以鱼下脚料浸出液培养丹麦角毛藻的培养基及培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种鱼下脚料在梅花参育苗中的应用方法，属水产养殖领域。丹麦角毛藻是海洋梅花参幼体最重要、最喜食的饵料，该藻的质量和数量直接决定着梅花参育苗的成败。丹麦角毛藻培养传统上是采用湛江水产学院配方且采用开放水泥池培养，生长慢，易污染，成本高，效益低，操作费力，工作量大，现在我采用白塑料桶充气培养并在培养基中添加了鱼下脚料浸出液，碳酸氢铵，磷酸二氢钾，谷氨酸钠，尿素，920植物生长刺激素，维生素S-3溶液，M-F微量元素溶液，葡萄糖酸亚铁，土壤浸出液，海泥浸出液等营养成分，不仅丹麦角毛藻生长速度和产量大幅提高，而且操作方便，成本低，效益高，产量提高240％。
【专利说明】以鱼下脚料浸出液培养丹麦角毛藻的培养基及培养方法
【技术领域】
[0001]本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种鱼下脚料在梅花参育苗中的应用方法。
【背景技术】
[0002]在鱼品加工过程中，会产生大量的下脚料,包括鱼头、鱼皮、鱼鳍、鱼尾、鱼骨及其残留鱼肉，重量约占原料鱼40-55%。如果不进行有效处理，不仅会污染环境，而且会浪费大量营养物质。例如鱿鱼内脏含有20% -30%粗脂肪，对其脂肪酸组成的气相色谱分析结果表明:不饱和脂肪酸含量为86%，n-3系列脂肪酸含量为37% (其中EPA占12%，DHA占24% );鲢鱼鱼头、鱼皮、鱼骨刺混合物中，蛋白质含量达14%，油脂为9.22%，鳗骨、鳗头等废弃物中含有丰富的蛋白质、磷脂质、软骨素、维生素等。充分利用这些下脚料可提高鱼类加工附加值，获得良好经济和社会效益。
[0003]目前国内鱼品加工下脚料利用途径主要有:(I)加工饲料鱼粉；(2)将鱼头、鱼骨加工成鱼骨糊、鱼骨粉、鱼香酥；(3)从鱼内脏中提取鱼油，提炼EPA、DHA制品；(4)从鱼鳞提取鱼鳞胶；(5)鱼皮制革；(6)将鱼鳔加工成鱼肚(鱼鳔经清洗、浸洗、干燥而成)。
[0004]随着食品科技尤其是水产加工业发展，人们对鱼类加工的附加值提出了更高要求，鱼品加工废弃物的开发利用越来越重要。尽管近年来对鱼下脚料综合利用研究越来越多且取得了一定进展，但整体应用水平并未显著提高，存在的问题主要有:(1) 一些研究成果还或多或少存在缺陷，例如鱼腥味的残留，某些营养成分的损失等。例如，利用鱼下脚料制得的酸贮液体鱼蛋白作为饲料添加剂用于肉鸡、蛋鸡、仔猪、肉猪及鱼饲料效果较好，但该产品水分较高，为80%，贮藏、运输需较大空间；产品的矿物质、维生素等营养成分组成有待进一步研究；鱼腥味来源三甲胺并未显著降低，产品仍具有一定鱼腥味。(2)大多数研究只是针对某一种鱼，鱼品种不同，营养成分也不同，加工工艺自然就有差异，某一种鱼的加工工艺不一定适合另一种鱼；确定每一种鱼的最佳工艺条件以及降低生产成本、提高附加值仍需要大量的研究。(3)传统处理和利用鱼下脚料方法或多或少存在着技术不成熟、经济效益低、操作麻烦、工艺流程长、基建投资大等问题。
[0005]为了解决鱼下脚料传统利用方法的缺点，本发明公开了一种鱼下脚料在梅花参育苗中的应用方法。梅花参是海南省特有海珍，三亚“三绝”之一，主要产在南海诸岛海域。海参为“海产八珍”之首，尤以梅花参为最珍贵。海参种类多，全世界约有1100种，其中以梅花参个体最大，一般体长60—70厘米，宽10厘米，高8厘米，最大体长可达90—120厘米，故名“海参之王”。丹麦角毛藻是梅花参幼体最重要、最喜食的饵料，该藻的质量和数量直接决定着梅花参育苗的成败。丹麦角毛藻培养传统上是采用湛江水产学院配方(硝酸铵5-20晕克，磷酸二氢钾0.5-1晕克,朽1檬酸铁0.5-2晕克,消毒海水1000晕升)且米用开放水泥池培养，生长慢，易污染，成本高，效益低，操作费力，工作量大，现在我采用白塑料桶充气培养并在培养基中添加了鱼下脚料浸出液，碳酸氢铵，磷酸二氢钾，谷氨酸钠，尿素，920植物生长刺激素，维生素S-3溶液，M-F微量元素溶液，葡萄糖酸亚铁，土壤浸出液，海泥浸出液等营养成分，不仅丹麦角毛藻生长速度和产量大幅提高，而且操作灵活，洗刷方便，成本低，效益高，产量提高240%。
[0006]丹麦角毛藻是海洋浮游硅藻重要类群，也是我国沿海许多港湾的优势硅藻种群。该藻生长快，春夏季节常成为浮游植物优势类群，是许多海洋动物的饵料生物，其丰度对海洋生态系统及海洋环境有重要影响，具有重要研究和培养价值。丹麦角毛藻个体较小，壁薄，单个生活，在10_39°C环境下均能生长繁殖，最适温度为21-28°C，是一种沿岸性半咸水种类。与球等鞭金藻、湛江叉鞭金藻和扁藻相比，它繁殖快且耐高温，多不饱和脂肪酸含量较高，在良好培养条件下，其二十碳五烯酸(EPA)占总脂肪酸含量可达10.20%，是对虾、海参、文蛤、牡蛎、鲍鱼、魁钳、海胆等海珍品优质育苗饵料，特别在梅花参育苗中，丹麦角毛藻是梅花参最重要、最喜食的开口饵料，该藻的质量和数量直接决定着梅花参育苗的成败和参苗的体质强弱及成活率。
【发明内容】
[0007]为了解决鱼下脚料传统利用方法的缺点，本发明提供了一种以鱼下脚料浸出液为主要原料培养丹麦角毛藻的方法，配方如下:
