一种用于划痕实验的装置及耗材套装的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种用于划痕实验的装置及耗材套装，所述装置包括：用于培养细胞的培养皿或培养板或腔室载玻片以及细胞培养插件。细胞培养插件具有“工”字型结构，并设有至少一个用于形成划痕空白区的划痕挡板以及用于支撑细胞培养插件的四个支撑挡板，细胞培养插件的底面与培养皿的培养面或腔室的培养面形成贴合接触面，并且对应于划痕挡板的贴合接触面在划痕实验中形成划痕空白区。本实用新型的这种特殊设计的细胞培养插件，可以在划痕实验中简便形成整齐的划痕空白区，从而大大简化了划痕实验的操作步骤，极大地提升了该实验的易操作性和可重复性。在此基础上完成了本实用新型的细胞培养插件、含插件的耗材套装。
【专利说明】
一种用于划痕实验的装置及耗材套装
技术领域
[0001]本实用新型涉及细胞培养及细胞功能分析领域，具体地涉及用于划痕实验的装置及耗材套装。
【背景技术】
[0002]划痕实验也叫伤口愈合实验，是用来分析细胞迀移、运动能力最常用的实验方法。通常被用来研究运动细胞如足细胞等，以及各种肿瘤细胞的迀移能力。
[0003]做划痕实验的传统方法是在细胞铺满培养皿之后，用枪头划，刮掉细胞，形成空白的区域。然而，该方法存在明显的缺点，主要包括:(I)划痕操作依赖操作者的经验；(2)划痕形成的空白区通常不够整齐，无法进行定量的分析；(3)重复性差，每次操作的差异性(variat1n)比较大；(4)用枪头划，会损伤培养皿底部的包被物，甚至破坏底部表面的平整度，使得一些贴壁的细胞不能在空白区生长，导致细胞迀移能力弱的阴性结果。
[0004]由于现有的划痕方法存在诸多不足，例如数据不够漂亮，划痕区域锯齿状，不整齐，重复性差，不容易获得定量结果，更不能获得统计差异，因此，很多科研工作者在做相关实验时，通常只能用划痕实验做预实验，或者只能将划痕实验结果放在补充数据中。
[0005]因此，本领域迫切需要开发操作简便、重复性高、甚至可用于定量分析划痕实验的装置和耗材套装。
【实用新型内容】
[0006]本实用新型的目的是提供一种操作简便、重复性高、甚至可用于定量分析划痕实验的装置和耗材套装。
[0007]在本实用新型的第一方面，提供了一种用于划痕实验的装置，所述装置包括:
[0008](a)用于培养细胞的培养皿或培养板或腔室载玻片，其中所述的培养板以及腔室载玻片具有一个或多个用于培养细胞的腔室；
[0009](b)细胞培养插件，所述细胞培养插件具有“工”字型结构，并且具有平坦的底面，其中所述细胞培养插件设有至少一个用于形成划痕空白区的划痕挡板以及用于支撑所述细胞培养插件的四个支撑挡板，其中第一支撑挡板和第二支撑挡板固定于所述划痕挡板的一端，而第三支撑挡板和第四支撑挡板固定于所述划痕挡板的另一端，从而形成“工”型结构；
[0010]其中，所述的划痕挡板的截面为长度I，宽度d的矩形；
[0011]并且，当所述细胞培养插件置于所述的培养皿或置于所述的腔室中，所述细胞培养插件的底面与所述培养皿的培养面或所述的腔室的培养面形成贴合接触面，并且对应于所述的划痕挡板的贴合接触面在划痕实验中形成划痕空白区。
[0012]优选地，所述I 为0.5 — I Ocm，所述 d为 100-1 ΟΟΟμ??。
[0013]在另一优选例中，所述第一支撑挡板和第二支撑挡板之间的夹角a以及所述第三支撑挡板和第四支撑挡板之间的夹角b为30-330度。
[0014]在另一优选例中，所述的细胞培养插件与所述培养皿之间的吸附力大于所述细胞培养插件的重力。
[0015]在另一优选例中，所述的各支撑挡板的截面为长条型、弧形、或矩形。
[0016]在另一优选例中，所述的各支撑挡板与培养面形成的贴合接触面的面积Sz为
0.5 — 10mm20
[0017]在另一优选例中，所述的各支撑挡板是相同的或不同。
[0018]在另一优选例中，所述的一个或多个支撑挡板的截面为矩形，并且对应于所述的一个或多个支撑挡板的贴合接触面在划痕实验中形成辅助划痕空白区。
[0019]在另一优选例中，所述培养皿为直径为3.5cm、6cm、7cm、9cm、10cm、15cm等不同培养表面大小的培养皿。
[0020]在另一优选例中，所述腔室载玻片具有2、3、4、6、8、10、12个用于培养细胞的腔室。
[0021]在另一优选例中，所述的培养板具有2、4、6、8、16、24、48和96个用于培养细胞的腔室。
[0022]在另一优选例中，所述的细胞培养插件为生物兼容性的硅胶插件。
