一种筛选处理油田污水微藻的方法

一种筛选处理油田污水微藻的方法
【专利摘要】本申请涉及一种筛选处理油田污水微藻的方法，该方法包括如下步骤：(1)培养藻种并筛选；(2)分析各个藻种对污水的耐受性、降解性；(3)优势藻种的种属鉴别；(4)固定化藻种处理油田污水。通过耐污性比较、去污性分析，筛选出一种生存能力强且对污水处理效果最好的微藻，其来源于北京军都山，经显微拍照、形态学分析比对，判定此藻为普通小球藻；小球藻对油田污水中的共轭聚烯烃的降解效果最好、最稳定，对芳烃的有效降解时间短、降解率低，对COD的降解率也比较低，延长处理时间，芳烃、COD的浓度还会回升，故需要合理控制污水处理的时间，否则适得其反。
【专利说明】一种筛选处理油田污水微藻的方法

【技术领域】
[0001] 本申请涉及一种筛选微藻的方法，特别涉及一种筛选处理油田污水微藻的方法。

【背景技术】
[0002] 污水处理一般要经过三个过程：预处理，一级处理、二级处理。预处理主要是通过 格栅等设施去除污水中的大颗粒物质，之后通过一级处理（主要是物理、化学处理过程）、 二级处理（主要是生物化学处理），污水中的大部分有机物以及细菌、病毒等都达到了比较 好的去除效果，但当中往往还含有80 % -90 %的N和P，直接排出将会导致水体的富营养化。 因此，开发经济又高效的脱N除P又能降解一些有机污染物的污水处理方法成为当前国内 外研究的热点。
[0003] 大量研究表明，微藻可以有效、低成本地去除污水中N和P、降解有机物、吸附重 金属离子，微藻生长速度快、单位面积产量高，微藻藻体内含有丰富的蛋白质、维生素等，可 以作为保健品、饲料、饵料；微藻还可以用于生产生物柴油、沼气等，具有极大的潜在应用价 值。
[0004] 现在的微藻污水处理设施通常采用相对较深的池塘（l_6m)。水深过深会限制藻类 生产力，但生产力并不是影响处理目标（仅取出有机物和病原体）的关键因素。用于深度 处理（包括营养元素的去除）的池塘需要较高的藻类生产力。高生产力的藻类培养通常采 用浅反应器，如高效藻类塘（约30cm)。
[0005] 封闭式光生物反应器不是污水处理的讨论重点，因为他们只有在生产高价值产品 时才具备经济可行性，如每千克生物质的价值高于100美元，而这在污水培养中不可能实 现。与其他的藻类培养系统一样，微藻的收获是污水处理系统的关键步骤。标准方法是投 加化学药剂使藻细胞絮凝，再通过气浮或沉淀将藻细胞分离。对于生物能源的生产而言，化 学药剂的成本（〇. 1-0. 17美元/立方米）过高。而用固定化的微藻进行污水处理，处理稳 定、处理效果高，能显著地提高污水中N、P、C0D以及金属离子的降解率，又能解决微藻培养 收获难的问题，成为当前国内外研究的重点。
[0006] 由于目前固定化技术还不完善，所使用的固定化材料成本都很高，还没有适用于 微藻污水处理的高效的、具有一定规模的生物反应器，微藻污水处理目前都还处于试验室 研究阶段。


