵌段共聚合形成嵌段共聚物而制备的辣根过氧化物酶聚集体。在水饱和的氯仿中，聚集体比天然酶的活性高200倍以上。
已证明通过加入戊二醛制备交联酶是稳定酶的一种方式，然而，与天然酶相比，交联经常导致活性损失。例如，Khare等，生物技术与生物工程，第35卷，第1期，p94-98(1990)公开了用戊二醛产生的大肠杆菌β-半乳糖苷酶聚集体。尽管酶聚集体于55℃下显示出热稳定性有所改善，但其活性仅为天然酶的70.8％，虽然如此，仍可以认为交联后较好地保留了活性。
为了克服这些难题，研究人员开发了含有融合蛋白的酶聚集体。人们一直认为，这种融合蛋白(如果能适当表达)在包括纺织品处理的大多数工业应用中都不太可取。另外，分解纤维素的二聚体的应用也不是特别有效。
尽管本领域中有关一些或所有上述领域中有所应用的很多纤维素酶组合物的知识，仍需要具有改善特性的新型纤维素酶组合物，可作为洗涤剂组合物的组分用于例如处理纺织品，处理纸浆和纸，用于食品加工和生物质的转化。因此，尽管对纤维素酶组合物及其活性的理解有显著改善，但仍需要保留了已知纤维素酶组合物的有利效果、而在某些不利活性方面(如处理织物时使强度受损)显著改善的其它纤维素酶组合物。
发明简述本发明的目的是提供新型纤维素酶组合物，该组合物用于工业工艺时具有改善的特性，所述工业工艺如纺织品处理，纺织品洗涤，饲料添加剂技术，烘烤和食品加工，谷物湿磨和生物质转化。
本发明的另一目的是提供新型纤维素酶，所述纤维素酶用于纺织品处理时具有使强度损失降低的特性。
根据本发明，提供了处理含纤维素之织物的方法，所述方法包括下述步骤(a)形成含有纤维素酶组合物的水溶液，所述组合物中所含的纤维素酶与前体纤维素酶的不同之处在于它已被加大；(b)在适于处理含纤维素之织物的条件下，将水溶液与含纤维素的织物接触一段时间。
在本发明一个优选实施方案中，该纤维素酶得自真菌或细菌，最优选得自丝状真菌或芽孢杆菌的种。也优选增大纤维素酶含有通过表达连接在一起的两个或多个纤维素酶基因而形成的融合酶，表达产物是分解纤维素的多聚体。或者，增大纤维素酶含有通过在纤维素酶表面加入聚合的或纤维性的取代基以改变其表面特性从而被改变了的纤维素酶。
本发明的一个优点是当处理方式相同时，用含有前体纤维素酶而不是增大纤维素酶的纤维素酶组合物处理与用本发明的增大纤维素酶处理相比，后者使含纤维素的织物强度损失程度降低。
图的简述

图1A-1B阐明得自Trichoderma longibrachiatum之EGIII的DNA序列和相应的氨基酸序列。
图2图解说明用于产生EGIII二聚体的基因融合构建体。
图3阐明了根据本发明产生的EGIII二聚体的假拟三级结构，此结构显示出得自CBHI的接头。
图4阐明了含有通过CBHI接头与第二个EGIII基因氨基末端融合的EGIII基因羧基末端的DNA区段的序列。
图5阐明了用本发明的纤维素酶和天然EGIII处理过的含棉织物的强度损失比较。
图6A-6B阐明了质粒构建示意图，图解说明了在Trichodermareesei中表达EGIII二聚体的载体的产生。
图7阐明了Trichoderma reesei含有EGIII基因的遗传DNA之一部分的示意图。
图8阐明了pTEX载体的示意图。
图9阐明了用于产生EGIII二聚体的PCR策略图。
发明详述“含有纤维素的织物”指的是由含纤维素或含包括天然纤维素和人造纤维素(如黄麻、亚麻、苎麻、人造纤维和lyocell)的纤维素混纺纱的棉制或非棉制的任何经缝制或未缝制的织物、纱线或纤维制品。含人造纤维素的织物的定义包括本领域熟知的再生织物，如人造纤维。其它含人造纤维素的织物包括经化学改性的纤维素纤维(如通过醋酸衍生的纤维素)和溶纺纤维素纤维(如lyocell)。含纤维素之织物的定义中具体包括由这种材料制成的任何纱线或纤维制品。含纤维素的材料经常与如合成纤维和天然非纤维素纤维(如羊毛和丝)之类的材料混合使用。
“含棉织物”指的是由纯棉或棉混纺纱制成的经缝制或未缝制的织物、纱线或纤维，包括棉机织物、棉针织物、粗斜纹棉布、棉纱、原棉等等。当使用棉混纺纱时，优选织物中棉含量至少约为棉织物重量的35％，当用作混纺品时，织物中所用的同类材料可包括一种或多种非棉纤维，包括纤维素纤维或合成纤维，如聚酰胺纤维(如尼龙6和尼龙66)，丙烯酸类纤维(如聚丙烯腈纤维)，聚酯纤维(如聚对苯二甲酸乙二醇酯)，聚乙烯醇纤维(如Vinylon)，聚氯乙烯纤维，聚偏二氯乙烯纤维，聚氨酯纤维，聚脲纤维和芳族聚酰胺纤维。
“石洗组合物”指的是用于对含纤维素之织物进行石洗的制剂。含纤维素的织物可在出售前(即在制备过程中)用石洗组合物进行改性处理。与之形成对照的是，洗涤剂组合物的目的是用于清洗弄脏的衣物。
“石洗”指的是在搅拌和级联条件下，即在滚筒洗衣机中，用纤维素酶溶液处理含纤维素的织物，以使粗斜纹布获得“石洗”的外观。本发明的纤维素酶溶液可在功能上完全地或部分地取代本领域公认方法中石头的使用。美国专利4,832,864中描述了使粗斜纹布获得石洗外观的方法，该文献的全文已通过参考文献掺入本文。通常将石洗技术应用于经靛蓝染色的粗斜纹棉布。
