一种磷脂dha的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物工程和保健品领域，特别是涉及一种磷脂DHA的制备方法。
【背景技术】
[0002] 磷脂（简称PL)是含磷酸根的类脂化合物的总称，广泛分布于自然界中。几乎所有 的细胞中都含有磷脂，它是细胞膜的基本组成成分，是重要的生命物质。磷脂对活化细胞， 维持新陈代谢，及荷尔蒙的均衡分泌，增强人体的免疫力和再生力，都能发挥重大的作用。 磷脂可以分解过高的血脂和过高的胆固醇，清扫血管，使血管循环顺畅，被公认为"血管清 道夫"。磷脂还可以使中性脂肪和血管中沉积的胆固醇乳化为对人体无害的微粒，溶于水中 而排出体外，同时阻止多余脂肪在血管壁沉积，缓解心脑血管壁的压力。磷脂主要包括磷脂 酰胆碱（PC)、磷脂酰乙醇胺（PE)、磷脂酰肌醇（PI)、磷脂酰丝氨酸（PS)及磷脂酸（PA)等。 磷脂的生理活性与其脂肪酸的组成和极性末端的性质密切相关，一些具有特定结构的磷脂 有很高的药用价值。
[0003] 二十二碳六烯酸（简称DHA)是主要的《-3高度不饱和脂肪酸之一，俗称"脑黄 金"，是人类大脑和视网膜组织中细胞膜的组成成分，对婴幼儿视觉和神经系统的发育有至 关重要的作用，同时能够降低心血管疾病的发病率，并具有一定的抗癌和抗炎的功效。DHA 人体自身不能合成，只能靠外源补充。DHA从存在形态上主要分为：甘油三酯型、甲酯型、乙 酯型和卵磷脂型，DHA的结构差异或者存在状态对DHA在人体内的消化吸收会产生巨大影 响。不管是乙酯型和甲酯型或者是甘油三酯型，在体内都是以被动扩散的方式被吸收的。乙 酯型DHA吸收率仅为20%左右，天然形态存在的甘油三酯型DHA吸收率远高于乙酯型，也只 有50%左右。而近几年科学研宄发现，磷脂型DHA在体内以主动吸收的方式被吸收，吸收率 接近100%。磷脂型DHA具有细胞分化诱导的作用，引起研宄人员的高度关注，所以磷脂型 DHA作为食品添加剂、保健品及药品具有极高的商业价值。
[0004] 目前获得磷脂型DHA的途径主要有通过喂食鸡的过程中添加含有DHA的饲料的富 集法以及酶合成法，如中国专利申请103815434A-种富含蛋黄卵磷脂DHA的蛋黄粉制作 工艺中就是通过制作DHA营养精华素粉剂作为蛋鸡饲料的添加成份，进而制得蛋黄卵磷脂 DHA。富集法受原料限制，步骤复杂，而且时间较长。中国专利申请102181498B酶法制备磷 脂酰胆碱型D_3不饱和脂肪酸，以海豹油为原料，在酶非水相催化作用下，与溶血磷脂酰 胆碱反应得到磷脂酰胆碱型D_3不饱和脂肪酸。该方法中海豹油不易得，成本较高，且酶 在非水相下，催化效率比较低，并且产物为混合物，不能实现磷脂型DHA的单独生产，且其 脂肪酶多是采用微生物产的脂肪酶，不利于进行大量推广。中国专利申请101818179A-种 制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法，先利用磷脂酶A和磷脂酶其中一种或两 种混合物催化磷脂与多不饱和脂肪酸酯酯交换反应，生成富含多不饱和脂肪酸的磷脂；再 利用磷脂酶D催化多不饱和脂肪酸的磷脂与L-丝氨酸转磷酯化反应，生成富含多不饱和脂 肪酸的磷脂酰丝氨酸。该方法需要先分离得到富含多不饱和脂肪酸的磷脂，反应过程和需 要的条件较复杂，造成的原料损失也较多；并且，其只适用于磷脂酰丝氨酸，对甘油磷脂的 原料要求较高，方法的适用性比较窄。因此，为适应市场需要，迫切需要找到一种快速高效 地利用多种磷脂来合成纯度很高的磷脂DHA的方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
[0006] 本发明的另一个目的在于解决现有技术难以产业化的不足，便于工业化生产，提 供一种成本低、制作方法简单地获得磷脂DHA的方法。
[0007] 本发明的又一个目的是提供一种微反应体系，其能够提高甘油磷脂和DHA的反应 效率。
[0008] 本发明的再一个目的是提供一种磷脂DHA的制备方法，提高甘油磷脂和DHA的反 应效率，降低生产成本，以快速生产大量磷脂DHA。
[0009] 本发明提供的技术方案为：
[0010] 一种磷脂DHA的制备方法，包括：
[0011] 步骤一、将阴/阳离子表面活性剂溶于疏水性的烷类溶剂中制备得到微反应体 系，且该烷类溶剂中含有的阴/阳离子表面活性剂的浓度为0. 01?lmol/L;以及，
[0012] 步骤二，将甘油磷脂和DHA加入步骤一制得的微反应体系中，采用磷脂酶进行催 化反应即得到磷脂DHA。
[0013] 优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法，在所述步骤一之后和所述步骤二之前还 包括：
[0014] 步骤（A)、向步骤一中制备的微反应体系中加入磷酸缓冲液，其中，所述磷酸缓冲 液和所述微反应体系的体积比为100 : 0.5?2,之后再进行所述步骤
[0015] 优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法中，在所述步骤（A)中，首先将0. 5X106? 5X106U的所述磷脂酶与所述磷酸缓冲液混匀，之后再将所述磷脂酶和所述磷酸缓冲液加 入到所述微反应体系中，利用该磷脂酶催化步骤二中的甘油磷脂和DHA进行反应。本发明 的方法中，磷酸缓冲液中含有水，水能促进酶促反应，有机溶剂影响微反应体系的大小，从 而影响水增溶的能力，所以可以利用因溶剂作用引起的不同微反应体系结构实现选择性增 溶生物分子的目的。
