裸藻属微藻类、多糖类的制造方法、及有机化合物的制造方法
【专利说明】裸藻属微藻类、多糖类的制造方法、及有机化合物的制造方 法
[0001] 相关申请的相互参引
[0002] 本申请主张日本专利申请2013-067558号的优先权，该申请通过引用纳入本申请 说明书的记载中。
技术领域
[0003] 本发明设及裸藻属微藻类、多糖类的制造方法、及有机化合物的制造方法。
【背景技术】
[0004] 裸藻属微藻类也称为绿虫藻，其作为通过培养产生裸藻淀粉等多糖类等的微生物 是已知的。
[000引 W化作为裸藻属微藻类，已知有多种，例如，纤细裸藻(Euglenagracilis) NIES-48株是已知的（专利文献1)。
[0006] 运种裸藻属微藻类通过培养产生裸藻淀粉等多糖类，并在细胞内蓄积该多糖类。
[0007]另外，就运种裸藻属微藻类而言，根据培养条件，可将蓄积的多糖类向蜡醋转化， 或产生多糖类的同时也产生蛋白质。而且，所产生的在该微藻类的细胞内蓄积的多糖类、月旨 质、蛋白质等有机化合物可用于燃料和食品等用途。
[0008] 但是，运种裸藻属微藻类存在产生多糖类等有机化合物的性能不一定充分的问 题。
[0009] 现有技术文献：
[0010] 专利文献
[0011] 专利文献1:日本特开平07-070207号公报
【发明内容】
[001引发明要解决的课题
[0013] 本发明鉴于上述问题点等，课题在于提供一种至少能够充分地产生多糖类的裸藻 属微藻类。另外，本发明的课题在于提供一种能够充分地得到多糖类的多糖类的制造方法。 另外，本发明的课题在于提供一种能够充分地得到选自多糖类、脂质、维生素C、维生素E、 色素、及蛋白质所组成的群组中的至少1种有机化合物的有机化合物的制造方法。
[0014] 解决课题的方法
[0015] 为解决上述课题，本发明的裸藻属微藻类的特征在于，其为纤细裸藻巧imlena 紅曰(；1115化孤-1株（保藏号阳觀BP-11530)或其变异株，并且为至少具有多糖类的产生能 力的裸藻属微藻类。
[0016] 本发明的多糖类的制造方法的特征在于，通过培养作为纤细裸藻巧Uglena gracilis)E孤-1株(保藏号FERMBP-11530)或其变异株的至少具有多糖类的产生能力的 裸藻属微藻类作为多糖类产生生物来制造多糖类。
[0017]作为本发明的多糖类的制造方法的一个方案，可W采用在所述培养中使用的培养 液含有15-30g/L葡萄糖的方案。
[0018]另外，作为本发明的多糖类的制造方法的其他方案，可W采用在所述培养中使用 的培养液含有酵母分解物的方案。
[0019]另外，作为本发明的多糖类的制造方法的其他方案，可W采用在所述培养中使用 的培养液具有Ara培养基的组成的方案。
[0020] 另外，作为本发明的多糖类的制造方法的其他方案，可W采用所述多糖类为裸藻 淀粉的方案。
[0021] 本发明的有机化合物的制造方法的特征在于，通过培养作为纤细裸藻巧imlena 曲acilis)E0D-l株(保藏号FERMBP-11530)或其变异株的至少具有多糖类的产生能力的 裸藻属微藻类，制造选自多糖类、脂质、维生素C、维生素E、色素、及蛋白质所组成的群组中 的至少1种有机化合物。
【附图说明】
[002引 图1是比较纤细裸藻巧Uglena四'aciIis)的18SrRNA基因碱基序列的表。
[0023] 图2是表示用18SrRNA基因作成的系统树的图。
[0024] 图3A是表示RATO解析的带型的照片。
[00巧]图3B是表示RAro解析的带型的照片。
[0026] 图3C是表示RAro解析的带型的照片。
[0027]图4是表示在异养培养中的微藻类的葡萄糖转化率及微藻类的干燥重量的图表。
[0028] 图5是表示在光能异养培养中微藻类的培养时间和微藻类的干燥重量的图表。
[0029] 图6是表示在抑条件不同的各培养基中光能异养培养时的微藻类的培养时间和 微藻类的干燥重量的图表。
[0030] 图7是表示在抑条件不同的各培养基中光能异养培养时的微藻类的培养时间和 微藻类的干燥重量的图表。
[0031]图8A是表示在光能异养培养中从好氧条件向厌氧条件转换时的微藻类的培养时 间和单位细胞的裸藻淀粉含有率的图表。
[0032]图8B是表示在光能异养培养中从好氧条件向厌氧条件转换时的微藻类的培养时 间和单位培养液的裸藻淀粉量的图表。
[0033]图9A是表示在光能异养培养中从好氧条件向厌氧条件转换时的微藻类的培养时 间和单位细胞的脂质含有率的图表。
[0034]图9B是表示在光能异养培养中从好氧条件向厌氧条件转换时的微藻类的培养时 间和单位培养液的脂质量的图表。
【具体实施方式】
[0035]W下，对于本发明的裸藻属微藻类的一实施方案详细地进行说明。
[0036] 本实施方案的裸藻属微藻类为纤细裸藻(Eluglena曲acilis)E孤-1株(保藏号 FERMBP-11530)或其变异株，其为至少具有多糖类的产生能力的裸藻属微藻类（W下，也 简称为裸藻属微藻类或微藻类）。
[0037] 本实施方案的裸藻属微藻类起到至少能够充分地产生多糖类的效果。
[0038] 所述裸藻属微藻类为在水中浮游并生存的生物。另外，所述裸藻属微藻类为单细 胞性，其是因株不同而稍微不同的大小大概为10ym到50ym的微小的藻类。