【发明内容】

[0007] 本申请的目的是提供一种筛选处理油田污水微藻的方法。
[0008] 本申请采用以下技术方案：
[0009] 本申请的一方面公开了一种筛选处理油田污水的微藻的方法，该方法包括：
[0010] (1)培养藻种并筛选；
[0011] (2)分析各个藻种对污水的耐受性、降解性；
[0012] (3)优势藻种的种属鉴别；
[0013] (4)固定化藻种处理油田污水。
[0014] 进一步的，筛选的藻类取自从自然界水体中采集的藻种，分别为军都山1、军都山 2、辽河油田、文竹。
[0015] 进一步的，培养藻种所用的培养基为淡水藻培养基为BG-11，咸水藻培养基为 D.M.培养基。
[0016] 进一步的，检测的水样以及购买的藻种，放置于散射光照下进行活化一周，之后每 个水样分为3大组，每隔2天分别滴加少量的检测污水进行驯化培养，待水样绿色较深时， 分别利用含有固体BG-11培养基、D. M.培养基的平板，采用涂布结合平板划线的方法，分 离、纯化出单一的具有一定耐污性的藻种菌落，之后通过逐级扩大培养的方式，对纯化的藻 种进行扩培，获得足量的藻液用于后续污水的处理及优化。
[0017] 进一步的，微藻对污水的耐受性主要通过测定微藻的比生长速率进行分析，比生 长速率根据以下公式进行计算：μ = (lnA-lnA0)/t。
[0018] 进一步的，耐受性检测方法的具体步骤如下：
[0019] (1)分别取预处理出水、二浮出水、一级水解酸化出水以及CAST出水等4个阶段的 污水，将污水摇匀后，进行3000rpm离心5min预处理，取上层液；
[0020] (2)将4种藻种离心后，取下层分别投加到待检测污水样品中，测定藻种的初始光 密度（0D680)。每个样品做三个平行；将含有污水和藻的三角瓶用封口膜封口后，放入恒温 光照培养箱内（lOOOLux ;连续光照；26°C )进行培养；
[0021] (3) 10天后，测定藻种的0D680,算出各藻种光密度增加百分比。
[0022] 进一步的，微藻对油田污水的降解性分析主要通过测定污水参数的变化，包括共 轭聚烯烃（225nm下吸光度表征）、芳烃（254nm吸光度表征）、COD、B0D5、总的固体悬浮物 (TSS)。
[0023] 进一步的，降解性检测方法具体步骤如下：测定前污水要经过预处理：空气压缩 机、真空抽虑瓶进行抽虑，4种藻种需培养到对数生长末期，3500rpm离心15min，去上清，将 藻泥投加到污水的250mL的三角瓶中，用封口膜封口后置于恒温光照摇床中进行培养，每 天测定〇〇、。!1、00(溶解氧） ；8000印1]1离心15111；[11后，利用0.45以1]1微孔滤膜过滤后取上清， 测定：0D225 (表征共轭聚烯烃）、0D254 (表征芳烃）、COD、TSS (总悬浮固体）。
[0024] 进一步的，藻种的种属鉴别采用形态学鉴定和分子生物学鉴定。
[0025] 进一步的，固定化藻种处理油田污水具体步骤如下：
[0026] (1)用BG-11培养基进行扩培，获得足够量的藻液，并绘制微藻的生长曲线；
[0027] (2)固定化藻的制备：配制质量分数5%的海藻酸钠溶液、质量分数3%的CaC12 溶液，将海藻酸钠溶液与一定光密度的藻液按照体积比1 :3的比例搅拌均匀后，用lmL移液 枪吸取逐滴滴入CaC12溶液中进行固定化，静置2个小时。
[0028] (3)用组装式生物反应器，在通空气（lL/min)状态下，考察微藻对油田污水的处 理效果。
[0029] 用新鲜BG-11培养液扩培后，分为等量的2份，其中一份进行固定化处理，另一份 继续悬浮，进行油田污水的降解性对比分析。实验数据表明，固定化处理的小球藻对油田污 水4个阶段出水的芳烃、共轭聚烯烃、C0D的降解率均高于悬浮藻液对污水的处理。
[0030] 小球藻对油田污水中的共轭聚烯烃的降解效果最好、最稳定，对芳烃的有效降解 时间短、降解率低，对COD的降解率也比较低，延长处理时间，芳烃、COD的浓度还会有所升 高，故需要合理控制污水处理的时间。
[0031] 藻类的收集比较困难，采用固定化技术可以克服这一困难，另外固定化微藻对污 水的处理能力高于悬浮态的微藻。

