一种牛樟芝诱变菌株及培育方法
【专利说明】
[0001]
技术领域： 本发明公开的一种牛樟芝诱变菌株，为一种新的菌株品种，其菌丝体干重及有效成分 腺苷、多糖和三萜化合物的产量和原始菌株相比具有显著提高，本发明还提供了该菌株的 培育方法，属于发酵工程技术领域。
[0002]
【背景技术】： 樟芝（Antrodiacamphorata)，又名牛樟芝或牛樟葫，属于担子菌纲、非裙菌目、多孔科、 多年生担子菌，只生长在台湾地区的牛樟树腐朽树干的内壁。牛樟芝在台湾中医药界己使 用多年，普遍认为其气芳香味辛苦、平。认为具有温中散结、祜风行气、活血化疲、解毒消 月中、镇静止痛、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、提升免疫力的效果；针对腹湾、胃肠疼痛、食物毒蕈中 毒、糖尿病、脂肪肝、酒精性肝硬化、肝癌等有独特的功效。牛樟芝有许多的活性成分，如 多糖体、超氧歧化酶、三萜类化合物、腺苷、免疫蛋白、微量元素、维生素、核酸、凝集素、纤维 素、氨基酸等。其中以三萜类化合物高达200种以上使得牛樟芝具有抗癌、保肝等功效。
[0003]
【发明内容】
： 本发明的目的是提供一种牛樟芝诱变菌株，为一种新的菌株，其菌丝体干重及有效成 分腺苷、多糖和三萜化合物的产量和原始菌株相比具有显著提高。
[0004] 本发明公开了上述菌的培育方法。
[0005] 本发明还提供了牛樟芝诱变菌株培养工艺条件优化。
[0006] 本发明公开的牛樟芝诱变菌株，命名为：牛樟芝AC09 ;Antrodiacamphorata. AC09,该诱变菌株已于2015年5月3日保藏《中国典型培养物保藏中心》，保藏号为：CCTCC NO :M 2015274,根据真菌的系统分类学和鉴定的进化树表明，菌株属于非褶菌目，多孔菌 科，薄孔菌属，多年生覃菌类。
[0007] 本发明所述的高产牛樟芝诱变菌株AC09,其有以下方法诱变选育而制得，以牛樟 芝(ATCC200183)为出发菌株，采用化学诱变处理技术，选育出高产牛樟芝高产突变菌株 AC09〇
[0008] 牛樟芝诱变菌株AC09的特征为：菌丝体干重、腺苷、三萜化合物及多糖的含量均 有明显提高，其中菌体干重较原出发菌提高了 63. 00 % ;腺苷含量提高了 41. 7% ;三萜化合 物含量提高了 74. 9% ;多糖含量提高了 53. 1%。
[0009] 本发明所述的牛樟芝诱变菌株的诱变方法，包括以下步骤完成： 1) 将牛樟芝菌株ATCC200183,以5%接种量接种至产孢培养基中，产孢培养基的培养 为：葡萄糖 15. 2471g/L，蛋白胨 8. 3179g/L，酵母浸粉 9. 7392g/L，MgSO4 · 7H20 0. 0237g/L和VB10.0 310g/L。26°C恒温摇床中120rpm培养7天，无菌脱脂棉过滤，得 到孢子悬液； 2) 在无菌条件下取ImL步骤1)中得到的孢子悬液加入IOmLNTG (10mg/mL)中，分别 于诱变〇、1〇、15、2〇111；[11后，取0.31111^孢子悬液于2.71111^无菌蒸馏水中并逐级稀释，涂布于种 子培养基平板上培养7天，将菌株于96孔板保存； 3) 将培养好的突变株用接种针逐个接种至种子培养基中进行活化，于26°C恒温摇床中 150rpm培养7天，测定菌丝体干重、腺苷、多糖和三萜化合物含量，以筛选高产突变株。采用 HPLC法测定菌丝体中腺苷和三萜化合物含量；采用蒽铜一硫酸法测定总糖含量。
[0010] 本发明的积极效果在于：通过诱变得到的新牛樟芝菌株，其菌丝体干重及有效成 分腺苷、多糖和三萜化合物的产量和原始菌株相比具有显著提高。
【附图说明】
[0011] 图1为原出发菌株与突变株的有效成分比较； 图2为葡萄糖浓度和酵母浸粉浓度对D值影响的响应面和等高线图。
【具体实施方式】
[0012] 实施例1 牛樟芝诱变株AC09的诱变和选育方法 本发明所述获得高产牛樟芝诱变菌株AC09的诱变方法为亚硝基胍诱变。