[0039]W下示出所述裸藻属微藻类的性质的详细情况。
[0040] (裸藻属微藻类的形态性质）
[0041] 所述裸藻属微藻类的营养型细胞具有鞭毛，并活跃地运动。另外，细胞的形状大致 为纺键形。在细胞内，除了核、叶绿体、线粒体等一般的细胞器W外，还有称为眼点的红色的 细胞器。
[0042](裸藻属微藻类的生理学性质或生物化学性质）
[0043] (1)培养基：在主要由淡水构成的培养液中能够增殖（即使利用来自废水的有机 物也可增殖）。
[0044] (2)光合作用能力：能够通过光合作用进行光能自养增殖。
[0045] (3)含有色素：包括叶绿素a、叶绿素b、及其他类胡萝h素类。
[004引 （4)同化蓄积物质：蛋白质、脂质（蜡醋）、多糖类（裸藻淀粉）。
[0047] 妨增殖溫度范围：15°C-35°C(最适溫度25°C)。
[0048] (6)合适增殖抑范围：P册.5-5. 5 (但是，即使在左侧所述抑范围外也可增殖）
[0049](裸藻属微藻类的基因信息）
[0050] 所述裸藻属微藻类具有W序列编号1表示的18SrDNA(18SrRNA基因）。
[0051] 此外，18SrRNA基因的解析可通过作为微藻类的鉴定方法而常用的方法来进行。 具体地，18SrRNA基因的解析可通过例如实施例中记载的方法来进行。
[0052] 就所述裸藻属微藻类的18SrRNA基因中的碱基序列而言，可W用BLAST同源性检 索，与从GenBank得到的已知的裸藻属微藻类的18SrRNA基因的碱基序列进行比较。对于 与已知的裸藻属微藻类的序列相同性的一致程度比较后的结果，在后面的实施例中示出。
[0053] 此外，作为数据库，也可W使用EMBLWBJ等。
[0054] 进一步地，可W使用分子系统树作成软件MegaS程序（Tamura等.2011，M〇1.Biol. Evol. 28 :2731-2739)，根据最大似然法作成分子系统树。关于作成的分子系统树，在后面的 实施例中示出详细内容。
[0055] 通过如上所述方法，由后述实施例的结果，所述裸藻属微藻类被鉴定为Euglena gracilis,并命名为纤绍]裸藻(Euglen曰Rr曰cilis化孤-1株。
[0056] 所述纤细裸藻化Uglena gracilis)EOD-I株在2013年6月28日（原保藏日2013 年3月25日）在独立行政法人制品评价技术基盘机构专利生物保藏中屯、（WTE-IP0D(邮政 编号292-0818日本千叶县木更津市上总镶足2-5-8120号室）在布达佩斯条约的规定下， W保藏号阳RMBP-11530进行国际保藏。
[0057] 如上所述，所述裸藻属微藻类因为在细胞内具有叶绿体，所W通过光合作用可增 殖。目P，所述裸藻属微藻类为光能自养生物。
[0058]另外，所述裸藻属微藻类利用葡萄糖等有机营养素作为营养素也可增殖。目P，所述 裸藻属微藻类也是异养生物。
[0059] 运样，所述裸藻属微藻类仅通过光能自养可增殖，仅通过异养可增殖，同时进行光 能自养及异养也可增殖。
[0060] 就所述变异株而言，例如，通过实施一般的突然变异处理、或由继代培养引起适应 或者自然变异来制作。
[0061] 可用一般的变异原进行所述突然变异处理。作为变异原，例如，可列举具有变异原 作用的药剂、紫外线等。作为具有变异原作用的药剂，例如，可列举链霉素、氧氣沙星、甲横 酸乙醋、N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基脈、漠尿喀晚等核巧酸碱基类似物、或日丫晚类等。
[0062] 接着，对于本发明的多糖类的制造方法的一实施方案进行说明。
[0063] 本实施方案的多糖类的制造方法是通过培养所述裸藻属微藻类至少制造多糖类 的方法。
[0064] 本实施方案的多糖类的制造方法起到能够充分地得到多糖类的效果。
[0065] 详细地，就本实施方案的多糖类的制造方法而言，具有在至少含有水的培养液中 培养所述裸藻属微藻类的培养步骤。
[0066] 作为所述培养液，优选含有促进微藻类增殖的营养素和水的培养液。
[0067]作为所述营养素，可列举无机营养素或有机营养素等。
[0068] 作为所述无机营养素，例如，可列举含氮的无机化合物、含憐的无机化合物等。另 夕F，作为所述无机营养素，例如，可列举钟离子、铁离子、儘离子、钻离子、锋离子、铜离子、钢 离子、儀离子等。
[0069] 所述无机营养素的培养液的浓度通常为一般所知的程度的浓度。
[0070] 作为所述有机营养素，例如，可列举葡萄糖（glucose)、果糖（化UCtose)等单糖 类；维生素B6、B12等维生素类；精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸等氨基酸；苹果 酸、巧樣酸、班巧酸、乙酸等有机酸；乙醇等醇类等。
[007。 作为所述培养液的组成，例如，可采用后述的"AF-6培养基"的组成、 "化amer-Myers培养基"的组成、"化tner培养基"的组成、或者与运些组成类似的组成等。
[0072] 在所述培养步骤中，优选培养液含有15-30g/