[0008]鱼下脚料浸出液125毫升，碳酸氢铵2毫克，磷酸二氢钾3毫克，谷氨酸钠I毫克，苯甲酸钠0.4毫克，海洋酵母I毫克，尿素I毫克，牛粪浸出液I毫升，蛋白粉15毫克，牛磺酸10毫克，酵母锌5毫克，酪氨酸0.5毫克，羟丙基甲基纤维素3毫克，L-精氨酸2毫克，麦饭石粉4毫克，920植物生长刺激素8国际单位，维生素S-3溶液I毫升，M-F微量元素溶液I毫升，葡萄糖酸亚铁3毫克，蜂胶2毫克，罗汉果甜苷6毫克，硬脂酸镁8毫克，柠檬酸2毫克,土壤浸出液I毫升，海泥浸出液1.5毫升,臭氧消毒的纯净海水1000毫升。
[0009]一种利用鱼下脚料浸出液为主要原料养殖丹麦角毛藻方法，具体步骤如下:
[0010]培养容器为容积65升白塑料桶，市场有售，食品级高密度聚乙烯材料制成，无缝一体式结构，坚固耐用，抗冲击，有良好透光性，以利丹麦角毛藻进行光合作用。水桶顶部有一圆形盖子，上有旋丝，可旋转而密封，盖子打上3个孔，一个孔插入充气管，另一个孔插入排气管，充气管和排气管都是玻璃管，内径6毫米。还有一个孔穿入一根金属导线，导线末端接一个40w节能灯。将塑料桶洗刷干净，后用蒸馏水润洗3遍，装入所述的培养基40升，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的丹麦角毛藻接种，接种密度5X 14ceIl/mL ;盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，50厘米，顶端露出盖子12厘米，下端通过料管与散气石连接，用以充气(散气石的作用是形成很小的气泡，避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞)；另一根较短，15厘米，两端露出盖子即可，用以排气；两根玻璃管同样粗细；用干净的透明胶带将两根玻璃管固定；长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气:纯二氧化碳:臭氧:甲烷=92%: 6%: 1%: 1% ；连续充气，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；室外培养，太阳光照射，最佳温度24±2°C，最佳光照强度3000-9000LUX ;夜间打开节能灯进行照明。培养的前5天，水桶上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在2000-4000LUX，避免强烈阳光对细胞造成的光伤害；第6天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成；培养至第7天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养基5升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第10天，丹麦角毛藻密度增加至700 X 104cell/mL,停止培养，将藻液倒出，将白塑料桶洗刷干净后，加入消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养；
[0011]所述消毒液由以下重量比的物质组成:每100份85%乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料:土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份、辅料3-5份；消毒液制作方法:将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于60-70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小时,200筛絹过滤,将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3-5份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2: I: I ;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
[0012]优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10-20分钟。
[0013]优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5-10分钟。
[0014]优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5-6分钟。
[0015]优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2-3分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2-3分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
