一种球毛壳菌及其应用
【专利说明】
[0001]
技术领域： 本发明涉及一株对苹果炭疽病原菌有强抑制作用的球毛壳菌，属于生物技术领域。
[0002]
【背景技术】： 苹果炭疽病又称苦腐病，是苹果果实主要病害之一，我国大部分苹果产区均有发生，在 夏季高温、多雨、潮湿的地区发病尤为严重。果实在座果后即可被感染，但在果实接近成熟 时开始发病，采收后在贮藏期继续发展，造成采前大量落果和采后贮藏中果腐。
[0003] 我国苹果炭疽病主要由胶孢炭疽菌引起，防治药剂也主要针对该病原菌。目前苹 果炭疽病采前防治的方法主要有：生长期套袋、化学防治和生物防治等。套袋技术在苹果田 间生产中已被大面积推广使用，存在的问题是生长期对幼果套袋增加了果农的经济和劳动 投入，若掌握不好套袋时间和技术，可能还会造成更多不必要的经济损失。化学防治具有高 效、速效、使用方便、经济效益高等特点，但是若使用不当容易造成植物发生药害，有益微生 物受到损害，病原物产生抗药性，环境污染，甚至引起人畜中毒等许多严重后果。生物防治 方法也为炭疽病的防治开辟了另一条途径，主要是通过有益微生物或诱抗剂的诱导使植物 的抗病性增强，植物与病原物之间的关系发生改变，从而达到抑制病害发生的目的。
[0004] 生物防治有广阔的应用前景，因为对环境的污染较小，无残留，对人畜安全，是 近年来研宄的热门课题，如具有抗植物病原菌作用的银杏内生真菌抗菌发酵液的制备方 法，中国专利：CN103194490A、一种黄色篮状菌及其在防治植物病原菌中的应用，中国专 利：CN102286383A，但是上述文献并未涉及球毛壳菌的防治作用。有关球毛壳菌的文献 涉及其生物防治作用，如喜树内生真菌的抗植物病原菌发酵液的制备方法，中国专利： CN103255065A，但是均未涉及分离自濒危植物珊瑚菜内生球毛壳菌的报道。珊瑚菜是临床 常用中药材料，少见病原菌侵染，其内生菌分离及其在农业病虫害生物防治中应用具有重 要研宄价值。
[0005]
【发明内容】
： 本发明的目的在于克服上述已有技术的不足而提供一种分离自濒危植物珊瑚菜的内 生球毛壳菌HY1，其培养要求简单，生长条件易控制且产率大，且抗菌效果较好，对苹果炭 疽病原真菌的抑菌率最高达到100%，其发酵液与菌丝提取液对胶孢炭疽菌有很强的抑制作 用，可作为苹果炭疽病的生物防治菌剂使用。
[0006] 本发明的目的可以通过如下措施来达到：一种球毛壳菌，其特征在于其保藏名称 为：HY1，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2015年3 月11日，保藏编号为CGMCC No. 10609,分类命名：球毛壳菌CXaeioffiia?
[0007] 本发明的另一个目的是该球毛壳菌在抑制苹果炭疽病原菌中的应用。
[0008] 本发明的另一个目的是该球毛壳菌的发酵液与菌丝提取液作为苹果炭疽病的生 物防治菌剂的应用。
[0009] 本发明球毛壳菌HY1，分离自山东省海阳市的海边自然生长的健康成年期珊瑚菜 新鲜叶片内部，最初培养时菌落呈浅黄色，后颜色开始变黄变黑，液体培养时菌丝呈球状。 显微形态观察发现菌丝具横隔状，基内菌丝向外周辐射，孢子囊外面包裹着不透明的黑色 子囊壳，子囊壳上具有特殊的毛发状结构。子囊孢子柠檬形或广椭圆形而两端略尖，暗褐色 至橄榄褐色。
[0010] 本发明中球毛壳菌HY1，培养容易，可在马铃薯葡萄糖培养基（PDA)上生长良好， 且在20°C - 35°C均能正常培养。
[0011] 本发明同已有技术相比可产生如下积极效果：本发明培养要求简单，生长条件易 控制且产率大。且抗菌效果较好，对苹果炭疽病原真菌的抑菌率最高达到100%，还对小麦 赤霉菌、西瓜枯萎菌、番茄灰霉菌、玉米弯孢菌的抑制率分别达到66. 53%、30. 49%、31. 25%、 59. 17%，该菌株在苹果炭疽病的防治方面具有广阔的应用前景。本发明球毛壳菌HYl的发 酵液及其菌丝提取液对胶孢炭疽菌有很强的抑制作用，可作为苹果炭疽病的生物防治菌剂 使用，对苹果炭疽病原菌抑制率高。
[0012]