[0023]在另一优选例中，所述细胞培养插件在其上部具有粗糙表面。
[0024]在另一优选例中，所述细胞培养插件在其下部具有光滑平整表面。
[0025]在本实用新型的第二方面，提供了一种用于划痕实验的耗材套装，所述套装包括:
[0026](a)第一容器，以及位于所述第一容器内的培养皿或培养板或腔室载玻片，其中所述的培养板与所述的腔室载玻片具有一个或多个用于培养细胞的腔室；
[0027](b)第二容器，以及位于所述第二容器内的细胞培养插件，所述细胞培养插件具有“工”字型结构，并且具有平坦的底面，其中所述细胞培养插件设有至少一个用于形成划痕空白区的划痕挡板以及用于支撑所述细胞培养插件的四个支撑挡板，其中第一支撑挡板和第二支撑挡板固定于所述划痕挡板的一端，而第三支撑挡板和第四支撑挡板固定于所述划痕挡板的另一端，从而形成“工”型结构；
[0028]其中，所述的划痕挡板的截面为长度I，宽度d的矩形，且所述I为0.5— 10cm，所述d为 100-1000μπι;
[0029]并且，当所述细胞培养插件置于所述的培养皿或置于所述的腔室中，所述细胞培养插件的底面与所述培养皿的培养面或所述的腔室的培养面形成贴合接触面，并且对应于所述的划痕挡板的贴合接触面在划痕实验中形成划痕空白区；
[0030](C)任选的使用说明书。
[0031]在本实用新型的第三方面，提供了一种用于划痕实验的耗材套装，所述套装包括:
[0032](a)第一容器，以及位于所述第一容器内的培养皿或培养板或腔室载玻片，其中所述的培养板与所述腔室载玻片具有一个或多个用于培养细胞的腔室，并且在每个培养细胞的腔室中预置有细胞培养插件，所述细胞培养插件具有“工”字型结构，并且具有平坦的底面，其中所述细胞培养插件设有至少一个用于形成划痕空白区的划痕挡板以及用于支撑所述细胞培养插件的四个支撑挡板，其中第一支撑挡板和第二支撑挡板固定于所述划痕挡板的一端，而第三支撑挡板和第四支撑挡板固定于所述划痕挡板的另一端，从而形成“工”型结构；
[0033]其中，所述的划痕挡板的截面为长度I，宽度d的矩形，且所述I为0.5— 10cm，所述d为 100-1000μ??;
[0034]并且，当所述细胞培养插件置于所述的培养皿或置于所述的腔室中，所述细胞培养插件的底面与所述培养皿的培养面或所述的腔室的培养面形成贴合接触面，并且对应于所述的划痕挡板的贴合接触面在划痕实验中形成划痕空白区；
[0035](b)任选的使用说明书。
[0036]优选地，所述的耗材套装还含有第二容器，以及位于所述第二容器内的细胞培养插件，其中所述的细胞培养插件与所述第一容器中预置好的细胞培养插件的规格是相同的或不同的，所述规格按所述划痕挡板的截面积的大小和形状进行划分。
[0037]在本实用新型的第四方面，提供了一种非诊断性和非治疗性的测定细胞迀移能力的方法，包括步骤:
[0038](a)提供第一方面所述的装置，其中所述的细胞培养插件被放置于所述培养皿或所述培养板的腔室或所述腔室载玻片的腔室中，使得所述细胞培养插件贴合于所述培养皿的培养面或所述培养板、所述腔室载玻片的培养面；
[0039](b)向所述的装置中添加适量的细胞悬液；
[0040](c)培养所述的细胞，直至所述细胞贴壁且铺满或基本铺满底部的培养面；
[0041](d)移除所述的细胞培养插件，从而形成划痕空白区；
[0042](e)继续培养所述的细胞，并观察和分析所述细胞的迀移能力。
[0043]优选地，在步骤(d)中，移除所述细胞培养插件后，形成平整的的划痕空白区；
[0044]在步骤(e)中，在相同大小的所述腔室中用相同规格的所述细胞培养插件所形成的各划痕空白区，进行定性和/或定量和/或统计分析。
[0045]在另一优选例中，在步骤(d)中，移除所述细胞培养插件后，形成平整的划痕空白区，不破坏所述培养皿或所述培养板的腔室或所述腔室载玻片的腔室的底部培养表面，细胞可在所述培养表面贴壁生长、迀移运动。
[0046]在另一优选例中，所述的培养面为载玻片表面。
[0047]在另一优选例中，在步骤(b)中，所述细胞悬液的添加量为50-15000微升/腔室，依据所用培养皿、培养板、腔室载玻片的具体腔室大小而定。
[0048]在另一优选例中，在步骤(b)中，所述细胞悬液的中细胞的浓度为IX 14-1X 16个细胞/ml，具体依据所培养的细胞类型而定。
[0049]在另一优选例中，所述的划痕空白区的宽度d为100-1000μπι，长度I为0.5 — 10cm。
[0050]在另一优选例中，所述的培养板包括η个相同或不同大小的腔室。
[0051]在另一优选例中，所述的腔室载玻片包括η个相同或不同大小的腔室。
