本发明涉及生化实验技术领域，尤其是涉及一种uvled固化载玻片封固方法。
背景技术：
在临床医疗中，常常通过对活体组织检查、细胞学检查或尸体剖检为临床提供明确的病理诊断，从而确定疾病的性质或查找出死亡原因。病理诊断需要将病理组织制成病理切片标本。病理切片标本的制作过程包括对病理组织进行取材、固定、水洗、脱水、浸蜡、包埋、切片、染色、封固等操作工序，而病理载玻片用于承载病理切片标本，供病理医生在显微镜下检查以作出病理诊断。
盖玻片是盖在载玻片上的材料上的，可以避免液体和物镜相接触，以免污染物镜，并且可以使被观察的细胞最上方处于同一平面，即：距离物镜距离相同，使观察到的图像更清晰。盖玻片比较薄，使用的过程中需要用镊子夹取，而且容易破碎，在使用安全上存在问题。同时盖玻片需要盖压到载玻片上，这对实验人员具有较高的技术要求，不仅要控制盖压的角度，还要求控制盖压的力度和速度，并保证盖压不能产生气泡，以免影响实验观察。
目前一般采用中性树胶与加拿大树胶为原料，通过将载玻片及盖玻片胶粘从而达到对病理切片进行粘固封藏。其中加拿大树胶呈酸性，一般混有一定质量的二甲苯或者苯。其在使用过程不能加热，否则树胶立即变成深褐色，影响封片后的观察，保存时树胶应贮存在棕色瓶内，避光保存，玻璃瓶口应密闭，以防蒸发凝固。也有使用中性树胶对载玻片进行封藏的。中性树胶是一种天然树脂，经提炼与中和后溶解在二甲苯中成60％溶液。使用中性树胶与加拿大树胶作为封存剂，在使用和保存上都具有一定的要求，最重要的是两种都需要配合溶剂二甲苯或者苯使用，这些溶剂属于有机溶剂，味道较大，会影响使用人员的身体健康。
紫外光固化技术将聚合物迅速的从液体转变成高性能的固体涂层，由于没有溶解挥发过程，被认定为环境友好的技术。广泛的应用在汽车工业、电子行业及通信等领域。中国专利cn20091001718.8、cn00815359.0、申请号200910154787.6等专利都涉及到使用uv光固化涂料及油墨，可以在玻璃上具有较好的附着力。
uv固化汞灯照射方式为主流，具有设备价格昂贵、维护成本高、uv光照强度衰减快使用寿命有限、能耗较大有效利用率不高、被照射元件的表面温升高等一系列缺点。uvled具有恒定的光照强度、优秀的温度控制、便携环保的特性，更有相对较低的采购成本和几乎为零的维护成本，对uv固化工艺的品质提升与节能降耗起到了推动作用。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种uvled固化载玻片封固方法；采用uvled固化封存病理切片，取代目前使用的中性树胶与加拿大树胶，解决树脂封存液因含有溶剂而对实验人员健康产生影响问题。也可以取代盖玻片，从而达到保护目镜的效果，并增加实验人员使用安全性。缩减载玻片制备工序，进一步提高载玻片制备自动化程度。成膜与载玻片附着性好，不容易滑落，且切片封存时间更长。
本发明为解决上述问题采用的技术方案是：
第一方面，本发明涉及一种用于uvled固化载玻片封固方法的uvled光固化液，所述uvled光固化液包括如下重量百分比含量的各组分：
优选的，所述uvled光固化丙烯酸酯树脂官能度为1～15官。
优选的，所述uvled光固化丙烯酸酯树脂选自环氧丙烯酸酯齐聚物、聚氨酯丙烯酸酯齐聚物、聚酯丙烯酸酯齐聚物、超支化丙烯酸酯树脂、纯丙烯酸树脂中的一种或几种的混合物。
其中，超支化是相对于线性聚合物的一种结构上的区分概念，可以理解是树枝状结构。
纯丙烯酸树脂是区别于环氧，聚氨酯，聚酯丙烯酸树脂的，因为这些树脂是有特殊的结构，如环氧基团、聚氨酯基团、聚酯基团，纯丙烯酸树脂则是分子结构上没有这些基团，也可以说是丙烯酸酯类和甲基丙烯酸酯类及其它烯属单体共聚制成的树脂。
本发明体系所选的uvled光固化丙烯酸酯树脂要具有较快的固化速度，同时在玻璃上具有一定的附着力。同时所选的uvled光固化丙烯酸酯树脂固化成膜后要具有较好的光透过率(≥90％)。更优选官能度≥2官的环氧丙烯酸酯齐聚物、聚氨酯丙烯酸酯齐聚物、聚酯丙烯酸酯齐聚物、超支化丙烯酸酯树脂中的一种或者几种。更为重要的是，所选的树脂uvled固化后表干性好。