[0016]有益结果
[0017]丹麦角毛藻培养传统上是采用湛江水产学院配方(硝酸铵5-20毫克，磷酸二氢钾0.5-1晕克,朽1檬酸铁0.5-2晕克,消毒海水1000晕升)且米用开放水泥池培养,生长慢，易污染，成本高，效益低，操作费力，工作量大，现在我采用白塑料桶充气培养并在培养基中添加了鱼下脚料浸出液，碳酸氢铵，磷酸二氢钾，谷氨酸钠，苯甲酸钠，海洋酵母，尿素，牛粪浸出液，蛋白粉，牛磺酸，酵母锌，酪氨酸，羟丙基甲基纤维素，L-精氨酸，麦饭石粉，920植物生长刺激素，维生素S-3溶液，M-F微量元素溶液，葡萄糖酸亚铁，蜂胶，罗汉果甜苷，硬脂酸镁，柠檬酸，土壤浸出液，海泥浸出液等营养成分，不仅可以废物利用，变废为宝，而且可获得梅花参最喜食的丹麦角毛藻，一举多得，实在是巧妙之极，妙不可言。有机肥和无机肥混合使用，营养更加全面、均衡，操作方便，成本低，效益高，丹麦角毛藻生长速度和产量大幅提高，培养周期缩短，产量提高240%。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1为丹麦角毛藻形态结构图；
[0019]其中附图标记为:1角毛，2细胞壁，3细胞质；
[0020]图2为利用鱼下脚料养殖丹麦角毛藻方法图；
[0021]其中附图标记为:4排气管，5白塑料桶，6散气石，7藻液，8节能灯，9充气管。
【具体实施方式】
[0022]鱼下脚料浸出液制备方法:取鱼下脚料(包括鱼头、鱼皮、鱼鳍、鱼尾、鱼骨及其残留鱼肉、内脏、粪便、血液、粘液等)2千克，用绞肉机绞碎，加水5升，充分搅拌，用60目筛絹过滤，弃鱼骨等残渣，取清液，用离心机离心3分钟，转速5000转/分钟，弃残渣，取上清液，加热，煮沸20分钟，杀死其中细菌、病毒等微生物，冷却、静置、沉淀24小时，再取上清液即为鱼下脚料浸出液，装入磨口塞试剂瓶，贴上标签，置于4°C冰箱或冷库保存备用。
[0023]牛粪浸出液制备方法:取新鲜牛粪50公斤，加入麸皮3公斤，玉米面I公斤，自来水4升，充分搅拌，堆成圆锥状，自然发酵15天，后摊成薄层，阳光下暴晒3天，后取3公斤放入水桶中，加入10升蒸馏水，充分搅匀，静置，48小时后100目筛絹过滤，取滤液加热，煮沸45分钟，杀死其中的细菌、霉菌、病毒等，冷却，沉淀24小时，取上清液，即得牛粪浸出液，装入磨口塞试剂瓶，密封，置于4°C冰箱或冷库备用；
[0024]土壤浸出液制备方法:取树林中松散、富含有机质的上层土壤I公斤，加纯水1000毫升，煮沸60分钟，在暗处放置2天，过滤，滤液600毫升加纯水400毫升使用；
[0025]臭氧消毒海水方法:取海水，脱脂棉过滤，通入臭氧消毒；所用臭氧发生器产臭氧量为3500毫克/小时，每立方米海水充臭氧30分钟，充完后自然曝气90分钟，让水体中过多的臭氧挥发出来，即可用以养藻；
[0026]过氧乙酸消毒液制备方法和使用注意事项:市售过氧乙酸原液含量35% (以重量计)，无色液体，有强烈刺激性气味。使用时应用洁净自来水稀释成0.2%溶液，浸泡贮水桶内壁2小时。该品对眼睛、皮肤、粘膜和上呼吸道有强烈刺激作用，头痛、恶心且易燃，具爆炸性、强腐蚀性、强刺激性，可致人体灼伤，加热至100°C即猛烈分解，遇火或受热、受震都可起爆。与还原剂、促进剂、有机物、可燃物等接触会发生剧烈反应；不可直接用手接触，操作时应带胶皮手套、口罩和眼镜，对金属有腐蚀性，不可用于金属器械的消毒；原液长期放置可分解，注意保质期，应贮于塑料桶内凉暗处保存；
[0027]接种用的丹麦角毛藻预先进行提纯(本领域常规方法，只要可实现提纯即可，例如凯氏提取法)，以确保接种时藻种处于生长旺盛的指数生长期；
[0028]各种营养盐要按配方中提供的顺序加入，以免发生化学反应；
[0029]各种无机营养盐和维生素需预先配成母液且置于4°C冰箱冷藏保存备用，放置时间不要超过45天；
[0030]麦饭石粉是麦饭石粉制品，由麦饭石原矿经过筛选，粉碎，加工成面粉状，颗粒大小可以通过200目筛絹即可；
[0031]920植物生长刺激素为白色结晶粉末，不易溶解于水，可先用酒精充分溶解(一般每克用50毫升酒精或60度白酒溶解I小时以上)，再按所需浓度兑水稀释；
[0032]海泥抽取液制备方法:取比较肥沃又不於黑的海泥，以I份泥加2份淡水，充分搅拌均匀，静置1-2分钟，取上层泥浆于铝锅中，按每1000毫升泥浆加I克NaOH的量加入NaOH，煮沸25分钟。煮时需不断搅拌均匀，煮后静置24小时取上清液，密封，置于4°C冰箱或冷库备用；
[0033]M-F微量元素溶液配法:硼酸0.2克，氯化锰0.2克，三氧化钥0.2毫克，硫酸铜
0.02克，硫酸锌0.02克，氯化钴0.02克，溶解于1000毫升蒸馏水中，最后滴入一滴浓硫酸，摇匀即得；
[0034]维生素S-3溶液配法:硫胺素盐酸盐50毫克，尼古丁酸10毫克，泛酸钙10毫克，对氨基苯甲酸1.0克，维生素H 0.1克，肌醇0.5克，叶酸0.2微克，胸间氮苯0.3克，蒸馏水1000晕升；
[0035]所用化学药品纯度均需化学纯级别；