“洗涤剂组合物”指的是用于洗涤弄脏的含纤维素织物的洗涤介质中可用的混合物。在本发明的上下文中，这种组合物中除可包括纤维素酶和表面活性剂外，还可包括其它的水解酶、助洗剂、漂白剂、漂白激活剂、上蓝剂和荧光染料，粘结抑制剂、掩蔽剂、纤维素酶激活剂、抗氧剂和增溶剂。与石洗组合物形成对照的是，这种组合物一般用于清洗弄脏的衣物，而并不在制备工艺中使用。含有纤维素酶的洗涤剂组合物被描述于例如列入本文参考文献的Clarkson等，美国专利5,290,474和EP公开号271004中。
“衍生物”指的是通过在前体蛋白质(如天然蛋白质)的C-和N-末端两个末端或任一端添加一个或多个氨基酸，在氨基酸序列内一个或多个不同位点取代一个或多个氨基酸，在蛋白质两端或任一端或在氨基酸序列内一个或多个位点处缺失一个或多个氨基酸，或在氨基酸序列内一个或多个位点处插入一个或多个氨基酸而由前体蛋白质衍生的蛋白质。优选通过修饰编码天然蛋白质的DNA序列，将该DNA序列转化至适当的宿主中，表达经修饰的DNA序列以形成衍生酶，来制备酶衍生物。本发明的衍生物包括含有与前体酶氨基酸序列(如野生型或天然状态的酶)不同的氨基酸序列的肽，所述肽保留了前体酶特征性的酶特性，但在某些特别方面的性质却有所改变。例如，纤维素酶衍生物可具有更高的pH最适范围或更高的温度或氧化稳定性，但仍保留了其特征性的纤维素分解活性。类似地，本发明的衍生物包括以显著削弱或增强其纤维素结合能力的方式添加、除去或改变其部分的纤维素结合区域。预计本发明的衍生物可衍生自编码纤维素酶衍生物的DNA片段，其中所表达的纤维素酶衍生物的功能活性得到保留。例如，编码增大纤维素酶的DNA片段可进一步包括编码绞链或接头的DNA序列或其部分，所述绞链或接头连接在纤维素酶DNA序列的5’或3’末端，其中编码的纤维素酶区域的功能活性得到保留。衍生化进一步包括化学改性以改变酶的特性。
“增大纤维素酶”指的是经处理增加了质量(分子量)、表面积或空间体积的纤维素酶。例如，通过使用重组技术加工编码亲本纤维素酶的DNA，以在5’或3’末端或在内部位置掺入额外的DNA，即可产生增大纤维素酶。表达的纤维素酶中掺入了额外的氨基酸，从而使纤维素酶的质量(分子量)增加。额外的DNA可编码不同的纤维素分解实体，即形成含有两个或多个纤维素分解催化位点的融合蛋白，或者可编码额外的分离的非催化性结构区或增大纤维素酶内的原有结构。当融合蛋白含有两个或多个不同的纤维素酶亚基时，应可以掺入两种不同的纤维素酶，例如一种或多种特定内切葡聚糖酶或者内切葡聚糖酶和纤维二糖水解酶，以利用融合蛋白内所掺入的各种酶的不同特性。例如，已证明得自一些芽孢杆菌菌种的内切葡聚糖酶在抗起球、清洗和抗颜色发灰方面特别有用，而一些真菌内切葡聚糖酶对颜色的恢复和磨损特别有用。因此，通过将真菌内切葡聚糖酶实体与芽孢杆菌内切葡聚糖酶实体结合，即可以利用各个酶的性质，并同时导入其它所需的性质，如使经增大纤维素酶处理的纺织品的强度损失降低。
或者，增大纤维素酶可含有交联的纤维素酶多聚体，如两个或多个纤维素酶通过例如戊二醛化学连接在一起，以形成二聚体或多聚体。诸纤维素酶可以是相同的或不同的酶。不论是交联的纤维素酶多聚体还是融合酶，都需要确定特定亚单位的方位以使活性位点保持催化功能并仍能与底物接近。例如，如果改性的(增大)纤维素酶内的活性位点被隐藏起来而无法与底物接触，可以预料活性会受损失。当底物含有长的不溶性聚合物糖类时，可能优选所确定的酶的方位能便于各个活性位点与底物接近。通过使用晶体结构或能够预测连接位点的其它预测性三级结构模型，使活性位点方位最优化，这样可便于这种活性位点定向。
或者，通过将基于肽或非肽的、可增加分子量(质量)、表面积或大小的组分连接于其上，可形成增大纤维素酶。例如，PEG化作用(pegylation)即是一种替代方法，其中高分子量的聚乙二醇组分如INada等，TIBTECH，第13卷(1995)，p86-91和其中所提及文献(其内容通过参考文献掺入本文)所述附着于纤维素酶上。类似地，可通过很多已知的修饰氨基酸的化学技术将其它纤维状或聚合物组分附着于蛋白质表面。例如，多糖、多肽、聚酯、合成聚合物、脂质、脂肪酸、壳多糖，脱乙酰壳多糖和表面活性剂可附着于蛋白质表面，以达到酶底物相互作用改变的效果。仅仅由于是否有使特定基团与特定蛋白质组分附着的适当化学方法而使这种技术受到限制。另外，通过修饰酶的DNA序列并在适当条件下培养，即有可能掺入合成的氨基酸，其中合成的氨基酸具有便于聚合物或纤维状组分的官能团连接到其上的特性。使组分附着于蛋白质表面的一个目的是改变纤维素酶和底物之间的表面相互作用，因此，添加离子取代基(即阳离子或阴离子)会改变这种相互作用。类似地，不带电但呈极性的组分会赋予纤维素酶不一样的特性。