[0052]在另一优选例中，在步骤(e)中，所述的分析为定量分析。
[0053]在另一优选例中，在步骤(e)中，在相同大小腔室中用相同规格的所述细胞培养插件所形成的各划痕空白区，进行定量和/或统计分析。
[0054]应理解，在本实用新型范围内中，本实用新型的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
【附图说明】
[0055]图1为实施例1中划痕实验装置的结构示意图；
[0050]图2为实施例1中划痕实验时形成的划痕空白区的结构不意图；
[0057]图3为实施例2中划痕实验装置的结构示意图；
[0058]图4为实施例3中划痕实验装置的结构示意图。
【具体实施方式】
[0059]本发明人经过广泛而深入的研究，首次开发了一种用于划痕实验的细胞培养插件。通过这种特殊设计的生物相容的硅胶插件，可以在划痕实验中简便形成整齐的划痕空白区，从而大大简化了划痕实验的操作步骤，极大地提升了该实验的易操作性和可重复性。在此基础上完成了本实用新型。
[0060]术语
[0061 ]如本文所用，术语“本实用新型细胞培养插件”、“本实用新型培养插件”、“本实用新型插件”可互换使用，指本实用新型的细胞培养插件
[0062]如本文所用，术语“工字型”“H型”可互换使用，指细胞培养插件的形状，支撑挡板可以是直线型、曲线型、折线型、或其组合，例如，两个挡板(以第一挡板和第二挡板为例)，当其都为直线型时，可以共同构成一直线(即夹角α = 180°)，也可以构成其它任意角度，优选30-320度，60-300度，90-270度，120-240度，150-210度，从而构成“〈”、“〉”(对H型而言)、“V”或倒“V”(对于“工”型而言)或其它类似角度，如“U”、“C"等。
[0063]划痕实验装置
[0064]在一实施方式中，提供了一种用于划痕实验的装置，所述装置包括:
[0065](a)用于培养细胞的培养皿或培养板或腔室载玻片，其中所述的培养板以及腔室载玻片具有一个或多个用于培养细胞的腔室；
[0066](b)细胞培养插件，所述细胞培养插件具有“工”字型结构，并且具有平坦的底面，其中所述细胞培养插件设有至少一个用于形成划痕空白区的划痕挡板以及用于支撑所述细胞培养插件的四个支撑挡板，其中第一支撑挡板和第二支撑挡板固定于所述划痕挡板的一端，而第三支撑挡板和第四支撑挡板固定于所述划痕挡板的另一端，从而形成“工”型结构。
[0067]其中，所述的划痕挡板的截面为长度I，宽度d的矩形。
[0068]并且，当所述细胞培养插件置于所述的培养皿或置于所述的腔室中，所述细胞培养插件的底面与所述培养皿的培养面或所述的腔室的培养面形成贴合接触面，并且对应于所述的划痕挡板的贴合接触面在划痕实验中形成划痕空白区。
[0069 ]优选地，所述 I 为0.5 — I Ocm，所述 d为 100-1 ΟΟΟμπι。
[0070]在另一优选例中，所述第一支撑挡板和第二支撑挡板之间的夹角a以及所述第三支撑挡板和第四支撑挡板之间的夹角b为30-330度。
[0071]在另一优选例中，所述的细胞培养插件与所述培养皿之间的吸附力大于所述细胞培养插件的重力。
[0072]在另一优选例中，所述的各支撑挡板的截面为长条型、弧形、或矩形。
[0073]在另一优选例中，所述的各支撑挡板与培养面形成的贴合接触面的面积Sz为0.5 — 10mm20
[0074]在另一优选例中，所述的各支撑挡板是相同的或不同。
[0075]在另一优选例中，所述的一个或多个支撑挡板的截面为矩形，并且对应于所述的一个或多个支撑挡板的贴合接触面在划痕实验中形成辅助划痕空白区。
[0076]在另一优选例中，所述培养皿为直径为3.5cm、6cm、7cm、9cm、10cm、15cm等不同培养表面大小的培养皿。
[0077]在另一优选例中，所述腔室载玻片具有2、3、4、6、8、10、12个用于培养细胞的腔室。
[0078]在另一优选例中，所述的培养板具有2、4、6、8、16、24、48和96个用于培养细胞的腔室。
[0079]在另一优选例中，所述的细胞培养插件为生物兼容性的硅胶插件。
[0080]在另一优选例中，所述细胞培养插件在其上部具有粗糙表面。
[0081]在另一优选例中，所述细胞培养插件在其下部具有光滑平整表面。
[0082]在另一优选例中，所述硅胶插件可以通过静电相互作用使其贴在腔室载玻片的底部，硅胶插件的底部固定宽度为500μπι。
