一种番茄花培育种诱导培养基配方的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种番茄花培育种诱导培养基配方，具体设及一种显著提高番茄花药 出愈率的诱导培养基配方，属于农业科学技术领域。
【背景技术】
[0002] 番茄别名西红柿，在分类上属于茄科番茄属，是一年生或多年生作物。番茄被列为 全世界年总产量最高的30种作物之一，是全世界栽培最为普遍的果菜之一，也是我国主要 的栽培蔬菜之一。番茄适应性强、产量高，果实营养丰富，富含维生素类和糖类，具有特殊风 味和广阔的用途，并在生产领域可W采取多种栽培方式，近年来逐渐发展成一种世界性的 农作物。
[0003] 由于番茄应用的重要性，因此番茄育种研究已成为蔬菜育种的重点研究对象。另 一方面，番茄也是一种模式植物，在生理生化、遗传及分子生物学方面的研究也比其它蔬菜 作物更有意义。常规杂交育种一直是番茄育种的主要方式，但其纯化材料周期长、见效慢， 不能切实的满足生产上对优良品种的迫切需求。通过对番茄花药的离体培养诱导雄核发 育、获得单倍体或双单倍体植株从而迅速获得番茄纯合系的花培育种技术不但可W缩短番 茄的育种周期、加快番茄的育种进程，而且所获得的纯合系很有可能结合双亲的优点，获得 更加优良的新种质，因而番茄花药离体培养技术的研究具有十分重要的理论意义和实际应 用价值。
[0004] 番茄花药培养始于1972年，Sharp等从番茄不成熟的花药诱导获得单倍体愈伤组 织。同年，Gresshoff和Doy经番茄花药培养的愈伤组织诱导出了番茄单倍体小植株，取得了 番茄花药培养的首次成功。W后，在番茄花药培养的方法、条件上不断有新的进展。
[0005] 番茄花药培养研究虽取得了较大进展，但在理论和应用上仍存在一些问题。关于 番茄小抱子由配子体发育途径向抱子体途径转变，进而形成单倍体或双单倍体植株的发育 调控机理尚不明确。培养基成分及培养条件间相互作用关系不清楚，胚状体或愈伤组织的 诱导率和分化率较低，离实际应用要求有较大差距。因此，加快番茄花培育种机理研究，开 发出花药愈伤诱导率分化率更高的培养基配方，具有重要的现实需求。
[0006] 培养基是花药培养的物质基础，直接关系到培养物的生长与分化，培养基组分是 影响花培成功的一个非常重要的因素，多种番茄花培实验表明：培养基各组分的合适用量， W及它们之间一定的组合关系，可显著影响花培效率，发现和优化组合花药培养有机附加 物质，可进一步提高花药培养力。因此，培养基成分的优化，生长调节剂种类、配比及浓度的 调节，有机附加物质的筛选等，均是筛选出培养效率更高的花培培养基的重要研究对象。通 过多年番茄花药培养的摸索和实践，我们进一步优化了基本培养基配方，并且不断尝试加 入一些提高番茄花药诱导力的有机添加物并组合其种类搭配及浓度，最终摸索出了一种番 茄品种培育用花药诱导培养基配方。我们的研究技术对于推动番茄花培育种的产业化推广 无疑具有极大的现实意义。
【发明内容】
[0007]本发明提供了一种番茄花培育种诱导培养基，其特征在于:该培养基的配方如下： KN03 900~1000mg/L，NH4N〇3 800~850mg/L，KH2P〇4 650~700mg/L，MgS〇4.出0 1100~ 1300111邑/1，〔曰(：12.2此0 200~250111邑几，化2-抓14 72~78111邑/1，尸6504.7出0 53~57111邑/1， MnS〇4.此0 16~18mg/L，ZnS〇4.7此0 17~19mg/L，曲B03 5.5~6.5mg/L，KI 0.75~0.85mg/ 1^，化504.5出0 0.02~0.03111邑/1，(：〇(：1.6出0 0.025~0.035111邑/1，胞]\1〇04.2此0 0.2~0.3111邑/ L，AgN〇3 7.5~8.5mg/L，肌醇 90~llOmg/L，维生素 Bl 0.45~0.55mg/L，维生素 B6 0.45~ 0.55mg/L，烟酸4.5~5.5mg/L，甘氨酸1.8~2.2mg/L，叶酸0.45~0.55mg/L，环憐酸鸟巧 0.25~0.35g/L，麦芽糖18~22g/L，薦糖14~16g/L，植物凝胶4.5~5.5g/L; 2.4- D 0.9~l.lmg/L，激动素 0.35~0.45mg/L，复献核酸 0.25~0.35mg/L，生物素 0.04~0.06mg/L，维生素 C 40~50皿ol/L，活性炭150~200mg/L，水解蛋白0.55~0.65g/ L。