本发明中对纺织品的处理包括用含有纤维素酶的组合物加工或清洗纺织品。这种处理包括但不限于石洗、改变含纤维素之织物的质地、手感和/或外观，或者含纤维素之织物的制备或清洗/修复过程中所用的其它技术。另外，本发明上下文中的处理包括从纤维素织物或纤维中除去“不成熟”或“坏死”棉。不成熟棉比成熟棉显然更加无定形，存在时，会由于例如染色不均匀而导致产生品质较差的织物。本发明中所涉及的组合物另外还包括增大纤维素酶组分以用于洗涤弄脏的含纤维素织物产品。例如，洗涤剂组合物中可含有增大纤维素酶以用于洗衣。按照本发明的可用洗涤剂组合物包括特殊的制剂，如预洗涤、预浸泡和家庭用颜色恢复组合物。本文所述的这种处理组合物可以是需要稀释的浓缩物形式，也可以是稀释溶液的形式，或可直接用于含纤维素之织物的形式。用纤维素酶处理纺织品的一般处理技术描述于例如EP公开号220016和GB申请号1,368,599和2,095,275中。
本发明中对纤维素材料的处理另外还包括为本领域已知的目的处理动物饲料、纸浆和/或纸、食品和谷物。例如，已知纤维素酶可增加动物饲料的利用价值、改善纸浆原材的排放力，在谷物湿磨或干磨工艺中强化谷物中的可食产物并减少纤维。
本发明的处理包括制备含有有效量的纤维素酶和其它任选组分的水溶液，所述任选组分包括例如缓冲液、表面活性剂和/或擦洗剂。纤维素酶组合物的有效量是足以达到预定目的的纤维素酶浓度，因此，例如，本发明石洗组合物中的纤维素酶“有效量”是可提供所需效果(如使缝线和织物片呈现陈旧和褪色外观)的量。类似地，用于改善含纤维素之织物的触感和/或外观的组合物中纤维素酶的“有效量”是可在触感或外观上产生可测改善的量，前者如改善织物的光滑程度，后者如除去可降低织物表面清晰度的小球和小纤维。所用纤维素酶的量也取决于所用设备，所用的方法参数(纤维素酶处理溶液的温度，暴露于纤维素酶溶液的时间等等)和纤维素酶活性(例如，与活性较低的纤维素酶组合物相比，使用活性更高的纤维素酶组合物时，具体溶液所需的纤维素酶浓度要更低一些)。根据上述因素以及所需结果，本领域技术人员易于确定在其中加入待处理织物的含水处理溶液中纤维素酶的确切浓度。在石洗工艺中，一般优选含水处理溶液中纤维素酶存在的浓度为总蛋白质约0.5-5,000ppm，最优选为总蛋白质约10-200ppm。在用于改善含纤维素织物的触感和/或外观的组合物中，一般优选含水处理溶液中纤维素酶存在的浓度为总蛋白质约0.1-2000ppm，最优选约0.5-200ppm。
在优选的处理实施方案中，在处理组合物中使用了缓冲液，使得缓冲液的浓度足以将溶液的pH维持在一定范围内，在该范围内所用纤维素酶表现出活性，而该活性反过来又取决于所用纤维素酶的特性。所用缓冲液的确切浓度取决于本领域技术人员易于考虑到的几个因素。例如，在一个优选实施方案中，选择缓冲液以及缓冲液浓度以将最终的纤维素酶溶液的pH维持在最适纤维素酶活性所需的pH范围内。根据众所周知的技术可确定本发明增大纤维素酶的最适pH范围。本领域技术人员熟知pH位于增大纤维素酶活性范围内的适当缓冲液。
除了纤维素酶和缓冲液外，处理组合物可任选含有表面活性剂。适当的表面活性剂包括与纤维素酶和织物相容的任何表面活性剂，包括例如阴离子型、非离子型和两性表面活性剂。本文所用的适当的阴离子表面活性剂包括直链或支链的烷基苯磺酸盐；具有直链或支链烷基或链烯基的烷基或链烯基醚硫酸盐；烷基或链烯基硫酸盐；烯属磺酸盐；烷基磺酸盐等等。用于阴离子表面活性剂的合适的抗衡离子包括碱金属离子如钠或钾；碱土金属离子如钙和镁；铵离子；和具有碳原子数为2或3的1至3个链烷醇基的链烷醇胺。两性表面活性剂包括季铵盐磺酸盐，和甜菜碱型两性表面活性剂。这类两性表面活性剂在同一分子内既有带正电荷的基团，也有带负电荷的基团。非离子型表面活性剂通常包括聚亚氧烷基醚，以及高级脂肪酸链烷醇酰胺或其烯化氧加合物，和脂肪酸甘油一酯。也可以以本领域技术人员已知的方式应用表面活性剂的混合物。
可制备浓缩的增大纤维素酶组合物以用于本文所述的方法。这种浓缩物含有浓缩量的上述纤维素酶组合物、缓冲液和表面活性剂，优选是在水溶液中。当如此配制时，增大纤维素酶浓缩物可易于用水稀释，以快速和准确地制备各个组分都具有必需浓度的增大纤维素酶制品。当配制含水浓缩物时，可稀释这些浓缩物，以使纤维素酶溶液中的组分达到如上文所述的必需浓度。很显然，这种增大纤维素酶浓缩物便于配制成纤维素酶溶液，并易于将组合物运输到使用地。处理浓缩物可以是本领域已知的任何形式，例如液体、乳剂、凝胶或糊剂，所述形式是本领域技术人员熟知的。
当使用固体的增大纤维素酶浓缩物时，纤维素酶组合物可以是颗粒、粉末、凝结物或固体盘状物。可配制成颗粒，使其含有能降低颗粒溶解于洗涤介质之速率的物质，这种物质和颗粒公开于美国专利5,254,283中，该文献已全文掺入本文作为参考。
根据组合物最终的用途，也可按需要将其它材料与本发明的增大纤维素酶组合物一起使用或放置于其中，这些材料包括石头、浮石、填充物、溶剂、酶激活剂和抗再污染剂。