[0083]在另一优选例中，所述硅胶插件的底部(即与腔室载玻片表面接触的接触面)是平坦光洁的，因而不仅可以与腔室载玻片表面形成良好的贴合接触，从而提供吸附力(吸力)，此外，所述硅胶插件可以进一步通过静电相互作用等作用力使其固定或吸附于腔室载玻片。
[0084]在另一优选例中，所述的硅胶插件的上部和下部由相同材料构成。
[0085]在另一优选例中，所述的硅胶插件的上部和下部由不同的材料构成。例如，上部采用是粗糙的材料，而下部使用的是较细腻的材料。
[0086]在另一优选例中，所述的硅胶插件的上部和下部虽然由相同或基本相同的材料构成，但是上部具有较为粗糙的表面，而下部具有光滑的表面。这样，便于插件牢固的固定于培养皿、培养板、腔室载玻片的培养面；另外，在进行移除操作时，容易移除本实用新型插件，而不会对细胞迀移实验造成影响。
[0087]耗材套装
[0088]在另一实施方式中，提供了一种用于划痕实验的耗材套装，所述套装包括:
[0089](a)第一容器，以及位于所述第一容器内的培养皿或培养板或腔室载玻片，其中所述的培养板与所述的腔室载玻片具有一个或多个用于培养细胞的腔室；
[0090](b)第二容器，以及位于所述第二容器内的细胞培养插件，所述细胞培养插件具有“工”字型结构，并且具有平坦的底面，其中所述细胞培养插件设有至少一个用于形成划痕空白区的划痕挡板以及用于支撑所述细胞培养插件的四个支撑挡板，其中第一支撑挡板和第二支撑挡板固定于所述划痕挡板的一端，而第三支撑挡板和第四支撑挡板固定于所述划痕挡板的另一端，从而形成“工”型结构；
[0091]其中，所述的划痕挡板的截面为长度I，宽度d的矩形，且所述I为0.5— 10cm，所述d为 100-1000μπι;
[0092]并且，当所述细胞培养插件置于所述的培养皿或置于所述的腔室中，所述细胞培养插件的底面与所述培养皿的培养面或所述的腔室的培养面形成贴合接触面，并且对应于所述的划痕挡板的贴合接触面在划痕实验中形成划痕空白区；
[0093](C)任选的使用说明书。
[0094]耗材套装
[0095]在另一实施方式中，提供了一种用于划痕实验的耗材套装，所述套装包括:
[0096](a)第一容器，以及位于所述第一容器内的培养皿或培养板或腔室载玻片，其中所述的培养板与所述腔室载玻片具有一个或多个用于培养细胞的腔室，并且在每个培养细胞的腔室中预置有细胞培养插件，所述细胞培养插件具有“工”字型结构，并且具有平坦的底面，其中所述细胞培养插件设有至少一个用于形成划痕空白区的划痕挡板以及用于支撑所述细胞培养插件的四个支撑挡板，其中第一支撑挡板和第二支撑挡板固定于所述划痕挡板的一端，而第三支撑挡板和第四支撑挡板固定于所述划痕挡板的另一端，从而形成“工”型结构；
[0097]其中，所述的划痕挡板的截面为长度I，宽度d的矩形，且所述I为0.5— 10cm，所述d为 100-1000μπι;
[0098]并且，当所述细胞培养插件置于所述的培养皿或置于所述的腔室中，所述细胞培养插件的底面与所述培养皿的培养面或所述的腔室的培养面形成贴合接触面，并且对应于所述的划痕挡板的贴合接触面在划痕实验中形成划痕空白区；
[0099](b)任选的使用说明书。
[0100]优选地，所述的耗材套装还含有第二容器，以及位于所述第二容器内的细胞培养插件，其中所述的细胞培养插件与所述第一容器中预置好的细胞培养插件的规格是相同的或不同的，所述规格按所述划痕挡板的截面积的大小和形状进行划分。
[0101]测定细胞迀移能力的方法
[0102]在另一实施方式中，提供了一种非诊断性和非治疗性的测定细胞迀移能力的方法，包括步骤:
[0103](a)提供划痕实验装置所述的装置，其中所述的细胞培养插件被放置于所述培养皿或所述培养板的腔室或所述腔室载玻片的腔室中，使得所述细胞培养插件贴合于所述培养皿的培养面或所述培养板、所述腔室载玻片的培养面；
[0104](b)向所述的装置中添加适量的细胞悬液；
[0105](C)培养所述的细胞，直至所述细胞贴壁且铺满或基本铺满底部的培养面；
[0106](d)移除所述的细胞培养插件，从而形成划痕空白区；
[0107](e)继续培养所述的细胞，并观察和分析所述细胞的迀移能力。
[0108]优选地，在步骤(d)中，移除所述细胞培养插件后，形成平整的的划痕空白区；
[0109]在步骤(e)中，在相同大小的所述腔室中用相同规格的所述细胞培养插件所形成的各划痕空白区，进行定性和/或定量和/或统计分析。
[0110]在另一优选例中，在步骤(d)中，移除所述细胞培养插件后，形成平整的划痕空白区，不破坏所述培养皿或所述培养板的腔室或所述腔室载玻片的腔室的底部培养表面，细胞可在所述培养表面贴壁生长、迀移运动。