优选的，所述光固化丙烯酸酯单体为单官能单体、双官能单体、三官能单体、四官及以上官能单体中的一种或几种的混合物。
本发明体系所选的光固化丙烯酸酯单体要具有较强的稀释能力，且气味低，对人体或者皮肤接触危害性小。更优选官能度≥2官的固化速度快的单体中的一种或者几种。最优选为：1、6-己二醇二丙烯酸酯酯、新戊二醇二丙烯酸酯酯、三羟甲基丙烷三丙烯酸酯酯中的一种或几种。
优选的，所述反应活性胺丙烯酸树脂可以是一元胺、二元胺、三元胺中的一种或者多种。
反应活性胺丙烯酸树脂，指的是参与固化反应的胺改性丙烯酸树脂。包括gc1000w(国精化学，1官反应活性胺丙烯酸树脂)、gc1100w(国精化学，2官反应活性胺丙烯酸树脂)、gu8100w(国精化学，4官反应活性胺丙烯酸树脂)。
优选的，所述光引发剂选自裂解型引发剂、夺氢型引发剂、阳离子光引发剂中的一种或几种的混合物。更优选光引发剂为tpo、819、907、itx，184、1173中的一种或几种。
优选的，所述助剂包括流平剂、基材润湿剂中的一种或几种。制备本发明体系的uvled光固化液时选用的助剂应该是能够满足uvled光固化液在载玻片上更好的铺展和流平；可以是降低体系表面张力的流平剂，也可以是增加与玻璃基材接触性的基材润湿剂。
优选的，所述流平剂为tegoflow300、byk-399、byk-358n、levaslip432中的一种或者多种；所述基材润湿剂为tego270、tego2100中的一种或者多种。
本发明体系的uv光固化液能够与细胞处理过程中用到的溶液，与乙醇、丙酮、二甲苯等溶剂有较好的相容性，且能够在含有较小比例的溶剂情况下，能够在uvled灯照射下固化，且不影响使用性能。
第二方面，本发明涉及一种uvled固化载玻片封固方法，所述方法包括如下步骤：将病理细胞经预处理后置于载玻片上，然后滴加前述的uvled光固化液，流平后在固化波长为365nm或395nm的uvled灯照射下固化。最终得到病理载玻片供病理医生在显微镜下检查以作出病理诊断，同时也可以对病理组织切片/薄层细胞进行长久的封存留样。
本发明体系的uvled光固化液滴在处理好后的细胞上，需要短暂的流平时间(流平时间＜5秒)，以保证固化后成膜表面光滑平整。固化后的涂层表面平整，无明显色泽，光透过率高，涂层具有较好的硬度，不容易脱落。
优选的，所述预处理包括：病理细胞的常规取材、固定、脱水、包埋、切片、染色。细胞处理较为复杂，其中涉及如有机溶剂对细胞进行处理，有机溶剂难免存在残留现象，因此，封片时，胶的选择要求更高，不仅要与有机溶剂具有良好的相容性，还要保证在少量有机溶剂混入的情况下能够快速固化。本发明采用特殊的树脂和单体设计，固化时间小于10s。且固化后的uv涂层具有更好的硬度、光透过率，同时uv涂层平整性好，最终达到可以直接取代二甲苯+中性树胶+盖玻片进行表面封固，光固化涂层后具有平整的对焦平面可以直接进行显微镜下观察。
优选的，所述uvled固化波长为365或者395nm。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1)相比传统的中性树脂封片，固化速度更快(<10秒)，固化过程不使用有毒的二甲苯，固化后成膜光泽度高，表面平整，且没有收缩变黄，纹裂等弊病，也没有氧化退色等缺点；因此，本发明提供的uvled固化封片方法可以取代传统的中性树脂-二甲苯-盖玻片封片，达到绿色环保(避免医生吸入有毒二甲苯)、保护病理组织切片/薄层细胞以及物镜的效果；
2)本发明采用特殊的配方设计，通过选择合适的树脂，赋予涂层较高的透光率，树脂和助剂搭配使用，保证体系具有较好的流动性，从而达到快速流平，提高平整度；制得的uv光胶层透光率高、平整度高，可完全取代盖玻片+中性树胶/加拿大树胶封片体系，工序更简单，操作方便快速；增加自动化程度；
