一种用废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的方法
【专利摘要】本发明公开了一种用废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的方法，属水产养殖领域。纤细角毛藻传统培养方式耗电较高，受季节和水温限制且易受病毒和细菌污染。与传统技术相比，本发明优势表现在：纤细角毛藻培养液营养成分更全面、均衡，纤细角毛藻生长快，产量高，不受季节限制；采用废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻，坚固耐用，洗刷方便，重复使用，操作方便，废物利用，节约资金。
【专利说明】
_种用废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的方法
技术领域
[0001]本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种用废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的方法。
【背景技术】
[0002]纤细角毛藻隶属硅藻门，中心纲，盒形藻目，角毛藻科，角毛藻属，是一种小型海洋浮游硅藻，细胞小，壁薄，多数单个生活。邻近细胞的角毛相连，使群体成链状。角毛长度，常几倍于细胞体本身。链端角毛的形态，常和其它角毛不同，短而粗。细胞行多次间接分裂后，链内出现相异的角毛，于是就分成两条链。色素体两个或多个，有的种类角毛里也有色素体，是分种特征之一。生殖方法有:形成复大孢子、体眠孢子和有性繁殖。在10-39°C环境下均能生长繁殖，最适温度为25-35°C，是一种沿岸性半咸水种类。与其它常用的单胞藻相比，它繁殖快又更耐高温。多不饱和脂肪酸的含量较高，在较好培养条件下，其二十碳五烯酸(EPA)占总脂肪酸含量的10.20%。在海洋浮游生物中占重要位置，是扇贝、牡蛎、贻贝、海胆、海参、对虾、梭子蟹等幼体的良好饵料。
[0003]过去，杨彦豪等发明了一种牟氏角毛藻的培养基配方及全人工快速培养方法(申请号CN201310420414.5)。培养基配方包括尿素0.1-0.38/1，碳酸氢钠0.05-0.18/1，硅酸钠水结晶0.1-0.5g/L，磷酸二氢钾0.01-0.02g/L，EDTA3_5g/L，VBi l_5mg/L，VBi2 I.0-3yg/L，配方溶剂为海水;培养方法为对培养罐、海水消毒后，以海水为溶剂按照以上配方配培养基，将接藻种接入装有培养基的培养罐中，密封后培养，培养时进行三基色灯光光照并充入经过孔径小于0.Ιμπι空气滤芯过滤的空气，培养3-5天后采收。该发明培养基配方营养均衡、成本低，角毛藻生长快速，操作过程简单，但耗电较高，受季节和水温限制且易受病毒和细菌污染。
[0004]为了克服目前技术的不足，本发明公开了一种用废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的方法，与传统技术相比，本发明优势表现在:纤细角毛藻培养液营养成分更全面、均衡，纤细角毛藻生长快，产量高，不受季节限制；采用废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻，坚固耐用，洗刷方便，重复使用，操作方便，废物利用，节约资金。
【发明内容】
[0005]为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种用于废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的培养液，纤细角毛藻培养液由以下重量份数的配料组成:硝酸钠0.02-0.05份，氯化铵0.01-0.03份，氯化钠0.03-0.06份，磷酸二铵0.04-0.08份，过磷酸钙0.1-0.3份，异丁叉环二脲0.002-0.004份，硅酸钠0.2-0.4份，硫酸亚铁0.00005-0.00008份，马尿0.5-0.8份，硫酸镁0.006-0.008份，氯化锰0.002-0.004份，氯化钴0.07-0.09份，尼古丁酸0.05-0.08份，对氨安息香酸0.02-0.04份，肌醇0.005-0.007份，叶酸0.0004-0.0008份，维生素Bi 0.0003-0.0007份，维生素B12 0.0001-0.0003份，吲哚乙酸0.0003-0.0006份，煮沸冷却后的磁化海水1000份。