[0111]在另一优选例中，所述的培养面为载玻片表面。
[0112]在另一优选例中，在步骤(b)中，所述细胞悬液的添加量为50-5000毫升/腔室，依据所用培养皿、培养板、腔室载玻片的具体腔室大小而定。
[0113]在另一优选例中，在步骤(b)中，所述细胞悬液的中细胞的浓度为IX 14-1X 16个细胞/ml，具体依据所培养的细胞类型而定。
[0114]在另一优选例中，所述的划痕空白区的宽度(1为100-100(^111，长度1为0.5 — 10011。
[0115]在另一优选例中，所述的培养板包括η个相同或不同大小的腔室。
[0116]在另一优选例中，所述的腔室载玻片包括η个相同或不同大小的腔室。
[0117]在另一优选例中，在步骤(e)中，所述的分析为定量分析。
[0118]在另一优选例中，在步骤(e)中，在相同大小腔室中用相同规格的所述细胞培养插件所形成的各划痕空白区，进行定量和/或统计分析。
[0119]在本实施方式中，对于同一规格的两个插件形成的划痕空白区，其相差幅度可按下式计算:
[0120]相差幅度F(%)= 100% X dl-d2|/((dl+d2)/2)
[0121 ]式中，dl为第一个划痕空白区的宽度(或跨度)；
[0122]d2为第二个划痕空白区的宽度(或跨度)。
[0123]对于同一规格的η个插件形成的划痕空白区，其相差幅度可按下式计算:
[0124]相差幅度F(%) = 100% X dmax—dmin | /(!average
[0125]式中，
[0126]dmax为宽度最大的划痕空白区的宽度(或跨度)；
[0127]dmin为宽度最小的划痕空白区的宽度(或跨度)；
[0128]daverage为η个划痕空白区的平均宽度(或平均跨度)(通常，daverage与同一规格插件的设计宽度相同或基本相同)。
[0129]材料和通用方法
[0130]细胞:人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。
[0131]培养基:内皮细胞培养基，10%胎牛血清。
[0132]培养方法:37°C，5%CO2，于细胞培养箱中培养。
[0133]细胞迀移测定:显微镜获取实验图像，ImageJ软件或者WimScratch软件分析空白区域的覆盖面积。
[0134]需要说明的是，在本专利的权利要求和说明书中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
[0135]本实用新型的主要优点包括:
[0136](a)本实用新型细胞培养插件的结构合理，非常适用于划痕实验。
[0137](b)用本实用新型细胞培养插件进行划痕实验时，操作简单、节约时间。
[0138](c)本实用新型可形成宽度一定(如200微米、300微米、500微米等)、区域明显的空白区(即类似于常规的划痕区)，易于进行定量分析。
[0139](d)用本实用新型细胞培养插件进行的划痕实验，重复性非常高。
[0140](e)本实用新型的细胞培养插件基于优异的牢固性:在跌落实验中，将插件固定后的细胞培养皿倒置，本实用新型插件不会跌落;此外，加入细胞悬液后，在有溶液的情况下，培养48小时后(满足划痕实验所需的时长)，不会发生漏液。
[0141](f)本实用新型细胞培养插件固定于细胞培养皿、培养板或腔室载玻片中后，外包装处理后，可以进行长途运输，保持无菌环境，插件不会脱落。
[0142]下面结合具体实施例，进一步阐述本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明本实用新型而不用于限制本实用新型的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
[0143]实施例1
[0144]采用培养皿进行划痕实验
[0145]图1为本实施例中划痕实验装置的结构示意图，图2为本实施例中划痕实验时形成的划痕空白区的结构示意图。
[0146]如图1所示，本实施例提供了一种用于划痕实验的装置，所述装置包括:
[0147](a)用于培养细胞的培养皿7;
[0148](b)细胞培养插件8，所述细胞培养插件8具有“工”字型结构，并且具有平坦的底面，其中所述细胞培养插件8设有一个用于形成划痕空白区9的划痕挡板6以及用于支撑所述细胞培养插件8的四个支撑挡板，其中第一支撑挡板I和第二支撑挡板2固定于所述划痕挡板6的一端，而第三支撑挡板3和第四支撑挡板4固定于所述划痕挡板6的另一端，从而形成“工”型结构。
[0149]其中，所述的划痕挡板6的截面为长度I，宽度d的矩形。