[0036]丹麦角毛藻投喂方法:水温为20-21 °C时，梅花参受精卵经43-48分钟进行第一次卵裂，经24-36小时发育到耳状幼虫，初耳幼虫体长450-600微米，中耳幼虫600-700微米，大耳幼虫800-1000微米；按培养幼虫的海水体积计算，初耳幼虫每毫升海水每天投喂丹麦角毛藻2万个细胞，分2次投喂；中耳幼虫每毫升海水每天投喂角毛藻3万个细胞，分3次投喂；大耳幼虫每毫升海水每天投喂角毛藻4万个细胞，分4次投喂。
[0037]实施例1
[0038]为了解决鱼下脚料传统利用方法的缺点，以鱼下脚料浸出液为主要原料培养丹麦角毛藻的方法，配方如下:
[0039]鱼下脚料浸出液125毫升，碳酸氢铵2毫克，磷酸二氢钾3毫克，谷氨酸钠I毫克，苯甲酸钠0.4毫克，海洋酵母I毫克，尿素I毫克，牛粪浸出液I毫升，蛋白粉15毫克，牛磺酸10毫克，酵母锌5毫克，酪氨酸0.5毫克，羟丙基甲基纤维素3毫克，L-精氨酸2毫克，麦饭石粉4毫克，920植物生长刺激素8国际单位，维生素S-3溶液I毫升，M-F微量元素溶液I毫升，葡萄糖酸亚铁3毫克，蜂胶2毫克，罗汉果甜苷6毫克，硬脂酸镁8毫克，柠檬酸2毫克,土壤浸出液I毫升，海泥浸出液1.5毫升,臭氧消毒的纯净海水1000毫升。
[0040]一种利用鱼下脚料浸出液为主要原料养殖丹麦角毛藻方法，具体步骤如下:
[0041]培养容器为容积65升白塑料桶，市场有售，食品级高密度聚乙烯材料制成，无缝一体式结构，坚固耐用，抗冲击，有良好透光性，以利丹麦角毛藻进行光合作用。水桶顶部有一圆形盖子，上有旋丝，可旋转而密封，盖子打上3个孔，一个孔插入充气管，另一个孔插入排气管，充气管和排气管都是玻璃管，内径6毫米。还有一个孔穿入一根金属导线，导线末端接一个40w节能灯。将塑料桶洗刷干净，后用蒸馏水润洗3遍，装入上述的培养基40升，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的丹麦角毛藻接种，接种密度5 X 14Cell/mL ;盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，50厘米，顶端露出盖子12厘米，下端通过料管与散气石连接，用以充气(散气石的作用是形成很小的气泡，避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞)；另一根较短，15厘米，两端露出盖子即可，用以排气；两根玻璃管同样粗细；用干净的透明胶带将两根玻璃管固定；长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气:纯二氧化碳:臭氧:甲烷=92%: 6%: 1%: 1% ；连续充气，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；室外培养，太阳光照射，最佳温度24±2°C，最佳光照强度3000-9000LUX ;夜间打开节能灯进行照明。培养的前5天，水桶上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在2000-4000LUX，避免强烈阳光对细胞造成的光伤害；第6天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成；培养至第7天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养基5升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第10天，丹麦角毛藻密度增加至700 X 104cell/mL,停止培养，将藻液倒出，将白塑料桶洗刷干净后，加入消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养；
[0042]所述消毒液由以下重量比的物质组成--每100份85%乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料:土荆皮30份、杠板归15份、黄柏15份、苦参5份、艾叶5份、辅料3份；消毒液制作方法:将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于60°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮30份、杠板归15份、黄柏15份、苦参5份、艾叶5份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇，浸泡48小时，200筛絹过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2: I: I ;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
[0043]优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10分钟。
[0044]优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5分钟。
[0045]优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5分钟。