【专利附图】

【附图说明】
[0032] 附图1不同微藻的耐污性
[0033] 附图2微藻的显微照片
[0034] 附图3固定化微藻处理污水反应器

【具体实施方式】
[0035] 下面通过具体实施例并结合附图对本申请作进一步详细说明。以下实施例仅对本 申请进行进一步说明，不应理解为对本申请的限制。
[0036] 实施例一藻种的培养
[0037] 1、藻种的活化和驯化
[0038] 本申请中所用的藻种，来源于从自然界水体中采集的藻种，分别为军都山1、军都 山2、辽河油田、文竹。
[0039] 将这4种藻种，放置于散射光照下进行活化一周。之后每个水样分为3大组，每隔 2天分别滴加少量的检测污水进行驯化培养。
[0040] 2、培养基的制备
[0041] 将用报纸包扎好的培养皿、枪头、涂布棒、1.5mL离心管以及配制好的BG-11、 D. M.培养液分装入250mL的三角锥形瓶中，每100ml液体（95mL培养液，5mL污水）中加 1. lg琼脂，用封口膜封口后，放置于121°C高温下灭菌30min。
[0042] 本申请中所用的培养基为2种，淡水藻培养基为BG-11，其配方见表1 ;咸水藻培养 基为D.M.培养基，其配方见表2。
[0043] 表1BG-11培养基
[0044] 成分 用量 NaN〇3 1. 5 g K2HPO4 0.04 g MgS〇4 · 7H20 0.075 g CaCl, · 2H,0 0.036 g 梓檬酸 0. 006 g 梓檬酸铁铵 0. 006 g Na2EDTA 0.001 g Na2C03 0. 02 g 琼脂（固体培养基） 10.0 g As 1 mL 蒸馏水_l.o L_
[0045] 表2 D.M.培养基
[0046] 成分 用量 NaNO, 0.42 g NaCl 87.69 g NaH2P〇4 · 2H20 0. 156 g CaCl2 · 2H20 0. 044 g 丰宁檬酸（1%) 0. 5 mL KC1 0.074 g MgS〇4 · 7H20 1.23 g NaHCOa 0.84 g 琼脂（固体培养基） 10.0 g Ab 1 mL 蒸馏水_h〇_L_
[0047] 表3 A5组成成分
[0048] 成分 用量 ILBO； 2.86 g MnCL· · 4H,0 1.81 g ZnSO, · 7H,0 0. 222 g NaMo04 · 2H2O 0. 39 g CuS〇4 · 5H2〇 0. 079 g Co (NO,) 2 · 6H,0 0. 0494 g 蒸馏水_L〇_L_
[0049] 2、倒平板
[0050] 酒精擦拭超净工作台，将经高温灭菌的培养皿、枪头、涂布棒、离心管一同移入，打 开紫外灯，消毒20min。将灭菌冷却后的固体培养基放在微波炉内加热5min，在酒精灯火焰 形成的无菌区域内，趁热将培养基倒入培养皿中，使得培养基均匀地覆盖整个培养皿的底 部，厚度为刚没过皿底，一般l〇〇mL倒4个平板，冷却后将培养皿倒置。
[0051] 3、平板涂布法分离
[0052] 先将驯化后的藻液进行倍比稀释，本发明采用10倍系列稀释，具体操作如下：
[0053] 用100 μ L移液枪吸取100 μ L的经过富集的藻液，打入1. 5mL的灭菌的离心管中， 再吸取900 μ L经过灭菌的BG-11或者D. M.培养液，吹打均匀，该浓度为原来的ΚΓ1，然后 再用移液枪吸取100 μ L浓度为ΚΓ1的藻液，打入1. 5mL的灭菌离心管中，吸取900 μ L灭菌 的培养液，吹打均匀，此时得到的浓度为原来的1〇_2,用此方法不断进行稀释，直至得到浓度 为原液1(Γ 4的藻液。
[0054] 分别吸取100 μ L的稀释度为ΚΓ1、1(Γ2、10' ΚΓ4的藻液，滴在相应的含5%污水体 积比的固体培养基表面，将涂布棒放在酒精灯火焰上灼烧并冷却后，用其将藻液涂布均匀， 盖上培养皿，用膜封好口，放在光照培养箱中进行培养：温度为26°C，光周期为16h :8h。
[0055] 4、平板划线法进行纯化
[0056] 不定时的查看平板上藻的生长状况，6-7天之后发现培养基表面长出许多颜色、大 小不尽相同的藻落，用灭菌接种环挑取分散度高、某种形态占优势的单一藻落，在新的固体 培养基表面进行划线，每次划3道，放在火焰上灼烧，再通过第一次划线区以70度左右的夹 角，换一个方向进行第二次划线。然后用同样的方法做第三次划线。
[0057] 盖上培养皿，用膜封口后，置于光照培养箱中进行培养，温度为26°C，光周期为 16h :8h。5天之后发现第一、第二划线区的菌落较密集，第三划线区有零星的、孤立的菌落。