[0150]并且，当所述细胞培养插件8置于所述的培养皿7中，所述细胞培养插件8的底面与所述培养皿7的培养面形成贴合接触面，并且对应于所述的划痕挡板6的贴合接触面在划痕实验中形成划痕空白区9。
[0151 ] 本实施例中，所述I为3cm，所述d为500μηι。
[0152]所述第一支撑挡板I和第二支撑挡板2之间的夹角a以及所述第三支撑挡板3和第四支撑挡板4之间的夹角b为180度。
[0153]所述的细胞培养插件8通过静电相互作用使其贴在培养皿7的培养面，且所述的细胞培养插件8与所述培养皿7之间的吸附力大于所述细胞培养插件8的重力。
[0154]所述的各支撑挡板是相同的，且各支撑挡板的截面为长条型。
[0155]所述的各支撑挡板与培养皿7的培养面形成的贴合接触面的面积Sz为10mm2。
[0156]所述的支撑挡板的截面为矩形，并且对应于所述支撑挡板的贴合接触面在划痕实验中形成辅助划痕空白区9。
[0157]所述培养皿7为直径为6cm培养表面大小的培养皿7。
[0158]所述的细胞培养插件8为生物兼容性的硅胶插件8，且所述硅胶插件8的底部固定宽度为500μηι。
[0159]所述的细胞培养插件8的上部和下部由不同材料构成:上部采用是粗糙的材料，而下部使用的是较细腻的材料。
[0160]对实施例1中的装置进行如下实验:
[0161](a)将细胞培养插件8固定后的细胞培养皿7倒置；
[0162](b)向培养皿7内一次性加入所需的细胞悬液，添加量为1000微升，细胞的浓度为IX 15个细胞/ml，培养48小时后(满足划痕实验所需的时长)，移除细胞培养插件8;
[0163](c)将细胞培养插件8固定于培养皿7，外包装处理后，进行长途运输。
[0164]经过相关实验人员跟踪实验，得到如下结果:
[0165](a)将细胞培养皿7倒置，细胞培养插件8不会跌落；
[0166](b)培养48小时后，细胞培养插件8不会发生漏液，移除细胞培养插件8，划痕空白区9明显，且划痕空白区9宽度一致为500微米(如图2所示)，细胞生长状态良好；
[0167](c)长途运输过程中，细胞培养插件8不会脱落。
[0168]对比例I
[0169]采用和实施例1相同的装置(包括材质、规格)，不同之处在于:对比例I中的细胞培养插件为“日”型结构;对比例I中的细胞培养插件通过胶处理与培养皿的培养面相贴合。
[0170]对对比例I中的装置进行如下实验:
[0171](a’)将细胞培养插件固定于细胞培养皿，然后移除；
[0172](b’)向培养皿内加入预处理的细胞悬液，培养48小时后，移除细胞培养插件，加入细胞培养液；
[0173](c’)将细胞培养插件固定于培养皿，外包装处理后，进行长途运输。
[0174]经过相关实验人员跟踪实验，得到如下结果:
[0175](a’)用胶处理将插件固定于培养皿的培养面，移除插件时不易于操作，会破坏培养面的亲水性、光滑度等特性，不利于贴壁细胞的生长，进而容易造成细胞迀移能力差的阴性结果；
[0176](b ’)培养48小时后，细胞生长缓慢，移除细胞培养插件，加入细胞培养液后，细胞的生长状态不好；
[0177](c’)长途运输过程中，细胞培养插件会脱落。
[0178]上述结果表明:本实用新型的“工”字形的插件8构造非常有利于细胞的生长;本实用新型的插件8可形成宽度一定、区域明显的划痕空白区9，易于进行定量分析;本实用新型的细胞培养插件8通过静电作用固定于细胞培养皿7，倒置时不会跌落，长途运输时，插件8不会脱落;本实用新型的细胞培养插件8固定于细胞培养皿7，在有溶液的情况下，培养48小时后，不会发生漏液，且细胞生长状态良好。
[0179]实施例2
[0180]采用培养皿进行划痕实验
[0181]图3为本实施例中划痕实验装置的结构示意图。
[0182]如图3所示，在本实施例中，采用实施例1中相同的装置，不同点在于:本实施例中，细胞培养插件8的第一支撑挡板I和第二支撑挡板2之间的夹角a以及所述第三支撑挡板3和第四支撑挡板4之间的夹角b为60度;划痕挡板6的截面长度I为4cm，宽度d为350μπι。
[0183]细胞培养6-8小时，待细胞基本铺满细胞培养面后，移去所述的插件8。
[0184]然后，在相同条件下继续培养6-10小时，显微镜获取实验图像，软件分析划痕空白区的覆盖面积。
[0185]结果:插件8移除后，形成明显的大小(宽度)为350微米的划痕空白区。
[0186]实施例3
[0187]采用2孔腔室的载玻片进行划痕实验
[0188]图4为本实施例中划痕实验装置的结构示意图。