作为举例，下面将要详细描述石洗法，然而，对于其它应用，即改善织物的触感和/或外观，本领域技术人员易于改变所述参数。通过将处理组合物与石洗组合物混合，由此使纤维素酶与织物接近，可以使含纤维素的织物与含增大纤维素酶的石洗组合物接触，所述石洗组合物中含有有效量的纤维素酶。随后，振荡含有增大纤维素酶和织物的水溶液。如果处理组合物是水溶液，则织物可直接浸泡于该溶液中。类似地，当石洗组合物为浓缩物时，则将浓缩物稀释至具有含纤维素之织物的水浴中。当石洗组合物为固体形式，例如预洗涤凝胶或固体条状物时，可通过直接将组合物应用于织物或洗涤液中而接触石洗组合物。
在能有效地使酶解作用赋予含纤维素之织物石洗外观的条件下，将含纤维素的织物与石洗溶液一起保温。例如，在石洗过程中，需调节pH、液体比例、温度和反应时间以使石洗组合物工作的条件最优化。“有效条件”必需指使纤维素酶与含纤维素的织物有效反应(此时为产生石洗效果)的pH、液体比例和温度。通常，应在使用亲本纤维素酶的可操作条件下使用本发明的增大纤维素酶。然而，本领域技术人员易于确定这种条件。对本发明石洗组合物有效的反应条件基本上类似于相应的已知纤维素酶组合物所用的熟知方法。因此，将使用本发明石洗组合物的条件最优化是本领域技术人员易于做到的。
本文所用的石洗过程中液体的比例，即石洗组合物溶液(即洗涤液)的重量与织物重量的比例，一般是足以使粗斜纹布织物获得所需石洗效果的量，此量取决于所用的方法。优选液体比例约为4∶1至50∶1；更优选约为5∶1至20∶1；最优选约为10∶1至15∶1。
用本发明的石洗组合物进行石洗的反应温度由两个竞争因素控制。首先，较高的温度一般对应于较强的反应动力学，即较快的反应，使得反应时间比在较低温度下所需的要少。因此，反应温度一般至少约为10℃和更高。其次，纤维素酶是一种蛋白质，它在超过给定反应温度的温度下会丧失活性，这种温度取决于所用纤维素酶的特性。因此，如果反应温度太高，那么由于纤维素酶变性的结果会丧失分解纤维素的活性。尽管本领域使用纤维素酶的标准温度范围一般为35℃至65℃，预期该条件也适用于本发明的纤维素酶，但对于所用的特殊的增大纤维素酶，应根据众所周知的技术确定最适的温度条件。
反应时间取决于进行石洗的具体条件，例如，pH、温度和纤维素酶的浓度都会影响最适反应时间。一般而言，反应时间约为5分钟至5小时，优选约为10分钟至3小时，更优选约为20分钟至1小时。
根据本发明另一个优选的实施方案，本发明的增大纤维素酶可用于洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂组合物可用作预洗涤组合物，预浸泡组合物，或用于常规洗涤或漂清循环过程中的清洗。优选本发明的洗涤剂组合物含有有效量的纤维素酶、表面活性剂，并任选包括下文所述的其它成分。
本发明的洗涤剂组合物中所用纤维素酶的有效量是指足以使含纤维素织物获得所需效果的量，已知所述效果是由纤维素酶产生的，这种效果例如是去小球、软化、抗起球、除去表面纤维、抗颜色灰化和清洗。优选洗涤剂组合物中纤维素酶的使用浓度约为洗涤剂的10ppm至20,000ppm。
优选地，选定用于洗涤剂组合物中的纤维素酶浓度能使得在通过稀释至洗涤介质中时，纤维素酶的浓度范围为总蛋白质约0.01至1000ppm，优选约0.02ppm至500ppm，最优选约0.5ppm至250ppm。洗涤剂组合物中所用纤维素酶的量取决于通过加入水形成洗涤溶液而将洗涤剂稀释的程度。
本发明的洗涤剂组合物可以是本领域已知的任何形式，例如是液体、颗粒、乳剂、凝胶或糊剂，这类形式是本领域技术人员熟知的。当使用固体的洗涤剂组合物时，优选将纤维素酶组合物配制成颗粒。优选配制成的颗粒另外含有纤维素酶保护剂。可将颗粒制成其中含有降低颗粒溶解至洗涤介质中之速率的物质。这类物质和颗粒公开于美国专利5,254,283中，该文献已全文掺入本文作为参考。
本发明的洗涤剂组合物中使用了表面活性剂，即众所周知的可用于洗涤剂组合物中的阴离子型、非离子型和两性表面活性剂。
可用于本发明洗涤剂组合物中的适当的阴离子表面活性剂包括直链或支链的烷基苯磺酸盐；具有直链或支链烷基或链烯基的烷基或链烯基醚硫酸盐；烷基或链烯基硫酸盐；烯属磺酸盐；烷基磺酸盐等等。用于阴离子表面活性剂的合适的抗衡离子包括碱金属离子如钠或钾；碱土金属离子如钙和镁；铵离子；和具有碳原子数为2或3的1-3个链烷醇基的链烷醇胺。两性离子表面活性剂包括季铵盐磺酸盐，和甜菜碱型两性表面活性剂。这类两性表面活性剂在同一分子内既有带正电荷的基团，也有带负电荷的基团。非离子型表面活性剂通常包括聚亚氧烷基醚，以及高级脂肪酸链烷醇酰胺或其烯化氧加合物，和脂肪酸甘油一酯等。可用于本发明的适当的表面活性剂公开于英国专利申请2094826A中，该文献的内容通过参考文献掺入本文。也可使用这类表面活性剂的混合物。