[000引所述的培养基配方的最佳含量为:KN03 950mg/L，NH4N03 825mg/L，K此P04 675mg/ L，MgS04?出0 1200mg/L，CaCl2,2出0 225mg/L，Na2-EDTA 75mg/L，FeS04,7出0 55mg/L，MnS04-出0 17mg/L，ZnS04.7出0 18mg/L，曲B03 6.0mg/L，KI 0.8mg/L，CuS04.5出0 0.025mg/L，CoCl ?6此0 0.03111邑/1，船]\1〇04'2出0 0.25111邑/1，4邑側3 8.0111邑/1，肌醇100111邑/1，维生素810.5111邑/ L，维生素 B6 0.5mg/L，烟酸5.0mg/L，甘氨酸2.0mg/L，叶酸0.5mg/L，环憐酸鸟巧0.3g/ L，麦芽糖20g/L，薦糖15g/L，植物凝胶5.0g/l; 2.4- D l.Omg/L，激动素0.4mg/L，复献核酸0.3mg/L，生物素0.05mg/L，维生素 C 4化 mol/L，活性炭175mg/L，水解蛋白0.6g/L。
[0009] 所述的培养基配方的配制抑值为:5.6~6.0，最佳配制抑值为5.8。
[0010] 本发明所述的培养基具有高效率地诱导番茄花药产生花粉愈伤的优点，可W显著 提高番茄花药培养效率，加快番茄良种培育进程。下面的实施例W及对比实验可W清楚地 反映本发明所述培养基的特点。
【具体实施方式】
[00川实施例1 配制如下配方的培养基： KN03 950mg/L，NH4N03 825mg/L，KH2P04 675mg/L，MgS04.H20 1200mg/L，CaCl2.2H20 225mg/L，化2-EDTA 75mg/L，FeS04'7H20 日5mg/L，MnS04'H20 17mg/L，ZnS04'7H20 18mg/L， 曲803 6.0111邑/1，1(10.8111邑/1，加504'5出0 0.025111邑/1，(：0(：1'6此0 0.03111邑/1，胞]\1〇04'2此0 0.25mg/L，AgN〇3 8.0mg/L，肌醇 lOOmg/L，维生素 BI 0.5mg/L，维生素 B6 0.5mg/L，烟酸 5.0mg/L，甘氨酸2.0mg/L，叶酸0.5mg/L，环憐酸鸟巧0.3g/L，麦芽糖20g/L，薦糖15g/ L，植物凝胶5.0g/l; 2.4- D l.Omg/L，激动素0.4mg/L，复献核酸0.3mg/L，生物素0.05mg/L，维生素 C 4化 mol/L，活性炭 175mg/L，水解蛋白 0.6g/L，pH 5.8。
[0012] 选择番茄品种大叶早粉和桃太郎作为花药培养供体，于晴天上午9:00-11:00取 盛花期花蕾，将花蕾用洗衣粉洗净，W清洗附着在外植体上的灰尘和细菌，再用流动的自来 水冲洗，4°C低溫预处理。2天后取出花蕾，用滤纸吸干花蕾上的水放置于超净工作台上，剥 出子房，70%酒精消毒3-4min，无菌水冲洗3-4次，接种至愈伤诱导培养基，暗培养4周左 右，得到白色或淡绿色愈伤。计算愈伤组织诱导率，然后转移入再生培养基。
[0013] 愈伤组织诱导率(％)=(愈伤组织产生数/接种花药总数）X 100。
[0014] 实施例2 配制如下配方的培养基(AgN〇3添加浓度的优选）： KN03 950mg/L，NH4N〇3 825mg/L，KH2P〇4 675mg/L，MgS〇4.H2〇 1200mg/L，CaCl2.2H2〇 225mg/L，化2-EDTA 75mg/L，FeS〇4'7H2〇 日5mg/L，MnS〇4'H2〇 17mg/L，ZnS〇4'7H2〇 18mg/L， 曲803 6.0111邑/1，1(10.8111邑/1，加504'5出0 0.025111邑/1，(：〇(：1'6此0 0.03111邑/1，胞]\1〇04'2此0 0.25mg/L，肌醇 lOOmg/L，维生素 BI 0.5mg/L，维生素 B6 0.5mg/L，烟酸 5.0mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，叶酸0.5mg/L，环憐酸鸟巧0.3g/L，麦芽糖20g/L，薦糖15g/L，植物凝胶5.0g/ L； 2.4- D l.Omg/L，激动素0.4mg/L，复献核酸0.3mg/L，生物素0.05mg/L，维生素 C 4化 mol/L，活性炭 175mg/L，水解蛋白 0.6g/L，pH 5.8。