[0046]优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
[0047]实施例2
[0048]其他步骤同于实施例1，区别在于所述消毒液由以下重量比的物质组成:每100份85%乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料:土荆皮40份、杠板归20份、黄柏20份、苦参10份、艾叶10份、辅料4份；消毒液制作方法:将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于65°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮40份、杠板归20份、黄柏20份、苦参10份、艾叶10份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇，浸泡48小时，200筛絹过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料4份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2:1:1;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
[0049]优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒15分钟。
[0050]优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒7.5分钟。
[0051]优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5.5分钟。
[0052]优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2.5分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2.5分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
[0053]实施例3
[0054]其他步骤同于实施例1，区别在于所述消毒液由以下重量比的物质组成:每100份85%乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料:土荆皮50份、杠板归25份、黄柏25份、苦参15份、艾叶15份、辅料5份；消毒液制作方法:将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮50份、杠板归25份、黄柏25份、苦参15份、艾叶15份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇，浸泡48小时，200筛絹过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料5份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2:1:1;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
[0055]优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒20分钟。
[0056]优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒10分钟。
[0057]优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒6分钟。
[0058]优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒3分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒3分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
[0059]最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。
【权利要求】
1.一种以鱼下脚料浸出液为主要原料培养丹麦角毛藻的培养基,其特征在于配方如下:鱼下脚料浸出液125毫升，碳酸氢铵2毫克，磷酸二氢钾3毫克，谷氨酸钠I毫克，苯甲酸钠0.4毫克，海洋酵母I毫克，尿素I毫克，牛粪浸出液I毫升，蛋白粉15毫克，牛磺酸10毫克，酵母锌5毫克，酪氨酸0.5毫克，羟丙基甲基纤维素3毫克，L-精氨酸2毫克，麦饭石粉4毫克，920植物生长刺激素8国际单位，维生素S-3溶液I毫升，M-F微量元素溶液I毫升，葡萄糖酸亚铁3毫克，蜂胶2毫克，罗汉果甜苷6毫克，硬脂酸镁8毫克，柠檬酸2毫克，土壤浸出液I毫升，海泥浸出液1.5毫升,臭氧消毒的纯净海水1000毫升。