3)uvled固化，更节能环保，固化速度更快，寿命长，即开即用，不需要预热；占用空间更小；
4)本发明提供的uvled固化封片方法可以取代传统的盖玻片，达到保护病理组织切片/薄层细胞和物镜的目的；并且成膜与载玻片附着性好，不容易滑落，且切片封存时间更长。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干调整和改进。这些都属于本发明的保护范围。
作为示例，以下实施例中，uv光固化丙烯酸酯树脂选用eb600(湛新树脂，2官双酚a环氧丙烯酸酯树脂)、day-0211(太亚化工，2官聚氨酯丙烯酸酯树脂)、eb800(湛新树脂，4官聚酯丙烯酸酯树脂)；gc1000w(国精化学，1官反应活性胺丙烯酸树脂)、gc1100w(国精化学，2官反应活性胺丙烯酸树脂)、gu8100w(国精化学，4官反应活性胺丙烯酸树脂)；光固化丙烯酸酯单体选用hdda(长兴，3官，1、6-己二醇二丙烯酸酯酯)、npgda(长兴，2官，新戊二醇二丙烯酸酯酯)、tmpta(长兴，2官，三羟甲基丙烷三丙烯酸酯酯)。
实施例1
1)制备uvled光油，由下述重量份的原材料组成：eb600(湛新树脂，2官双酚a环氧丙烯酸酯树脂)30％，hdda(长兴，3官)56.5％，gc1000w(国精化学，1官)8％，tpo(久日化学)5％，tego270(迪高，基材润湿剂)0.5％。各原材料在1500r/min转速下搅拌混合均匀。使用400目滤网过滤去除其中的杂质，备用。
2)细胞处理：使用常规的处理手段，对目前病理细胞进行取材、固定、脱水、包埋、切片、染色等过程。
3)固化：将处理好的病理细胞置于载玻片上，然后滴加uvled光油，经过短暂的流平后，切片放置395nm波长led灯下照射20s固化。
得到的病理切片表面平整，表面光亮。整体光透过率90％。涂层使用铅笔硬度计划线法测试，三菱铅笔，500g力，硬度达到2h。
实施例2
1)制备uv光油，由下述重量份的原材料组成：day-0211(太亚化工，2官聚氨酯丙烯酸酯树脂)40％，npgda(长兴，2官)39.5％，tmpta(长兴，2官)10％，gc1100w(国精化学，2官反应活性胺丙烯酸树脂)5％，907(久日化学)4％，itx(久日化学)1％，byk-399(毕克化学，流平剂)0.5％。各原材料在1500r/min转速下搅拌混合均匀。使用400目滤网过滤去除其中的杂质，备用。
2)细胞处理：使用常规的处理手段，对目前病理细胞进行取材、固定、脱水、包埋、切片、染色等过程。
3)固化，将处理好的病理细胞置于载玻片上，然后滴加uvled光油，经过短暂的流平后，切片经过395nm波长led灯下照射15s固化。
得到的病理切片表面平整，表面光亮。整体光透过率90％。涂层使用铅笔硬度计划线法测试，三菱铅笔，500g力，硬度达到h。
实施例3
1)制备uv光油，由下述重量份的原材料组成：eb800(湛新树脂，4官聚酯丙烯酸酯树脂)45.5％，hdda(长兴，2官)45％，gu8100w(国精化学，4官)3％；819(固润)1％，369(久日化学)4％，itx(久日化学)1％，tego2100(迪高，流平剂)0.5％。各原材料在1500r/min转速下搅拌混合均匀。使用400目滤网过滤去除其中的杂质，备用。
2)细胞处理：使用常规的处理手段，对目前病理细胞进行取材、固定、脱水、包埋、切片、染色等过程。
3)固化，将处理好的病理细胞置于载玻片上，然后滴加uv光油，经过短暂的流平后，切片经过365nm波长led灯下照射10s固化。
得到的病理切片表面平整，表面光亮。整体光透过率91％。涂层使用铅笔硬度计划线法测试，三菱铅笔，500g力，硬度达到2h。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。