[0006]所述的一种用于废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的培养液培养纤细角毛藻的方法:取一旧的但完好无损的绿色玻璃啤酒瓶，洗刷干净，放在烘箱中80°C烘烤12小时，取出干后的绿色玻璃啤酒瓶，加入步骤I所述纤细角毛藻培养液350毫升，轻轻摇匀，后取指数生长期的纯净、无污染的纤细角毛藻藻种接种，接种密度6万个细胞/毫升，后轻轻摇匀，用消毒棉塞塞住瓶口，放进光照培养箱培养，共培养10天，培养的前5天，光照培养箱设置温度23±1°C，光强3500-40001ux，光照周期为L12+D12，S卩12小时光照，12小时黑暗，循环往复，培养的后5天光照培养箱设置温度26±1°C，光强6000-70001ux，光照周期为L18+D6，S卩18小时光照，6小时黑暗，循环往复，培养期间，每天手动摇瓶6次，每次摇动30秒，到第6天，添加步骤I所述的营养液20毫升，以补充消耗掉的营养盐，到第7天，添加蒸馏水25毫升，以补充挥发掉的水分，到第10天，藻液细胞密度可达到250 ± 30万个细胞/毫升，停止培养，将藻液倒出，把啤酒瓶洗刷干净，加入步骤I所述新鲜培养液，进入下一轮培养。
[0007]所述的一种用于废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的培养液培养纤细角毛藻的方法:取一旧的但完好无损的绿色玻璃啤酒瓶，洗刷干净，放在烘箱中80°C烘烤12小时，取出烘干后的绿色玻璃啤酒瓶;所述烘干后的绿色玻璃啤酒瓶再采用消毒剂消毒20分钟，所述消毒剂为中草药复合消毒剂;所述中草药复合消毒剂组成成分(重量份数比):红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5_8份，蒲公英2_6份，桑黄1_3份；
[0008]加入步骤I所述纤细角毛藻培养液350毫升，轻轻摇匀，后取指数生长期的纯净、无污染的纤细角毛藻藻种接种，接种密度6万个细胞/毫升，后轻轻摇匀，用消毒棉塞塞住瓶口，放进光照培养箱培养，共培养10天，培养的前5天，光照培养箱设置温度23 ± 10C ,光强3500-40001ux，光照周期为L12+D12，即12小时光照，12小时黑暗，循环往复，培养的后5天光照培养箱设置温度26 ± I °C，光强6000-70001UX，光照周期为L18+D6，即18小时光照，6小时黑暗，循环往复，培养期间，每天手动摇瓶6次，每次摇动30秒，到第6天，添加步骤I所述的营养液20毫升，以补充消耗掉的营养盐，到第7天，添加蒸馏水25毫升，以补充挥发掉的水分，到第10天，藻液细胞密度可达到250 ± 30万个细胞/毫升，停止培养，将藻液倒出，把啤酒瓶洗刷干净，加入步骤I所述新鲜培养液，进入下一轮培养，即完成本发明的培养方法。
[0009]所述的一种用于废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的培养液培养纤细角毛藻的方法:取一旧的但完好无损的绿色玻璃啤酒瓶，洗刷干净，放在烘箱中80°C烘烤12小时，取出烘干后的绿色玻璃啤酒瓶;所述烘干后的绿色玻璃啤酒瓶再采用消毒剂消毒20分钟，所述消毒剂为中西药复合消毒剂;所述中西药复合消毒剂组成成分(重量份数比):红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5_8份，蒲公英2_6份，桑黄1_3份，十二烷基苯磺酸钠0.5-1份，乙醇0.5-1份，苯甲酸钠0.5-1份，硫酸铝0.5-1份，明矾0.5-1份；
[0010]加入步骤I所述纤细角毛藻培养液350毫升，轻轻摇匀，后取指数生长期的纯净、无污染的纤细角毛藻藻种接种，接种密度6万个细胞/毫升，后轻轻摇匀，用消毒棉塞塞住瓶口，放进光照培养箱培养，共培养10天，培养的前5天，光照培养箱设置温度23 ± 10C ,光强3500-40001ux，光照周期为L12+D12，即12小时光照，12小时黑暗，循环往复，培养的后5天光照培养箱设置温度26 ± I °C，光强6000-70001UX，光照周期为L18+D6，即18小时光照，6小时黑暗，循环往复，培养期间，每天手动摇瓶6次，每次摇动30秒，到第6天，添加步骤I所述的营养液20毫升，以补充消耗掉的营养盐，到第7天，添加蒸馏水25毫升，以补充挥发掉的水分，到第10天，藻液细胞密度可达到250 ± 30万个细胞/毫升，停止培养，将藻液倒出，把啤酒瓶洗刷干净，加入步骤I所述新鲜培养液，进入下一轮培养，即完成本发明的培养方法。