本发明的洗涤剂组合物中所用的表面活性剂或表面活性剂混合物的量一般约为洗涤剂组合物总重量的1％至95％，优选约为洗涤剂组合物总重量的5％至45％。除了纤维素酶组合物和表面活性剂外，本发明的洗涤剂组合物中还任选含有一种或多种下列组分除纤维素酶以外的水解酶适当的水解酶包括对酯键作用的羧酸酯水解酶、硫酯水解酶、磷酸一酯水解酶、磷酸二酯水解酶；对糖基化合物作用的糖苷水解酶；水解N-糖基化合物的酶；对醚键作用的硫醚水解酶；对肽键作用的a-氨基-酰基-肽水解酶、肽基-氨基酸水解酶、酰基-氨基酸水解酶、二肽水解酶和肽基-肽水解酶。其中优选羧酸酯水解酶、糖苷水解酶和肽基-肽水解酶。适当的水解酶包括(1)属于肽基-肽水解酶的蛋白酶，如胃蛋白酶、胃蛋白酶B、凝乳酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶A、胰凝乳蛋白酶B、弹性蛋白酶、肠激酶、组织蛋白酶C、木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、无花果蛋白酶、凝血酶、纤维蛋白溶酶、肾素、枯草杆菌蛋白酶、曲霉肽酶A、胶原酶、梭菌肽酶B、激肽释放酶、胃亚蛋白酶(gastrisin)、组织蛋白酶D、菠萝蛋白酶、角蛋白酶、胰凝乳蛋白酶C、胃蛋白酶C、曲霉肽酶B、尿激酶、羧肽酶A和B以及氨肽酶；(2)糖苷水解酶(从该组中排除了重要成分纤维素酶)α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡糖淀粉酶、转化酶、溶菌酶、果胶酶、壳多糖酶和葡聚糖酶。其中优选α-淀粉酶和β-淀粉酶。它们在酸性至中性系统中都有功能，但得自细菌的一种酶在碱性系统中表现出高活性；(3)羧酸酯水解酶，包括羧基酯酶、脂肪酶、果胶酯酶和叶绿素酶，其中特别有效的是脂肪酶。
根据目的，按需要的量将除纤维素酶外的水解酶加入洗涤剂组合物中。就纯化的蛋白质而言，优选加入量为0.001至5％(重量)，更优选加入量为0.02至3％(重量)。在洗涤剂组合物中，应以仅由粗制酶制成或由粗制酶与其它组分联合制成的颗粒形式使用该酶。粗制酶颗粒所使用的量为纯化酶占颗粒重量的0.001至50％，所用颗粒的量为0.002至20％(重量)，优选为0.1至10％(重量)。至于纤维素酶，可配制这些颗粒以使其含有酶保护剂和溶解阻滞物质。阳离子表面活性剂和长链脂肪酸盐这种阳离子表面活性剂和长链脂肪酸盐包括饱和或不饱和脂肪酸盐，烷基或链烯基醚羧酸盐，a-磺基脂肪酸盐或酯，氨基酸型表面活性剂，磷酸酯表面活性剂，季铵盐，包括具有3至4个烷基取代基和不超过1个苯基取代的烷基取代基的那些。适当的阳离子表面活性剂和长链脂肪酸盐公开于英国专利申请2094826中，该文献的内容通过参考文献掺入本文。组合物中可含有约1至20％(重量)的这种阳离子表面活性剂和长链脂肪酸盐。助洗剂A.二价螯合剂组合物可含有约占重量0至50％的一种或多种助洗剂组分，所述助洗剂组分选自下列化合物的碱性金属盐和链烷醇胺盐磷酸盐、膦酸盐、膦酰基羧酸盐、氨基酸盐、氨基多乙酸盐高分子电解质、非解离的聚合物、二羧酸盐和硅铝酸盐。适当的二价螯合剂公开于英国专利申请2094826A中，该文献的内容通过参考文献掺入本文。B.碱性或无机电解质组合物中可含有约占重量1-50％、优选约占重量5-30％的下列化合物之一种或多种碱性金属盐的组合物作为碱性或无机电解质硅酸盐，碳酸盐和硫酸盐以及有机碱，如三乙醇胺、二乙醇胺、一乙醇胺和三异丙醇胺。抗再污染剂组合物可含有约占重量0.1-5％的一种或多种下列化合物作为抗再污染剂聚乙二醇，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮和羧甲基纤维素。
其中，羧甲基纤维素和/或聚乙二醇与本发明纤维素酶组合物的联合可提供除垢效果奇强的组合物。漂白剂本发明纤维素酶与漂白剂联合使用可进一步改善除垢效果，所述漂白剂如单过硫酸钾，过碳酸钠，过硼酸钠，硫酸钠/过氧化氢加合物和氯化钠/过氧化氢加合物或/和光敏感型漂白染料，如磺化酞菁的锌盐或铝盐。类似地，可使用EP684 304中所述的漂白剂和漂白催化剂。上蓝剂和荧光染料必要时可在组合物中加入多种上蓝剂和荧光染料。适当的上蓝剂和荧光染料公开于英国专利申请2094826A中，该文献的内容通过参考文献掺入本文。结块抑制剂可在粉末状的洗涤剂中加入下列结块抑制剂对甲苯亚磺酸盐，二甲苯磺酸盐，醋酸盐，磺基琥珀酸盐，滑石，精细粉碎的硅石，非定形硅石，粘土，硅酸钙(如Johns Manville公司的Micro-Cell)，碳酸钙和氧化镁。抑制纤维素酶活性之因子的掩蔽剂在铜，锌，铬，汞，铅，锰或银离子或其化合物存在的某些情况下，本发明的纤维素酶组合物会失活。多种金属螯合剂和金属沉淀剂能有效抑制这种酶抑制剂。它们包括例如上文有关任选添加剂一栏中所列的二价金属离子螯合剂以及硅酸镁和硫酸镁。