[0013] 将牛樟芝菌株ATCC200183,以5%接种量接种至产孢培养基中，产孢培养基的培养 为：葡萄糖 15. 2471g/L，蛋白胨 8. 3179g/L，酵母浸粉 9. 7392g/L，MgSO4 · 7H20 0. 0237g/L和VB10.0 310g/L。26°C恒温摇床中120rpm培养7天，无菌脱脂棉过滤，得 到孢子悬液； 2) 在无菌条件下取ImL步骤1)中得到的孢子悬液加入IOmLNTG (10mg/mL)中，分别 于诱变〇、1〇、15、2〇111；[11后，取0.31111^孢子悬液于2.71111^无菌蒸馏水中并逐级稀释，涂布于种 子培养基平板上培养7天，将菌株于96孔板保存； 3) 将培养好的突变株用接种针逐个接种至种子培养基中进行活化，于26°C恒温摇床中 150rpm培养7天，测定菌丝体干重、腺苷、多糖和三萜化合物含量，以筛选高产突变株。采用 HPLC法测定菌丝体中腺苷和三萜化合物含量；采用蒽铜一硫酸法测定总糖含量。
[0014] 共得到4株高产菌株分别命名为AC03、AC09、AC32和AC49,其中AC09的干重、腺 苷、多糖和三萜化合物含量均高于出发菌株，这四株突变株与出发菌株的有效成分比较见 图1。选取40)9为高产突变株，命名为 ：牛樟芝40)9(411壮〇(1丨3〇31^11〇四七3.40)9)，该 诱变菌株已于2015年5月3日保藏《中国典型培养物保藏中心》，保藏号为：CCTCC N0:M 2015274,根据真菌的系统分类学和鉴定的进化树表明，菌株菌株属于非褶菌目，多孔菌科， 薄孔菌属，多年生覃菌类。
[0015] 实施例2 牛樟芝诱变株AC09与出发菌株（ATCC200183)比较及遗传稳定性考察 将原出发菌株（ATCC200183)与诱变菌株AC09分别再种子培养基(葡萄糖25g/L，蛋白 胨 10g/L，酵母浸粉 10g/L，KH2PO4O. 25g/L，MgSO4 · 7Η200· 2g/L，维生素 B1O. Olg/L)中，于 26°C，150rpm，培养7d进行发酵培养，牛樟芝诱变菌株菌丝体干重、腺苷、三萜化合物及多 糖的含量均有明显提高，其中，菌体体干重达10. 3g/L，较原出发菌提高了 63. 00% ;腺苷含 量可达0. 152g/L，较原出发菌提高了 41.7% ;三萜化合物含量可达0. 126g/L，较原出发菌 提高了 74. 9% ;多糖含量可达31. 3mg/kg，较原出发菌提高了 53. 1%。
[0016] 表1原出发菌株与诱变菌株AC09有效成分含量比较
【主权项】
1. 一株牛樟芝诱变菌株，该诱变菌株已于2015年5月3日保藏《中国典型培养物保藏 中心》，命名为：牛樟芝AC09 ;Antrodia camphorata AC09,保藏号为：CCTCC NO:M 2015274。
2. 权利要求1所述牛樟芝诱变菌株的诱变方法，包括以下步骤完成： 1) 将牛樟芝菌株ATCC200183,以5%接种量接种至产孢培养基中，产孢培养基的培养 为：葡萄糖 15. 2471g/L，蛋白胨 8. 3179g/L，酵母浸粉 9. 7392g/L，MgS04 WH2O 0? 0237g/L 和 VB10.0 310g/L ;26°C恒温摇床中120rpm培养7天，无菌脱脂棉过滤，得到孢子悬液； 2) 在无菌条件下取ImL步骤1)中得到的孢子悬液加入IOmLNTG (lOmg/mL)中，分别 于诱变〇、1〇、15、2〇1]1；[11后，取0.31]11孢子悬液于2.71]11无菌蒸馏水中并逐级稀释，涂布于种 子培养基平板上培养7天，将菌株于96孔板保存； 3) 将培养好的突变株用接种针逐个接种至种子培养基中进行活化，于26°C恒温摇床中 150rpm培养7天，测定菌丝体干重、腺苷、多糖和三萜化合物含量，以筛选高产突变株。
【专利摘要】本发明提供一株牛樟芝诱变菌株，已于2015年5月3日保藏《中国典型培养物保藏中心》，一种命名为：牛樟芝AC09；Antrodiacamphorata AC09，保藏号为：CCTCC NO：M2015274。该诱变菌株的菌丝体干重、腺苷、三萜化合物及多糖的含量均有明显提高，其中菌体干重较原出发菌提高了63.00%；腺苷含量提高了41.7％；三萜化合物含量提高了74.9%；多糖含量提高了53.1%。CCTCC NO:M201527420150503
【IPC分类】C12N15-01, C12R1-645, C12N1-14
【公开号】CN104877917
【申请号】CN201510294438
【发明人】王迪, 刘燕隔, 王娟, 孟庆繁, 刘艳, 袁莉莎, 滕利荣, 逯家辉, 权宇彤
【申请人】吉林大学
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年6月2日