高效富集唐古特虎耳草中二芳基庚烷类化合物的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物化学及生物医药技术领域，尤其涉及高效富集唐古特虎耳草中二芳基庚烷类化合物的方法。
【背景技术】
[0002]唐古特虎耳草(Saxifraga tangu tica Engl.)，别名甘青虎耳草，是虎耳草科(Saxifragaceae)虎耳草属(的一年生常绿草本植物，藏药名:“松吉蒂”，中药中称之为“迭达”，主要分布在青海、甘肃、西藏、四川以及及不丹与克什米尔地区海拔2900-4900米的针叶林灌丛下。唐古特虎耳草为常用藏药，可全草入药，《中药辞海》记载:其性味微苦、辛、寒。主要功效:清肝利胆，补脾健胃。主治:肝炎，胆囊炎，流行性感冒。
[0003]目前，有关唐古特虎耳草的研究报道仅仅局限于分离到4个黄酮类化合物以及2个甾醇类化合物(杨爱梅，李玉兰.藏药甘青虎耳草化学成分研究，中华中医药杂志，2011，26(9): 1975-1977.)，并未涉及《中药辞海》中记载的唐古特虎耳草主治肝炎的药效物质基础。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、易规模化实施、重复性较好、质量稳定可控的高效富集唐古特虎耳草中二芳基庚烷类化合物的方法。
[0005]为解决上述问题，本发明所述的高效富集唐古特虎耳草中二芳基庚烷类化合物的方法，包括以下步骤:
⑴提取:将唐古特虎耳草药材粉碎至50~120目后，加入体积分数为40%~95%的乙醇溶液进行醇提，经过滤得到唐古特虎耳草提取液；
⑵耐醇膜除杂:将所述唐古特虎耳草提取液经耐醇膜处理后，收集透过液，该透过液经减压干燥即得唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物粗样；
⑶反相固相萃取柱富集:在所述唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物粗样中加入其质量5-10倍的水进行溶解，然后经反相固相萃取柱分离，并依次用2~5倍柱体积的水、体积浓度为20%~35%的甲醇溶液、体积浓度为50%~70%的甲醇溶液进行台阶梯度洗脱，收集50%~70%的甲醇洗脱物；
⑷所述50%~70%的甲醇洗脱物经减压干燥即得唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物组分。
[0006]所述步骤⑴中醇提条件是指料液比为Ikg:6~10L、温度为65°C ~85°C、提取次数为1~3次、每次提取时间为1~3 ho
[0007]所述步骤⑵和所述步骤⑷中的减压干燥条件均是指真空度为0.06-0.09 MPaj^度为 55~65 0C0
[0008]所述步骤⑵中耐醇膜的分子量为8000~12000。
[0009]所述步骤⑶中的反相固相萃取柱是指耐纯水的C3或耐纯水的C18固相萃取柱。
[0010]本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明采用耐醇膜处理藏药提取液，避免了有机试剂的使用，对环境友好；同时耐醇膜可以反复利用，平均成本低廉。
[0011]2、本发明采用反相固相萃取法得到唐古特虎耳草中二芳基庚烷类组分，固相萃取填料可以重复使用，易于规模化实施。
[0012]3、本发明原料要求不高，一般市场上或野生原材料即可，易于批量备料。
[0013]4、本发明工艺简单、重复性较好、质量稳定可控。所得到的唐古特虎耳草二芳基庚烷类组分经二维制备色谱分离纯化及NMR氢谱、碳谱分析，依次判定主要含有(55)-1, 7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxyheptane-3- on-5-0-々-D-6-0-acetylglucoside、
(55)-1,7~bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxy heptane-3-on-5_0-々-D-glucopyranoside、及hirsutanonol等其他化合物。
【具体实施方式】
[0014]实施例1高效富集唐古特虎耳草中二芳基庚烷类化合物的方法，包括以下步骤:
⑴提取:将2.5 Kg唐古特虎耳草药材粉碎至50目后，加入体积分数为40%的乙醇溶液进行醇提，经过滤得到唐古特虎耳草提取液。
[0015]其中:醇提条件是指料液比为Ikg:6L、温度为85°C、提取次数为3次、每次提取时间为I h。
[0016]⑵耐醇膜除杂:将唐古特虎耳草提取液经分子量为8000的耐醇膜处理后，收集透过液，该透过液在真空度为0.06 MPa、温度为65 °C的条件下经减压干燥即得唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物粗样58.4 g0
[0017]⑶反相固相萃取柱富集:在唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物粗样中加入其质量10倍的水进行溶解，然后经反相固相萃取柱分离，并依次用2倍柱体积的水、体积浓度为20%~35%的甲醇溶液、体积浓度为50%~70%的甲醇溶液进行台阶梯度洗脱，收集50%~70%的甲醇洗脱物。
[0018]其中:反相固相萃取柱是指耐纯水的C3固相萃取柱。
[0019](4)50%~70%的甲醇洗脱物在真空度为0.06 MPa、温度为65 °C的条件下经减压干燥即得唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物组分20.5 g0
[0020]实施例2 高效富集唐古特虎耳草中二芳基庚烷类化合物的方法，包括以下步骤:
⑴提取:将5.5 Kg唐古特虎耳草药材粉碎至120目后，加入体积分数为95%的乙醇溶液进行醇提，经过滤得到唐古特虎耳草提取液。