纤维素二糖、葡萄糖和葡糖酸内酯有时也起抑制剂的作用。只要可能，应尽量避免这些糖类与纤维素酶共存。当共存不可避免时，必需通过例如包被的方式以避免糖类与纤维素酶直接接触。
长链脂肪酸盐和阳离子表面活性剂有时也起抑制剂的作用，然而，如果通过某些方式(如制成片剂或包被)可防止这些物质与纤维素酶直接接触，那么它们的共存也是允许的。
必要时，本发明中可使用上述掩蔽剂和掩蔽方法。纤维素酶激活剂激活剂随纤维素酶的变化而变化。存在蛋白质、钴及其盐、镁及其盐、钙及其盐、钾及其盐、钠及其盐或如甘露糖和木糖之类的单糖时，纤维素酶被激活，其去污力显著改善。抗氧剂抗氧剂包括例如叔丁基羟基甲苯，4，4’-亚丁基双(6-叔丁基-3-甲基苯酚)，2，2’-亚丁基双(6-叔丁基-4-甲基苯酚)，单苯乙烯化甲酚，二苯乙烯化甲酚，单苯乙烯化苯酚，二苯乙烯化苯酚和1，1-双(4-羟基苯基)环己烷。增溶剂增溶剂包括例如，低级醇(如乙醇)，苯磺酸盐，低级烷基苯磺酸盐(如对甲苯磺酸盐)，二醇(如丙二醇)，乙酰基苯磺酸盐，乙酰胺，吡啶二羧酸酰胺，苯甲酸盐和尿素。
可在从酸性到碱性pH的宽pH范围内使用本发明的洗涤剂组合物，在一个优选实施方案中，可在pH大于5但不超过约12的弱酸性、中性或碱性洗涤剂洗涤介质中使用本发明的洗涤剂组合物。
除了上述成分以外，如果需要的话，也可以将香料、缓冲液、防腐剂、染料等等与本发明的洗涤剂组合物一起使用。通常这些组分的使用量为在此之前本技术领域的用量。
若本发明中所用的洗涤剂主剂为粉末状时，则这种洗涤剂可以是通过包括喷雾干燥法和颗粒形成法在内的任何已知制备方法制备的洗涤剂。优选的是通过喷雾干燥法、凝聚法、干燥混合法或非塔途径法得到的洗涤剂主剂。通过喷雾干燥法得到的洗涤剂主剂在制备条件方面不受限制。通过喷雾干燥法得到的洗涤剂主剂为中空的颗粒，该颗粒是通过将耐热成分，如表面活性剂和助洗剂的含水浆状物喷雾至一个热空间而得到的。喷雾干燥后，可以加入香料、酶、漂白剂、无机碱性助洗剂。通过例如喷雾干燥-颗粒形成或凝聚法制备得到高密度、颗粒状洗涤剂主剂后，还可加入多种成分。
当洗涤剂主剂为液体时，它可以是均匀的溶液，也可以是不均匀的分散液。为了避免洗涤剂中的纤维素酶分解羧甲基纤维素，比较可取的是在将羧甲基纤维素加入到组合物中之前，使羧甲基纤维素颗粒化或将其包被。
在工业和家庭应用中，可以按这些环境中常规使用的温度、反应时间和液体比例，将本发明的洗涤剂组合物与含纤维素的织物，如弄脏的织物一起保温。本领域技术人员易于确定保温条件，即用本发明的洗涤剂组合物有效处理含纤维素之织物的条件。因此，用本发明洗涤剂进行有效处理的适当条件应与使用包含已知纤维素酶的类似洗涤剂组合物的条件一致。
另外，可将本发明的洗涤剂配制成中间pH值下的适当溶液中的预洗涤溶液，在所述pH下存在的活性足以达到所需的改善效果，如软化、去小球、防止起球、除去表面纤维或清洁作用。当洗涤剂组合物为液体、喷雾、凝胶或糊状组合物形式的预浸泡(如预洗涤或预处理)组合物时，通常使用的增大纤维素酶约占预浸泡或预处理组合物总重量的0.0001-1％(重量)。在这种组合物中，可任选使用表面活性剂，当使用表面活性剂时，其存在的浓度约为预浸泡组合物总重量的0.005-20％(重量)。组合物的其余部分含有预浸泡所用的常规组分，即常规浓度的稀释剂、缓冲液、其它酶(蛋白酶)等等。
预计本文所述含有截短纤维素酶的组合物可作为适于使褪色的织物恢复颜色(例见美国专利4,738,682，其全文通过参考文献掺入本文)的独一无二的组合物用于家庭，以及用于除污渍和去小球和抗起球(防止起球)。
在饲料添加剂及纸浆和纸加工中使用本发明的纤维素酶特别有效。这些额外的工业应用分别描述于例如PCT公开号95/16360和芬兰授权专利87372中。
为了进一步阐明本发明及其优点，给出了下列实施例，应理解提供这些实施例仅是为了阐明本发明，而不是以任何方式限制本发明的范围。实施例实施例1通过重组DNA技术克隆和表达EGIII二聚体(1)构建从Trichoderma longibrachiatum中分离含有EGIII编码基因的DNA(例见美国专利5,475,101，其内容通过参考文献掺入本文)。简单地说，可以从Trichoderma longibrachiatum菌株RL-P37中提取总DNA，用多种限制性酶消化。将经消化的DNA进行琼脂糖凝胶电泳，转移至尼龙膜上并与得自含有100bp PCR片段的M13克隆的放射性标记DNA杂交。由此Southern分析确定了EGIII编码区部分位于基因组DNA的3kb Asp718片段内。图7阐明了基因组DNA中EGIII编码基因周围的区域，也显示出用于制备本实施例之DNA的HindIII位点。
