一株雨生红球藻enn71及其培养方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物领域，尤其涉及一株雨生红球藻ENN71及其培养方法与应用。
【背景技术】
[0002] 虾青素是类胡萝卜素的一种，为世界上最强的抗氧化剂，能够有效清除细胞内的 自由基，减少衰老细胞的堆积，具有抗衰老、缓解运动疲劳、增强免疫力、抑制肿瘤的作用。 虾青素分为天然虾青素与人工合成虾青素两种，然而，天然虾青素的稳定性、生物安全性及 吸收效果均优于人工虾青素，而雨生红球藻中的虾青素含量可以达到1. 5-3%，被看做是天 然虾青素的"浓缩品"，鉴于虾青素显著的生理功能，已被广泛应用于医疗保健、美容护肤等 行业。
[0003] 作为天然虾青素"浓缩品"的雨生红球藻具有两个生长阶段：绿色游动细胞与红色 不动孢子阶段，所述红色不动孢子阶段即为虾青素积累的阶段。在生产虾青素时，由于雨生 红球藻的生长速度缓慢、积累虾青素周期长，难以满足市场对虾青素的需求，如果能够诱变 虾青素的含量较高的雨生红球藻株，缩短虾青素的积累周期，对天然虾青素的增产具非常 重要的意义。
【发明内容】
[0004] 本发明的主要目的在于，提供一株雨生红球藻ENN71及其培养方法与应用，所述 雨生红球藻ENN71生长周期短，天然虾青素的含量高，遗传性能稳定。
[0005] 为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] -方面，本发明实施例提供一株雨生红球藻ENN71，为Haematococcus pluvialis， 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，地址：北京市朝阳区北 辰西路1号院3号，邮政编码：100101，保藏编号为CGMCC No. 5147,保藏日期为2011年8月 17日。
[0007] 本发明所获得的雨生红球藻ENN71具有生长周期短，天然虾青素的含量高，性能 稳定，环境适应性强的特点。
[0008] 其中，所述雨生红球藻ENN71虾青素含量为所述雨生红球藻野生株的2倍以上。
[0009] 另一方面，本发明实施例提供一种所述雨生红球藻ENN71的培养方法，包括：将 ￡剛71藻细胞接种在8611培养基中培养，期间，光照强度为50-30(^111〇1/111 2*8，培养温度 为 20-30 °C，pH 为 6. 5-9。
[0010] 另一方面，本发明实施例提供一种所述雨生红球藻ENN71的虾青素诱导方法，包 括：将处在不动孢子阶段的ENN71藻种接种在缺氮的BGl 1培养基中培养3天以上，期间，光 照强度为200 ymol/m2 · s以上，培养温度为20-35°C，pH为6. 5-9。
[0011] 另一方面，本发明实施例还提供一种所述雨生红球藻ENN71在获取用于诱导虾青 素的藻种中的应用。
[0012] 其中，在相同的培养条件下，所述雨生红球藻ENN71生长速度比雨生红球藻野生 株提尚40%以上。
[0013] 另一方面，本发明实施例还提供一种所述雨生红球藻ENN71在虾青素诱导中的应 用。
[0014] 其中，对处在不动孢子阶段的雨生红球藻进行虾青素诱导培养3天以上，所述雨 生红球藻ENN71的虾青素含量为所述雨生红球藻野生株的2倍以上。
[0015] 再一方面，本发明实施例还提供一种所述雨生红球藻ENN71在继代培养中的应 用。
[0016] 其中，将继代培养1年以上的所述雨生红球藻ENN71与雨生红球藻野生株在相同 的培养条件下培养，所述雨生红球藻ENN71生长速度比雨生红球藻野生株提高40 %以上， 对处在不动孢子阶段的雨生红球藻进行虾青素诱导3天以上，所述雨生红球藻ENN71的虾 青素含量为所述雨生红球藻野生株的2倍以上。
[0017] 由此可见，本发明实施例提供的一株雨生红球藻ENN71及其培养方法与应用，所 获得的雨生红球藻ENN71具有生长周期短，天然虾青素的含量高，遗传性能稳定的特点。
【附图说明】
[0018] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例描述 中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些 实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些 附图获得其它的附图。