【附图说明】
[0011]图1用废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的方法图；
[0012]其中附图标记为:I棉塞，2藻液。
【具体实施方式】
[0013]步用于废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的培养液，纤细角毛藻培养液由以下重量份数的配料组成:硝酸钠0.02-0.05份，氯化铵0.01-0.03份，氯化钠0.03-0.06份，磷酸二铵0.04-0.08份，过磷酸钙0.1-0.3份，异丁叉环二脲0.002-0.004份，硅酸钠0.2-0.4份，硫酸亚铁0.00005-0.00008份，马尿0.5-0.8份，硫酸镁0.006-0.008份，氯化锰0.002-0.004份，氯化钴0.07-0.09份，尼古丁酸0.05-0.08份，对氨安息香酸0.02-0.04份，肌醇0.005-0.007份，叶酸0.0004-0.0008份，维生素Bi 0.0003-0.0007份，维生素B12 0.0001-0.0003份，吲哚乙酸0.0003-0.0006份，煮沸冷却后的磁化海水1000份。
[0014]所述的一种用于废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的培养液培养纤细角毛藻的方法:取一旧的但完好无损的绿色玻璃啤酒瓶，洗刷干净，放在烘箱中80°C烘烤12小时，取出干后的绿色玻璃啤酒瓶，加入步骤I所述纤细角毛藻培养液350毫升，轻轻摇匀，后取指数生长期的纯净、无污染的纤细角毛藻藻种接种，接种密度6万个细胞/毫升，后轻轻摇匀，用消毒棉塞塞住瓶口，放进光照培养箱培养，共培养10天，培养的前5天，光照培养箱设置温度23±1°C，光强3500-40001ux，光照周期为L12+D12，S卩12小时光照，12小时黑暗，循环往复，培养的后5天光照培养箱设置温度26±1°C，光强6000-70001ux，光照周期为L18+D6，S卩18小时光照，6小时黑暗，循环往复，培养期间，每天手动摇瓶6次，每次摇动30秒，到第6天，添加步骤I所述的营养液20毫升，以补充消耗掉的营养盐，到第7天，添加蒸馏水25毫升，以补充挥发掉的水分，到第10天，藻液细胞密度可达到250 ± 30万个细胞/毫升，停止培养，将藻液倒出，把啤酒瓶洗刷干净，加入步骤I所述新鲜培养液，进入下一轮培养。
[0015]所述的一种用于废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的培养液培养纤细角毛藻的方法:取一旧的但完好无损的绿色玻璃啤酒瓶，洗刷干净，放在烘箱中80°C烘烤12小时，取出烘干后的绿色玻璃啤酒瓶;所述烘干后的绿色玻璃啤酒瓶再采用消毒剂消毒20分钟，所述消毒剂为中草药复合消毒剂;所述中草药复合消毒剂组成成分(重量份数比):红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5_8份，蒲公英2_6份，桑黄1_3份；
[0016]加入步骤I所述纤细角毛藻培养液350毫升，轻轻摇匀，后取指数生长期的纯净、无污染的纤细角毛藻藻种接种，接种密度6万个细胞/毫升，后轻轻摇匀，用消毒棉塞塞住瓶口，放进光照培养箱培养，共培养10天，培养的前5天，光照培养箱设置温度23 ± 10C ,光强3500-40001ux，光照周期为L12+D12，即12小时光照，12小时黑暗，循环往复，培养的后5天光照培养箱设置温度26 ± I °C，光强6000-70001UX，光照周期为L18+D6，即18小时光照，6小时黑暗，循环往复，培养期间，每天手动摇瓶6次，每次摇动30秒，到第6天，添加步骤I所述的营养液20毫升，以补充消耗掉的营养盐，到第7天，添加蒸馏水25毫升，以补充挥发掉的水分，到第10天，藻液细胞密度可达到250 ± 30万个细胞/毫升，停止培养，将藻液倒出，把啤酒瓶洗刷干净，加入步骤I所述新鲜培养液，进入下一轮培养，即完成本发明的培养方法。