图1中提供了EGIII编码基因的DNA序列(SEQ ID NO1)和相应的氨基酸序列(SEQ ID NO2)。为了在两个EGIII蛋白质分子之间形成连接，必需选择适当的连接序列。本文阐明的策略示于图2，包括将第一个EGIII分子的羧基末端与CBHI分子的接头区连接，然后使EGIII-接头融合物与第二个EGIII分子的氨基末端连接。下文描述完成此蛋白质连接的基因工程。
如图9所示，使用4个PCR反应来产生标记片段“PCR片段4”。独立进行前3个PCR反应，这3个反应片段具有相互互补的末端，使得它们在第4个PCR反应中能够相互连接。可按美国专利5,475,101和EP专利137280所述制备EGIII和CBHI克隆制品。
使用该HindIII片段EGIII基因克隆作为DNA模板制备“PCR片段1”，正向引物的序列为CGCCA ATTTG GTACC GAGCC CTTCA CGGG(SEQ ID NO3)，反向引物的序列为GCCAC GGTTT CCGCC GGGGT TGATAGATGC GGTCC AGG(SEQ ID NO4)。扩增后产生了90个碱基的一个片段。在NuSieve琼脂糖上电泳该DNA片段，从凝胶上切下所述片段并回收之。
使用CBH1基因克隆作为DNA模板制备“PCR片段2”，正向引物的序列为CCTGG ACCGC ATCTA TCAAC CCCGG CGGAA ACCGT GGC(SEQID NO5)，反向引物的序列为CCACT GGTCA CAGCT GGTTT GAGAC TGGGT AGGTC CGGG(SEQ ID NO6)。扩增后产生了119个碱基的一个片段。在NuSieve琼脂糖上电泳该DNA片段，从凝胶上切下所述片段并回收之。
使用HindIII片段EGIII基因克隆作为DNA模板制备“PCR片段3”，正向引物的序列为CCCGG ACCTA CCCAG TCTCA AACCA GCTGTGACCA GTGG(SEQ ID NO7)，反向引物的序列为GCAGC CGAAT TCAGAGCCGG CTGAT GCTCC(SEQ ID NO8)。扩增后产生了114个碱基的一个片段。在NuSieve琼脂糖上电泳该DNA片段，从凝胶上切下所述片段并回收之。
在同一反应中合并“PCR片段1，2和3”，并将所得序列作为DNA模板，制得“PCR片段4”，正向引物的序列为CGCCA ATTT G GTACCGAGCC CTTCA CGGG(SEQ ID NO9)，反向引物的序列为GCAGC CGAATTCAGA GCCGG CTGAT GCTCC(SEQ ID NO10)。扩增后产生了246个碱基的一个片段。根据厂商的说明，使用Qiaquick PCR纯化试剂盒(Qiagen公司，Chatsworth CA)纯化PCR反应产物，然后根据厂商说明，用酶Asp718I和EcoRI限制性消化PCR反应产物。消化后，产生约225个碱基的一个片段，在NuSieve琼脂糖上电泳DNA片段，从凝胶上切下所述片段并回收之，再连接到用相同的限制性内切核酸酶切割过的pUC19载体上。所得“PCR片段4”在限制性消化步骤之前的序列示于图4。
如图6所示，使用具有Trichoderma longibrachiatum DNA之含有EGIII基因的HindIII片段的pUC19载体来产生二聚体的表达载体。如图6所示，制得合成的寡核苷酸，然后将所述寡核苷酸与分离自pUC19∷EG3载体的0.72kb Sfil-Asp718I片段和分离自PCR片段4的0.22kb Asp718I-NgoM1片段连接。再将形成的片段插入pUC19∷EG3载体中，以形成pUC19∷二聚体载体。
为了表达二聚体，根据Sambrook等(1989)的方法构建质粒pTEX(示于图8；有关pTEX载体制备的完整描述见PCT公开号WO96/23928，该文献的内容通过参考文献掺入本文)。该质粒被设计为多用途的表达载体，以用于丝状真菌Triehodermalongibrachiatum中。该表达盒具有几个有利于该功能的独特特征。使用T.longibrachiatum强的CBHI启动子和终止子序列调节转录。T.longibrachiatum pyr4选择性标记基因被插入到CBHI终止子序列内，利用唯一的NotI限制性位点或唯一的NotI和NheI限制性位点可切下整个表达盒。因此，尽管pTEX是本实施例优选的表达盒，但它仅是具有类似便利特征的很多合适表达盒中的一例。
如图6所示，用HindIII切割载体pUC19∷二聚体，用T4 DNA聚合酶补平突出端，用SacII切割并分离2.0kb的片段。然后将此片段连接至用SacII和PmeI切割过的pTEX载体内。