[0019] 图1为本发明实施例提供的一株雨生红球藻ENN71与野生株ENN wt的生长速度 曲线对比图；
[0020] 图2为本发明实施例提供的一株雨生红球藻ENN71与野生株ENN Wt培养第12天 对比图；
[0021] 图3为本发明实施例提供的另一株雨生红球藻ENN71与野生株ENN wt培养第12 天对比图；
[0022] 图4为本发明实施例提供的一株雨生红球藻ENN71继代培养1年后与野生株ENN wt的生长速度曲线对比图；
[0023] 图5为本发明实施例提供的另一株雨生红球藻ENN71继代培养2年后与野生株 ENN wt培养第12天对比图；
[0024] 图6为本发明实施例提供的再一株雨生红球藻ENN71继代培养3年后与野生株 ENN wt培养第12天对比图。
【具体实施方式】
[0025] 下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完 整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于 本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他 实施例，都属于本发明保护的范围。
[0026] 在本发明的描述中，需要理解的是，术语"中心"、"上"、"下"、"前"、"后"、"左"、 "右"、"竖直"、"水平"、"顶"、"底"、"内"、"外"等指示的方位或位置关系为基于附图所示的 方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或 元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。在 本发明的描述中，除非另有说明，"多个"的含义是两个或两个以上。
[0027] -方面，本发明实施例提供一株雨生红球藻ENN71，为Haematococcus pluvialis， 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，地址：北京市朝阳区北 辰西路1号院3号，邮政编码：100101，保藏编号为CGMCC No. 5147,保藏日期为2011年8 月17日。
[0028] 其中，所述雨生红球藻ENN71也可以称为雨生红球藻突变株ENN71。
[0029] 本发明所获得的雨生红球藻突变株ENN71具有生长周期短，天然虾青素的含量 高，性能稳定，环境适应性强的特点。
[0030] 其中，所述雨生红球藻突变株ENN71虾青素含量为所述雨生红球藻野生株的2倍 以上。
[0031] 另一方面，本发明实施例提供一种所述雨生红球藻突变株ENN71的培养方法，包 括：将ENN71藻细胞接种在BGll培养基中培养2-7天，期间，光照强度为50-300 μ mol/ m2 · s，培养温度为 20-30 °C，pH 为 6. 5-9。
[0032] 其中，所述将ENN71藻细胞接种在BGll培养基中，细胞密度可以为0. 2-1. 5g/L。 在所述培养方法中，向所述培养基中通入二氧化碳与空气的混合气体，其中，所述二氧化碳 可以占0. 5-10%。
[0033] 需要说明的是，与所述雨生红球藻野生株在同样的条件下进行培养，所述雨生红 球藻突变株ENN71生长速度比雨生红球藻野生株提高40%以上。
[0034] 另一方面，本发明实施例提供一种所述雨生红球藻突变株ENN71的虾青素诱导方 法，包括：将处在不动孢子阶段的ENN71藻种接种在缺氮的BGll培养基中培养3天以上，期 间，光照强度为200 ymol/m2 · s以上，培养温度为20-35°C，pH为6. 5-9。
[0035] 其中，将处在不动孢子阶段的ENN71藻种接种在缺氮的BGll培养基中，细胞密度 可以为0. 2-1. 5g/L。在所述培养方法中，向所述培养基中通入二氧化碳与空气的混合气体， 其中，所述二氧化碳可以占〇. 5-20 %。
[0036] 另一方面，本发明实施例还提供一种所述雨生红球藻突变株ENN71在获取用于诱 导虾青素的藻种中的应用。
[0037] 诱导虾青素之前所述雨生红球藻突变株ENN71处于游动细胞阶段，需要对所述游 动细胞进行培养以获得用于诱导虾青素的藻种。
[0038