[0189]如图4所示，在本实施例中，采用实施例1中相同的细胞培养插件8，不同点在于，采用具有2孔腔室10的载玻片11替代实施例1中的培养皿7，并在每个腔室10中分别放置一个“工”型插件8，“工”型插件8的尺寸同实施例1。
[0190]细胞培养6-8小时，待细胞基本铺满细胞培养面后，移去所述的“工”型插件8。
[0191]然后，在相同条件下继续培养6-10小时，显微镜获取实验图像，软件分析划痕空白区的覆盖面积。
[0192]结果:2个孔腔室10内的插件8移除后，均形成明显的大小(宽度)为500微米的划痕空白区，且两个划痕空白区的宽度dl和d2两者相差幅度< I %。
[0193]实施例4
[0194]采用4孔腔室的载玻片进行划痕实验
[0195]在本实施例中，采用实施例1中相同的细胞培养插件，不同点在于，采用具有4孔腔室的载玻片替代实施例1中的培养皿，并在每个腔室中分别放置一个“工”型插件，“工”型插件的尺寸同实施例1。
[0196]细胞培养6-8小时，待细胞基本铺满细胞培养面后，移去所述的“工”型插件。
[0197]然后，在相同条件下继续培养6-10小时，显微镜获取实验图像，软件分析划痕空白区的覆盖面积。
[0198]结果:4个孔腔内的插件移除后，均形成明显的大小(宽度)为500微米的划痕空白区，且4个划痕空白区的宽度dl、d2、d3和d4之间的相差幅度<1%。
[0199]将“工”型插件放于2孔、4孔、8孔等不同腔室载玻片中，好处如下:节约细胞(培养皿需要的细胞量多，浪费);方便做对照实验、重复实验;在同一个载玻片上，易于操作;节约成本;同样大小的插件设计使得在不同腔室载玻片中进行实验，在进行不同批次的实验时，不受培养耗材的限制和约束，实验结果具有可比性。
[0200]实施例5
[0201]本实施例提供了一种用于划痕实验的耗材套装，所述套装包括:i02Q2] (a)第一容器，以及位于所述第一容器内的培养皿；
[0203](b)第二容器，以及位于所述第二容器内的细胞培养插件，所述细胞培养插件具有“工”字型结构，并且具有平坦的底面，其中所述细胞培养插件设有一个用于形成划痕空白区的划痕挡板以及用于支撑所述细胞培养插件的四个支撑挡板，其中第一支撑挡板和第二支撑挡板固定于所述划痕挡板的一端，而第三支撑挡板和第四支撑挡板固定于所述划痕挡板的另一端，从而形成“工”型结构。
[0204]其中，所述的划痕挡板的截面为长度I，宽度d的矩形，且所述I为3cm，所述d为500μmD
[0205]并且，当所述细胞培养插件置于所述的培养皿中，所述细胞培养插件的底面与所述培养皿的培养面形成贴合接触面，并且对应于所述的划痕挡板的贴合接触面在划痕实验中形成划痕空白区。
[0206]实施例6
[0207]本实施例提供了一种用于划痕实验的耗材套装，所述套装包括:
[0208](a)第一容器，以及位于所述第一容器内的培养板，其中所述的培养板具有多个用于培养细胞的腔室，并且在每个培养细胞的腔室中预置有细胞培养插件，所述细胞培养插件具有“工”字型结构，并且具有平坦的底面，其中所述细胞培养插件设有一个用于形成划痕空白区的划痕挡板以及用于支撑所述细胞培养插件的四个支撑挡板，其中第一支撑挡板和第二支撑挡板固定于所述划痕挡板的一端，而第三支撑挡板和第四支撑挡板固定于所述划痕挡板的另一端，从而形成“工”型结构；
[0209]其中，所述的划痕挡板的截面为长度I，宽度d的矩形，且所述I为8cm，所述d为800μm；
[0210]并且，当所述细胞培养插件置于所述的腔室中，所述细胞培养插件的底面与所述的腔室的培养面形成贴合接触面，并且对应于所述的划痕挡板的贴合接触面在划痕实验中形成划痕空白区；
[0211](b)第二容器，以及位于所述第二容器内的细胞培养插件，其中所述的细胞培养插件与所述第一容器中预置好的细胞培养插件的规格是相同的，所述规格按所述划痕挡板的截面积的大小和形状进行划分。
[0212]在本实用新型提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本实用新型的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本实用新型作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
【主权项】