二聚体表达载体含有强的CBHI启动子以驱动人工EGIII二聚体基因的表达。第二个EGIII基因的终止密码子后紧接着约300个碱基的EGIII终止子序列。基因pyr4被用作转化至木霉的选择性标记。(2)转化和筛选使用上文产生的载体转化原先已缺失了4个纤维素酶基因CBHI、CBHII、EGI和EGII的T.longibrachiatum菌株(例见美国专利5,472,864)。摇瓶培养稳定的转化子，并使用RBB-CMC试验检测内切葡聚糖酶活性。在15L发酵罐中培养经内切葡聚糖酶活性测定出的4个产量最高的转化子，收集发酵肉汤培养基以供分析。在SDS-PAGE凝胶上约50KD的预测二聚体大小的位置处观察到一条新的蛋白质带。通过考马斯染色估测，这种新的蛋白质是最为主要的蛋白质。未转化的对照菌株在约50KD处未显示出此蛋白质带。另外，在用EGIII抗体进行探测的western印迹中，50KD的带呈阳性反应。因此，转化的菌株产生了新的EGIII二聚体酶，并且是其主要发酵产物。实施例2比较强度损失此实施例研究了本发明的纤维素酶组合物与其亲本酶相比使强度损失降低的能力。此实施例中利用pH为5的纤维素酶水溶液，此pH值反映了如美国专利5328841，5472864和5475101提供的方法所述产生的经基因工程改造的Trichoderma longibrachiatum菌株所产生的EGIII的最适pH。具体地说，在此实施例中，所分析的第一种纤维素酶是含有野生型EGIII的组合物，所分析的第二种纤维素酶是实施例1中所述的EGIII二聚体。
检测纤维素酶组合物在石洗经染色的粗斜纹布的过程中对含棉织物的作用并测定相应织物的强度损失。在下列条件下，使用工业化的洗衣机和干燥器制备石洗的粗斜纹布织物柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液@pH538L总体积120-135℃6条具有等重量镇重物的粗斜纹布裤1小时的运作时间给予15-30ppm的EGIII或EGIII二聚体，以使织物的磨损度相当。
通过使用Instron Tester确定纬纱方向上的抗张强度(FTS)以测定强度损失，将结果与用不加纤维素酶的相同溶液处理过的织物的FTS相比较。这一分析的结果表示为按下列确定的强度损失百分比％强度损失＝100×[1-(FTSx/FTSy)]其中FTSx是使用纤维素酶时纬纱方向上的抗张强度，FTSy是不使用纤维素酶时纬纱方向上的抗张强度。
分析结果示于图5，该图阐明当所使用酶的用量达到相等磨损程度时，用增大纤维素酶(EGIII二聚体)处理的纺织品与用亲本EGIII纤维素酶处理的纺织品相比，前者的强度损失明显较低。
权利要求
1.一种处理含纤维素之织物的方法，所述方法包括以下步骤(a)形成含有纤维素酶组合物的水溶液，所述组合物中所含的纤维素酶与前体纤维素酶的不同之处在于前者已被增大；(b)在适于处理所述含纤维素之织物的条件下，将所述水溶液与所述含纤维素的织物接触一段时间。
2.权利要求1的方法，其中当处理方式相同时，所述含纤维素的织物与用含有前体纤维素酶而不是所述增大纤维素酶的纤维素酶组合物处理过的含纤维素织物相比，前者显示出强度损失降低。
3.权利要求1的方法，其中所述纤维素酶得自真菌、细菌或植物来源。
4.权利要求3的方法，其中所述纤维素酶得自丝状真菌或芽孢杆菌属的种。
5.权利要求4的方法，其中所述纤维素酶得自芽孢杆菌属、木霉属、腐质霉属、镰孢属、嗜热单孢菌属的种。
6.权利要求5的方法，其中所述纤维素酶得自Trichodermalongibrachiatum。
7.权利要求6的方法，其中所述增大纤维素酶衍生自EGIII。
8.权利要求1的方法，其中所述增大纤维素酶含有已通过在其中加入额外氨基酸残基、聚合物组分或纤维状组分而得以改性的前体纤维素酶。
9.权利要求8的方法，其中所述增大纤维素酶含有所述前体纤维素酶的多聚体。
10.权利要求9的方法，其中所述多聚体含有EGIII组分。
11.权利要求10的方法，其中所述多聚体含有通过CBHI接头序列连接在一起的EGIII二聚体。
12.权利要求8的方法，其中所述增大纤维素酶含有其上附着有聚合物组分的前体纤维素酶。
13.权利要求12的方法，其中所述聚合物或纤维状组分包括聚乙二醇、多糖、多肽、聚酯、合成聚合物、脂质、脂肪酸、壳多糖、脱乙酰壳多糖或表面活性剂。
14.增大纤维素酶在生产可发酵性生物质中的用途。
15.增大纤维素酶作为动物饲料添加剂的用途。
16.增大纤维素酶在谷物湿磨中消化基于纤维素之杂质的用途。
全文摘要
本发明涉及可有利地用于处理纺织品的改性纤维素酶蛋白质。具体地说,本发明提供了处理含纤维素之织物的方法,所述方法包括下列步骤:形成含有纤维素酶组合物的水溶液,所述组合物中所含的纤维素酶与前体纤维素酶的不同之处在于前者已经增大;在适于处理含纤维素之织物的条件下,将所述水溶液与所述织物接触一段时间。增大纤维素酶可含有两种或多种不同纤维素酶单位的多聚体组合物,或其中附着有聚合物或纤维状组分的单个纤维素酶。
文档编号C08B37/00GK1246148SQ97181477
公开日2000年3月1日 申请日期1997年12月16日 优先权日1996年12月23日
发明者B·S·鲍尔, K·A·克拉克森, E·A·拉里那斯, M·沃德 申请人:金克克国际有限公司