[0017]所述的一种用于废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的培养液培养纤细角毛藻的方法:取一旧的但完好无损的绿色玻璃啤酒瓶，洗刷干净，放在烘箱中80°C烘烤12小时，取出烘干后的绿色玻璃啤酒瓶;所述烘干后的绿色玻璃啤酒瓶再采用消毒剂消毒20分钟，所述消毒剂为中西药复合消毒剂;所述中西药复合消毒剂组成成分(重量份数比):红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5_8份，蒲公英2_6份，桑黄1_3份，十二烷基苯磺酸钠0.5-1份，乙醇0.5-1份，苯甲酸钠0.5-1份，硫酸铝0.5-1份，明矾0.5-1份；
[0018]加入步骤I所述纤细角毛藻培养液350毫升，轻轻摇匀，后取指数生长期的纯净、无污染的纤细角毛藻藻种接种，接种密度6万个细胞/毫升，后轻轻摇匀，用消毒棉塞塞住瓶口，放进光照培养箱培养，共培养10天，培养的前5天，光照培养箱设置温度23 ± 10C ,光强3500-40001ux，光照周期为L12+D12，即12小时光照，12小时黑暗，循环往复，培养的后5天光照培养箱设置温度26 ± I °C，光强6000-70001UX，光照周期为L18+D6，即18小时光照，6小时黑暗，循环往复，培养期间，每天手动摇瓶6次，每次摇动30秒，到第6天，添加步骤I所述的营养液20毫升，以补充消耗掉的营养盐，到第7天，添加蒸馏水25毫升，以补充挥发掉的水分，到第10天，藻液细胞密度可达到250 ± 30万个细胞/毫升，停止培养，将藻液倒出，把啤酒瓶洗刷干净，加入步骤I所述新鲜培养液，进入下一轮培养，即完成本发明的培养方法。
[0019]步骤I中所述马尿制备方法取马尿1000毫升，装入三角烧瓶煮沸5分钟后，冷却备用。
[0020]步骤I中所述硝酸钠，氯化铵，氯化钠，磷酸二铵，过磷酸钙，异丁叉环二脲，硅酸钠，硫酸亚铁，马尿，硫酸镁，氯化锰，氯化钴，尼古丁酸，对氨安息香酸，肌醇，叶酸，维生素B1，维生素B12，吲哚乙酸化学药品纯度均需化学纯级别。
[0021]步骤I中所述磁化水制作方法普通海水经脱脂棉过滤，煮沸后，冷却，流经磁化水器后，即为磁化海水。磁化水器磁感应强度为0.32T，流量为2.5t/h，流速为0.3m/s。
[0022]步骤2中啤酒瓶洗刷时要撕掉瓶外的标签并洗刷干净，以免阻挡光照，影响藻类进行光合作用。
[0023]最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。
【主权项】
1.一种用于废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的培养液，其特征在于，纤细角毛藻培养液由以下重量份数的配料组成:硝酸钠0.02-0.05份，氯化铵0.01-0.03份，氯化钠0.03-0.06份，磷酸二铵0.04-0.08份，过磷酸钙0.1-0.3份，异丁叉环二脲0.002-0.004份，硅酸钠0.2-0.4份，硫酸亚铁0.00005-0.00008份，马尿0.5-0.8份，硫酸镁0.006-0.008份，氯化锰0.002-0.004份，氯化钴0.07-0.09份，尼古丁酸0.05-0.08份，对氨安息香酸0.02-0.04份，肌醇0.005-0.007份，叶酸0.0004-0.0008份，维生素B1.0003-0.0007份，维生素B120.0001-0.0003份，吲哚乙酸0.0003-0.0006份，煮沸冷却后的磁化海水1000份。2.根据权利要求1所述的一种用于废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的培养液培养纤细角毛藻的方法，其特征在于:取一旧的但完好无损的绿色玻璃啤酒瓶，洗刷干净，放在烘箱中80°C烘烤12小时，取出干后的绿色玻璃啤酒瓶，加入步骤I所述纤细角毛藻培养液350毫升，轻轻摇匀，后取指数生长期的纯净、无污染的纤细角毛藻藻种接种，接种密度6万个细胞/毫升，后轻轻摇匀，用消毒棉塞塞住瓶口，放进光照培养箱培养，共培养10天，培养的前5天，光照培养箱设置温度23± I (°C )，光强3500-4000(lux)，光照周期为L12+D12，即12小时光照，12小时黑暗，循环往复，培养的后5天光照培养箱设置温度26±1(°0，光强6000-700011^，光照周期为L18+D6，S卩18小时光照，6小时黑暗，循环往复，培养期间，每天手动摇瓶6次，每次摇动30秒，到第6天，添加步骤I所述的营养液20毫升，以补充消耗掉的营养盐，到第7天，添加蒸馏水25毫升，以补充挥发掉的水分，到第10天，藻液细胞密度可达到250±30万个细胞/毫升，停止培养，将藻液倒出，把啤酒瓶洗刷干净，加入步骤I所述新鲜培养液，进入下一轮培养。