1.一种用于划痕实验的装置，其特征在于，所述装置包括: (a)用于培养细胞的培养皿或培养板或腔室载玻片，其中所述的培养板以及腔室载玻片具有一个或多个用于培养细胞的腔室； (b)细胞培养插件，所述细胞培养插件具有“工”字型结构，并且具有平坦的底面，其中所述细胞培养插件设有至少一个用于形成划痕空白区的划痕挡板以及用于支撑所述细胞培养插件的四个支撑挡板，其中第一支撑挡板和第二支撑挡板固定于所述划痕挡板的一端，而第三支撑挡板和第四支撑挡板固定于所述划痕挡板的另一端，从而形成“工”型结构； 其中，所述的划痕挡板的截面为长度I，宽度d的矩形； 并且，当所述细胞培养插件置于所述的培养皿或置于所述的腔室中，所述细胞培养插件的底面与所述培养皿的培养面或所述的腔室的培养面形成贴合接触面，并且对应于所述的划痕挡板的贴合接触面在划痕实验中形成划痕空白区。2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述I为0.5— 10?11，所述(1为100-100(^111。3.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述第一支撑挡板和第二支撑挡板之间的夹角a以及所述第三支撑挡板和第四支撑挡板之间的夹角b为30-330度。4.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述的细胞培养插件与所述培养皿之间的吸附力大于所述细胞培养插件的重力。5.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述腔室载玻片具有2、3、4、6、8、10、12个用于培养细胞的腔室。6.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述的培养板具有2、4、6、8、16、24、48和96个用于培养细胞的腔室。7.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述的细胞培养插件为生物兼容性的硅胶插件。8.一种用于划痕实验的耗材套装，其特征在于，所述套装包括: (a)第一容器，以及位于所述第一容器内的培养皿或培养板或腔室载玻片，其中所述的培养板与所述的腔室载玻片具有一个或多个用于培养细胞的腔室； (b)第二容器，以及位于所述第二容器内的细胞培养插件，所述细胞培养插件具有“工”字型结构，并且具有平坦的底面，其中所述细胞培养插件设有至少一个用于形成划痕空白区的划痕挡板以及用于支撑所述细胞培养插件的四个支撑挡板，其中第一支撑挡板和第二支撑挡板固定于所述划痕挡板的一端，而第三支撑挡板和第四支撑挡板固定于所述划痕挡板的另一端，从而形成“工”型结构； 其中，所述的划痕挡板的截面为长度I，宽度d的矩形，且所述I为0.5 — 10cm，所述d为ΙΟΟ-ΙΟΟΟμπι; 并且，当所述细胞培养插件置于所述的培养皿或置于所述的腔室中，所述细胞培养插件的底面与所述培养皿的培养面或所述的腔室的培养面形成贴合接触面，并且对应于所述的划痕挡板的贴合接触面在划痕实验中形成划痕空白区； (C)任选的使用说明书。9.一种用于划痕实验的耗材套装，其特征在于，所述套装包括: (a)第一容器，以及位于所述第一容器内的培养皿或培养板或腔室载玻片，其中所述的培养板与所述腔室载玻片具有一个或多个用于培养细胞的腔室，并且在每个培养细胞的腔室中预置有细胞培养插件，所述细胞培养插件具有“工”字型结构，并且具有平坦的底面，其中所述细胞培养插件设有至少一个用于形成划痕空白区的划痕挡板以及用于支撑所述细胞培养插件的四个支撑挡板，其中第一支撑挡板和第二支撑挡板固定于所述划痕挡板的一端，而第三支撑挡板和第四支撑挡板固定于所述划痕挡板的另一端，从而形成“工”型结构；其中，所述的划痕挡板的截面为长度I，宽度d的矩形，且所述I为0.5 — 10cm，所述d为ΙΟΟ-ΙΟΟΟμπι; 并且，当所述细胞培养插件置于所述的培养皿或置于所述的腔室中，所述细胞培养插件的底面与所述培养皿的培养面或所述的腔室的培养面形成贴合接触面，并且对应于所述的划痕挡板的贴合接触面在划痕实验中形成划痕空白区； (b)任选的使用说明书。10.根据权利要求9所述的耗材套装，其特征在于，所述的耗材套装还含有第二容器，以及位于所述第二容器内的细胞培养插件，其中所述的细胞培养插件与所述第一容器中预置好的细胞培养插件的规格是相同的或不同的，所述规格按所述划痕挡板的截面积的大小和形状进行划分。
【文档编号】C12M1/22GK205635642SQ201620501797
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月27日
【发明人】王天哲, 王玉萍, 李彩红
【申请人】上海臻和生物科技有限公司