2.一种以鱼下脚料浸出液为主要原料养殖丹麦角毛藻的方法，其特征在于具体步骤如下: 培养容器为容积65升白塑料桶，市场有售，食品级高密度聚乙烯材料制成，无缝一体式结构，坚固耐用，抗冲击，有良好透光性，以利丹麦角毛藻进行光合作用，水桶顶部有一圆形盖子，上有旋丝，可旋转而密封，盖子打上3个孔，一个孔插入充气管，另一个孔插入排气管，充气管和排气管都是玻璃管，内径6毫米，还有一个孔穿入一根金属导线，导线末端接一个40w节能灯，将塑料桶洗刷干净，后用蒸馏水润洗3遍，装入权利要求1所述的培养基40升，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的丹麦角毛藻接种，接种密度5X 104cell/mL，盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，50厘米，顶端露出盖子12厘米，下端通过料管与散气石连接，用以充气(散气石的作用是形成很小的气泡，避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞)，另一根较短，15厘米，两端露出盖子即可，用以排气，两根玻璃管同样粗细；用干净的透明胶带将两根玻璃管固定，长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气:纯二氧化碳:臭氧:甲烷=92%: 6%: 1%: 1%，连续充气，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可，室外培养，太阳光照射，最佳温度24 ± 2 °C，最佳光照强度3000-9000LUX，夜间打开节能灯进行照明，培养的前5天，水桶上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在2000-4000LUX，避免强烈阳光对细胞造成的光伤害，第6天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成，培养至第7天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养基5升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第10天，丹麦角毛藻密度增加至700 X 14CelΙ/mL，停止培养，将藻液倒出，将白塑料桶洗刷干净后，加入消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养； 所述消毒液由以下重量比的物质组成:每100份85 %乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料:土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份、辅料3-5份；消毒液制作方法:将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于60-70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小时,200筛絹过滤,将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3-5份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2: I: I ;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
3.根据权利要求2所述的一种以鱼下脚料浸出液为主要原料养殖丹麦角毛藻的方法，其特征在于，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10-20分钟。
4.根据权利要求2所述的一种以鱼下脚料浸出液为主要原料养殖丹麦角毛藻的方法，其特征在于，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5-10分钟。
5.根据权利要求2所述的一种以鱼下脚料浸出液为主要原料养殖丹麦角毛藻的方法，其特征在于，对选用的白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5-6分钟。
6.根据权利要求2所述的一种以鱼下脚料浸出液为主要原料养殖丹麦角毛藻的方法，其特征在于，对选用的白塑料桶，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2-3分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2-3分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
【文档编号】C12N1/12GK104328052SQ201410436475
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2014年9月1日 优先权日:2014年9月1日
【发明者】王培磊 申请人:临沂大学