3.根据权利要求1所述的一种用于废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的培养液培养纤细角毛藻的方法，其特征在于:取一旧的但完好无损的绿色玻璃啤酒瓶，洗刷干净，放在烘箱中80°C烘烤12小时，取出烘干后的绿色玻璃啤酒瓶;所述烘干后的绿色玻璃啤酒瓶再采用消毒剂消毒20分钟，所述消毒剂为中草药复合消毒剂;所述中草药复合消毒剂组成成分(重量份数比):红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁 5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5_8份，蒲公英2-6份，桑黄1-3份； 加入步骤I所述纤细角毛藻培养液350毫升，轻轻摇匀，后取指数生长期的纯净、无污染的纤细角毛藻藻种接种，接种密度6万个细胞/毫升，后轻轻摇匀，用消毒棉塞塞住瓶口，放进光照培养箱培养，共培养10天，培养的前5天，光照培养箱设置温度23 ± 10C，光强3500-40001ux，光照周期为L12+D12，即12小时光照，12小时黑暗，循环往复，培养的后5天光照培养箱设置温度26 土 I °C，光强6000-70001ux，光照周期为L18+D6，即18小时光照，6小时黑暗，循环往复，培养期间，每天手动摇瓶6次，每次摇动30秒，到第6天，添加步骤I所述的营养液20毫升，以补充消耗掉的营养盐，到第7天，添加蒸馏水25毫升，以补充挥发掉的水分，到第10天，藻液细胞密度可达到250 ± 30万个细胞/毫升，停止培养，将藻液倒出，把啤酒瓶洗刷干净，加入步骤I所述新鲜培养液，进入下一轮培养，即完成本发明的培养方法。4.根据权利要求1所述的一种用于废旧啤酒瓶培养纤细角毛藻的培养液培养纤细角毛藻的方法，其特征在于:取一旧的但完好无损的绿色玻璃啤酒瓶，洗刷干净，放在烘箱中80°C烘烤12小时，取出烘干后的绿色玻璃啤酒瓶;所述烘干后的绿色玻璃啤酒瓶再采用消毒剂消毒20分钟，所述消毒剂为中西药复合消毒剂;所述中西药复合消毒剂组成成分(重量份数比):红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁 5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5_8份，蒲公英2-6份，桑黄1-3份，十二烷基苯磺酸钠0.5-1份，乙醇0.5-1份，苯甲酸钠0.5_1份，硫酸铝0.5-1份，明矾0.5-1份； 加入步骤I所述纤细角毛藻培养液350毫升，轻轻摇匀，后取指数生长期的纯净、无污染的纤细角毛藻藻种接种，接种密度6万个细胞/毫升，后轻轻摇匀，用消毒棉塞塞住瓶口，放进光照培养箱培养，共培养10天，培养的前5天，光照培养箱设置温度23 ± 10C，光强3500-40001ux，光照周期为L12+D12，即12小时光照，12小时黑暗，循环往复，培养的后5天光照培养箱设置温度26 土 I °C，光强6000-70001ux，光照周期为L18+D6，即18小时光照，6小时黑暗，循环往复，培养期间，每天手动摇瓶6次，每次摇动30秒，到第6天，添加步骤I所述的营养液20毫升，以补充消耗掉的营养盐，到第7天，添加蒸馏水25毫升，以补充挥发掉的水分，到第10天，藻液细胞密度可达到250 ± 30万个细胞/毫升，停止培养，将藻液倒出，把啤酒瓶洗刷干净，加入步骤I所述新鲜培养液，进入下一轮培养，即完成本发明的培养方法。
【文档编号】C12R1/89GK105936877SQ201610123809
【公开日】2016年9月14日
【申请日】2016年3月7日
【发明人】王培磊, 徐树建, 刘金民, 刘笑天, 陈玉倩
【申请人】临沂大学