[0015] AgN〇3的添加浓度设置 W 下5种:0; 2. Omg/L; 4. Omg/L; 6. Omg/L; 10.0 mg/L。
[0016] 同样选取该两个番茄品种作为花药供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈 伤组织诱导率。
[0017] 实施例3 配制如下配方的培养基(甘氨酸添加浓度的优选）： KN03 950mg/L，NH4N〇3 825mg/L，KH2P〇4 675mg/L，MgS〇4.H2〇 1200mg/L，CaCl2.2H2〇 225mg/L，化2-EDTA 75mg/L，FeS〇4'7H2〇 日5mg/L，MnS〇4'H2〇 17mg/L，ZnS〇4'7H2〇 18mg/L， 曲803 6.0111邑/1，1(10.8111邑/1，加504'5出0 0.025111邑/1，(：〇(：1'6此0 0.03111邑/1，胞]\1〇04'2此0 0.25mg/L，AgN〇3 8.0mg/L，肌醇 lOOmg/L，维生素 BI 0.5mg/L，维生素 B6 0.5mg/L，烟酸 5.0mg/L，叶酸0.5mg/L，环憐酸鸟巧0.3g/L，麦芽糖20g/L，薦糖15g/L，植物凝胶5.0g/ L； 2.4- D l.Omg/L，激动素0.4mg/L，复献核酸0.3mg/L，生物素0.05mg/L，维生素 C 4化 mol/L，活性炭 175mg/L，水解蛋白 0.6g/L，pH 5.8。
[001引甘氨酸的添加浓度设置W下4种:0; 1. Omg/l; 3. Omg/l; 4. Omg/L。
[0019] 同样选取该两个番茄品种作为花药供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈 伤组织诱导率。
[0020] 实施例4 配制如下配方的培养基(环憐酸鸟巧添加浓度的优选）： KN03 950mg/L，NH4N〇3 825mg/L，KH2P〇4 675mg/L，MgS〇4.H2〇 1200mg/L，CaCl2.2H2〇 225mg/L，化2-EDTA 75mg/L，FeS〇4'7H2〇 日5mg/L，MnS〇4'H2〇 17mg/L，ZnS〇4'7H2〇 18mg/L， 曲803 6.0111邑/1，1(10.8111邑/1，加504'5出0 0.025111邑/1，(：〇(：1'6此0 0.03111邑/1，胞]\1〇04'2此0 0.25mg/L，AgN〇3 8.0mg/L，肌醇 lOOmg/L，维生素 BI 0.5mg/L，维生素 B6 0.5mg/L，烟酸 5.0mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，叶酸 0.5mg/L，麦芽糖 20g/L，薦糖 15g/L，植物凝胶 5.0g/l; 2.4- D l.Omg/L，激动素0.4mg/L，复献核酸0.3mg/L，生物素0.05mg/L，维生素 C 4化 mol/L，活性炭 175mg/L，水解蛋白 0.6g/L，pH 5.8。
[0021] 环憐酸鸟巧的添加浓度设置W下5种:0;0.1 g/l;0.2g/L;0.4g/l;0.5g/L。
[0022] 同样选取该两个番茄品种作为花药供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈 伤组织诱导率。
[0023] 实施例5 配制如下配方的培养基(植物凝胶添加浓度的优选）： KN03 950mg/L，N