[0016] 优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法中，所述阴/阳离子表面活性剂包括丁二酸 二酯磺酸钠、溴化十六烷基三甲胺或溴化十二烷基二甲铵中的任意一种，所述烷类溶剂为 主链含有六或七个碳的烷类，该烷类溶剂中含有的丁二酸二酯磺酸钠、溴化十六烷基三甲 胺或溴化十二烷基二甲铵的浓度为〇. 03?0. 07mol/L。
[0017] 优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法中，所述烷类溶剂为异辛烷或正庚烷。
[0018] 优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法中，所述步骤二中，甘油磷脂和DHA在微反 应体系中反应的具体过程为：将甘油磷脂和DHA加入该微反应体系中，于温度40?55°C和 搅拌转速180?200rpm条件下密闭反应12?20h，其中所述甘油磷脂和所述DNA的质量比 为 3 : 1 ?5 : 1〇
[0019] 优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法中，磷脂DHA都具有下式（I)的结构：
[0020]
【主权项】
1. 一种磷脂DHA的制备方法，包括： 步骤一、将阴/阳离子表面活性剂溶于疏水性的烷类溶剂中制备得到微反应体系，且 该烷类溶剂中含有的阴/阳离子表面活性剂的浓度为0. Ol?lmol/L ;以及， 步骤二，将甘油磷脂和DHA加入步骤一制得的微反应体系中，采用磷脂酶进行催化反 应即得到磷脂DHA。
2. 如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，在所述步骤一之后和所述步骤二之前还 包括： 步骤（A)、向步骤一中制备的微反应体系中加入磷酸缓冲液，其中，所述磷酸缓冲液和 所述微反应体系的体积比为100 : 0.5?2,之后再进行所述步骤二。
3. 如权利要求2所述的磷脂DHA的制备方法，其中在所述步骤㈧中，首先将 0. 5 X IO6?5 X 10 6U的所述磷脂酶与所述磷酸缓冲液混匀，之后再将所述磷脂酶和所述磷 酸缓冲液加入到所述微反应体系中，利用该磷脂酶催化步骤二中的甘油磷脂和DHA进行反 应。
4. 如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，其中所述阴/阳离子表面活性剂包括丁 二酸二酯磺酸钠、溴化十六烷基三甲胺或溴化十二烷基二甲铵中的任意一种，所述烷类溶 剂为主链含有六或七个碳的烷类，该烷类溶剂中含有的丁二酸二酯磺酸钠、溴化十六烷基 三甲胺或溴化十二烷基二甲铵的浓度为〇. 03?0. 07mol/L。
5. 如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，其中所述烷类溶剂为异辛烷或正庚烷。
6. 如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，其中所述步骤二中，甘油磷脂和DHA在微 反应体系中反应的具体过程为：将甘油磷脂和DHA加入该微反应体系中，于温度40?55°C 和搅拌转速180?200rpm条件下密闭反应12?20h，其中所述甘油磷脂和所述DNA的质量 比为3 : 1?5 : 1。
7. 如权利要求1至6任一项所述的磷脂DHA的制备方法，其中所述磷脂DHA都具有下 式⑴的结构：
其中，R"是选自胆碱、乙醇胺、肌醇、丝氨酸或氢中的任意一种或几种化学结构的部 分；R和W之一为DHA酰基，另一个R和W为氢或DHA酰基。
8. 如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，其中所述磷脂酶为磷脂酶A1、磷脂酶A2 和磷脂酶B中的任意一种。
9. 如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，其中所述甘油磷脂来源于植物、动物或微 生物中的任一种。
10. 如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，还包括在步骤二之后进行步骤三，步骤 三的具体过程包括：（1)向步骤二中制得的磷脂DHA的溶液中加入树脂以回收磷脂酶，之后 过滤得滤液，将该滤液在60°C水浴中减压蒸馏，之后再向该滤液中加入与其体积相同的丙 酮，再次过滤得沉淀，将沉淀干燥后即得到所述磷脂DHA。
【专利摘要】本发明公开了一种磷脂DHA的制备方法，包括：步骤一、将阴/阳离子表面活性剂溶于疏水性的烷类溶剂中制备得到微反应体系，且该烷类溶剂中含有的阴/阳离子表面活性剂的浓度为0.01～1mol/L；以及，步骤二，将甘油磷脂和DHA加入步骤一制得的微反应体系中，采用磷脂酶进行催化反应即得到磷脂DHA。依照本发明的方法具有成本低、污染小、无高温加工过程等特点，反应过程无废水排放，工艺操作简单安全，且反应副产物少，无废弃物生成，反应时间短。
【IPC分类】C12P9-00
【公开号】CN104531790
【申请号】CN201410789098
【发明人】陈吴西, 李德茂, 陈树林
【申请人】中国科学院天津工业生物技术研究所
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月17日