【附图说明】： 图1为球毛壳菌HYl在分离培养基上的培养特征图； 图2为球毛壳菌HYl的显微镜形态观察特征图； 图3为球毛壳菌HYl的发酵液与菌丝体水提液对苹果炭疽病原菌的抑菌率图； 图4为球毛壳菌HYl胞内代谢产物液与商品农药的使用效果比较图； 图5为球毛壳菌HYl胞外代谢产物液与商品农药的使用效果比较图。
[0013]
【具体实施方式】： 以下结合具体实施例对本发明做进一步详细描述，这些实施例用于理解而不是限制本 发明的保护范围。
[0014] 实施例1 :内生真菌的筛选与抑菌活性： 所用的筛选培养基(加抗生素的PDA培养基）：马铃薯200g去皮切块后蒸煮20min，后 过4层纱布收集滤液，加入葡萄糖20g，琼脂20g，加热融化后定容至1000 ml，依次添加青霉 素和链霉素至终浓度均为80ug/ml，pH值自然，121°C，高压灭菌20min后倒平板备用。
[0015] 内生真菌的筛选：从健康成年期珊瑚菜上取新鲜叶片，在流水下冲洗干净，对材料 进行表面消毒，先用75%的乙醇处理90S，然后在氯化汞中浸泡5min，无菌水冲洗4-5遍后 再无菌的培养皿上将材料切成0. 5cm*0. 5cm的小块组织。将切块的珊瑚菜叶片组织用无菌 镊子放置于筛选培养基的表面，切面朝向培养基，每皿放3-4块组织，28°C恒温培养，同时 取表面消毒的未切开的叶片和冲洗最后一遍的无菌水分别置于平板中作为对照。经过5~7 d，菌丝从组织块上长出，形成一定大小菌落时（以叶片组织块为中心向周围进行扩散生长 的为分离的目的菌种），从边缘挑取菌丝移到另一筛选培养基平板上进行纯化，重复至纯培 养。
[0016] 抑制农业病原菌活性测定：采用抑制菌丝生长速率法测定。首先采用不添加抗生 素的PDA液体培养基中28°C下培养7d，8000r/min离心收集菌丝体，经烘干后将研磨成粉 末，以1:10 (g/ml)比例用丙酮萃取18h，再用超声波细胞破碎仪破碎（5min，600W)进一 步提取其化学成分，取内生真菌的丙酮提取液备用。内生真菌培养物的丙酮提取液加入灭 菌融化的PDA培养基(不加抗生素）中，每145ml培养基加5ml提取液，（用5ml的无菌水和 丙酮分别做空白对照)，混匀倒平板。用直径〇. 5cm的打孔器在已经活化的供试农业病原菌 的菌落边缘按同心圆制备菌饼，接种于上述平板上，每个处理设3个重复，于28°C恒温培养 4d，采用十字交叉法测量菌落直径。
[0017] 抑菌率（%)=(对照净生长量-处理净生长量）/对照净生长量*100 % 净生长量=三次重复平均值（cm) - 0. 5cm 筛选的内生真菌对农业病原菌的抑制效果见表1，其中被检测的10株内生真菌中，菌 株HYl的抑菌效果最好，对小麦赤霉病菌的抑菌率达到66. 53%，对苹果炭疽病菌的抑菌率 最高，达到100%。
[0018] 表1筛选的珊瑚菜内生真菌对农业病原菌的抑制效果
【主权项】
1. 一种球毛壳菌，其特征在于其保藏名称为：HY1，保藏单位：中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心，保藏日期：2015年3月11日，保藏编号为CGMCC No. 10609,分 类命名?.豫毛贺售^ Chaetomium globosum。
2. 权利要求1所述的一种球毛壳菌在抑制苹果炭疽病原菌中的应用。
3. 权利要求1所述的一种球毛壳菌的发酵液与菌丝提取液作为苹果炭疽病的生物防 治菌剂的应用。
【专利摘要】本发明公开了一株对苹果炭疽病原菌具有强抑制效果的球毛壳菌，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No. 10609，保藏日期为2015年3月11日。本发明所提供的球毛壳菌HY1为濒危植物珊瑚菜的内生真菌，其发酵液与菌丝提取液均对苹果炭疽病原菌具有强抑菌效果，对其他植物病原菌也有一定的抑制作用，该菌株在苹果炭疽病防治等方面具有广阔的应用前景。CGMCC No. 1060920150311
【IPC分类】A01N63-04, A01P3-00, C12N1-14
【公开号】CN104877919
【申请号】CN201510307857
【发明人】张萍, 毛志远, 程仕伟
【申请人】鲁东大学
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年6月8日