[0021]其中:醇提条件是指料液比为Ikg:10L、温度为65°C、提取次数为I次、每次提取时间为3 ho
[0022]⑵耐醇膜除杂:将唐古特虎耳草提取液经分子量为12000的耐醇膜处理后，收集透过液，该透过液在真空度为0.09 MPa、温度为55°C的条件下经减压干燥即得唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物粗样124.8 g0
[0023]⑶反相固相萃取柱富集:在唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物粗样中加入其质量5倍的水进行溶解，然后经反相固相萃取柱分离，并依次用5倍柱体积的水、体积浓度为20%~35%的甲醇溶液、体积浓度为50%~70%的甲醇溶液进行台阶梯度洗脱，收集50%~70%的甲醇洗脱物。
[0024]其中:反相固相萃取柱是指耐纯水的C18固相萃取柱。
[0025]⑷50°/『70%的甲醇洗脱物在真空度为0.09 MPa、温度为55 °C的条件下经减压干燥即得唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物组分44.3 go
[0026]实施例3 高效富集唐古特虎耳草中二芳基庚烷类化合物的方法，包括以下步骤:
⑴提取:将2.0 Kg唐古特虎耳草药材粉碎至80目后，加入体积分数为75%的乙醇溶液进行醇提，经过滤得到唐古特虎耳草提取液。
[0027]其中:醇提条件是指料液比为Ikg:8L、温度为75°C、提取次数为2次、每次提取时间为2ho
[0028]⑵耐醇膜除杂:将唐古特虎耳草提取液经分子量为10000的耐醇膜处理后，收集透过液，该透过液在真空度为0.08 MPa、温度为60°C的条件下经减压干燥即得唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物粗样43.9 g0
[0029]⑶反相固相萃取柱富集:在唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物粗样中加入其质量8倍的水进行溶解，然后经反相固相萃取柱分离，并依次用3倍柱体积的水、体积浓度为20%~35%的甲醇溶液、体积浓度为50%~70%的甲醇溶液进行台阶梯度洗脱，收集50%~70%的甲醇洗脱物。
[0030]其中:反相固相萃取柱是指耐纯水的C18固相萃取柱。
[0031 ] (4) 509^70%的甲醇洗脱物在真空度为0.08 MPa、温度为60 °C的条件下经减压干燥即得唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物组分15.3 g0
【主权项】
1.高效富集唐古特虎耳草中二芳基庚烷类化合物的方法，包括以下步骤: ⑴提取:将唐古特虎耳草药材粉碎至50~120目后，加入体积分数为40%~95%的乙醇溶液进行醇提，经过滤得到唐古特虎耳草提取液； ⑵耐醇膜除杂:将所述唐古特虎耳草提取液经耐醇膜处理后，收集透过液，该透过液经减压干燥即得唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物粗样； ⑶反相固相萃取柱富集:在所述唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物粗样中加入其质量5-10倍的水进行溶解，然后经反相固相萃取柱分离，并依次用2~5倍柱体积的水、体积浓度为20%~35%的甲醇溶液、体积浓度为50%~70%的甲醇溶液进行台阶梯度洗脱，收集50%~70%的甲醇洗脱物； ⑷所述50%~70%的甲醇洗脱物经减压干燥即得唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物组分。2.如权利要求1所述的高效富集唐古特虎耳草中二芳基庚烷类化合物的方法，其特征在于:所述步骤⑴中醇提条件是指料液比为Ikg:6~10L、温度为65°C ~85°C、提取次数为1~3次、每次提取时间为1~3 ho3.如权利要求1所述的高效富集唐古特虎耳草中二芳基庚烷类化合物的方法，其特征在于:所述步骤⑵和所述步骤⑷中的减压干燥条件均是指真空度为0.06-0.09 MPa，温度为55-65 cC04.如权利要求1所述的高效富集唐古特虎耳草中二芳基庚烷类化合物的方法，其特征在于:所述步骤⑵中耐醇膜的分子量为8000~12000。5.如权利要求1所述的高效富集唐古特虎耳草中二芳基庚烷类化合物的方法，其特征在于:所述步骤⑶中的反相固相萃取柱是指耐纯水的C3或耐纯水的C18固相萃取柱。
【专利摘要】本发明涉及一种高效富集唐古特虎耳草中二芳基庚烷类化合物的方法，该方法包括以下步骤：⑴提取：将唐古特虎耳草药材粉碎后进行醇提，经过滤得到唐古特虎耳草提取液；⑵耐醇膜除杂：将所述唐古特虎耳草提取液经耐醇膜处理后，收集透过液，该透过液经减压干燥即得唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物粗样；⑶反相固相萃取柱富集：在所述唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物粗样中加水溶解，然后经反相固相萃取柱分离，并进行台阶梯度洗脱，收集50%~70%的甲醇洗脱物；⑷所述50%~70%的甲醇洗脱物经减压干燥即得唐古特虎耳草二芳基庚烷类化合物组分。本发明工艺简单、易规模化实施、质量稳定可控。
【IPC分类】C07H15/18, A61K31/7032, C07H1/08, A61K31/12, A61K36/185, C07C45/79, C07C49/245
【公开号】CN105153250
【申请号】CN201510583931
【发明人】党军, 张莉, 邵赟, 陶燕铎, 王启兰, 梅丽娟, 苑祥
【申请人】中国科学院西北高原生物研究所
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年9月15日