[0058] 5、平板划线保存
[0059] 将制有网格的滤纸贴于培养皿的底部，用灭菌的牙签挑取纯化后的藻的单一菌 落，在酒精灯火焰下，在相应网格对应的固体培养基内划线，每个菌落对应3个短线，盖上 培养皿封好口后，放于光照培养箱内培养，至变绿为止，之后放在4°C冰箱内进行保存。
[0060] 6、逐级扩大培养
[0061] 从4°C冰箱内取出保存的含有纯化藻种的平板，置于光照培养箱内培养1天，进 行活化；用经过酒精灯火焰灼烧的镊子夹住灭菌的牙签，从活化后的平板上刮取藻，投入 装有新鲜无菌培养液的试管中，塞上试管塞，置于恒温光照摇床上培养，温度26. 0°C，转 速llOrpm，光周期为24h :0h，光强lOOOLux。当试管内的液体呈现绿色时，取4mL藻液， 16mL培养液加入到50mL的三角瓶中，用封口膜封口后置于恒温光照摇床中进行培养，温度 26. 0°C，转速llOrpm，光周期为24h :0h，光强lOOOLux。当藻液的颜色变为浓绿，藻的密度 比较大时，进行进一步扩培。取30mL藻液，120mL培养液加入到250mL的三角瓶中，封口膜 封口后置于光照培养箱中进行培养，温度26. 0°C，光周期为16h :8h，光强2000Lux。每天定 时手动摇动3次，以补充生长所需的C02。
[0062] 7、液态保藏
[0063] (1)在无菌条件下，先后吸取500 μ L甘油、500 μ L藻液，加入1. 5mL的无菌离心管 中，置于冰箱中冷冻保藏，保藏6个月左右；
[0064] (2)无菌条件下吸取5mL藻液，加入到无菌的小试管中，并置于4°C冰箱内保存，保 存时间1-2个月，该保存方法适于微藻的快速复壮与培养。
[0065] 实施例二辽河油田污水水处理
[0066] 本申请采用的污水来源于辽河油田，包括4个处理阶段，分别是：预处理出水、二 浮出水、一级水解酸化出水以及CAST出水，其基本水质情况如表4所示，指标测定前进行了 抽滤预处理。
[0067] 表4辽河油田污水水质参数
[0068] C0D 硫化物"""共轭聚烯 芳香经 NH4+-N ~ 7 a Η Φ (mg/L) (mg/L)烃（mg/L) (mg/L) (mg/L) P 预处理出水 1018 0.816 6.096 1.748 46.4 7. 71 二浮出水 894 0.604 5.784 0.438 38.6 8.01 一级水解酸化 ,, 612 0.486 5,376 0.304 32.8 8. 12 出水 CAST 出水 386 0.268 5.136 0.194 18.2 8.19
[0069] 1、微藻对污水耐受性分析
[0070] 微藻对污水的耐受性主要通过测定微藻的比生长速率进行分析。比生长速率根据 以下公式进行计算：μ = (lnA-lnAO)/t,
[0071] 其中A表示某一天所测得的0D值，A0表示最初接种后的0D值，μ代表比生长速 率，t代表时间（一般以天作为单位）。
[0072] 根据公式可以看出，通过测定特定时间内微藻的光密度比值或者增长率也可以用 来分析耐污性，具体步骤如下：
[0073] (1)分别取预处理出水、二浮出水、一级水解酸化出水以及CAST出水等4个阶段的 污水，将污水摇匀后，进行3000rpm离心5min预处理，取上层液；
[0074] (2)将4种藻种离心后，取下层分别投加到污水样品中，测定藻种的初始光密度 (0D680)。每个样品做三个平行；将含有污水和藻的三角瓶用封口膜封口后，放入恒温光照 培养箱内（lOOOLux ;连续光照；26°C )进行培养；
[0075] (3)10d后，测定藻种的0D680,算出藻种光密度增加百分比。
[0076] 结果如图1所示，来自军都山2的微藻在4个阶段的污水中，其光密度增长率均高 于其它微藻，而其它3种微藻在各个阶段的0D增长率各有所长，需通过污水降解率分析进 一步确认出目标藻种。
[0077] 2、微藻对污水降解性分析
[0078] 微藻对油田污水的降解能力主要通过测定污水参数的变化，包括共轭聚烯烃 (22511111下吸光度表征）、芳烃（25411111吸光度表征）、0)0、8005、总的固体悬浮物〇^5)等。
[0079] 测定前污水要经过预处理：空气压缩机、真空抽虑瓶进行抽虑。耐污筛选所得的藻 种需培养到对数生长末期，3500rpm离心15min，去上清，将藻泥投加到含有污水的250mL的 三角瓶中，用封口膜封口后置于恒温光照摇床中进行培养，每天测定〇D、pH、D0 (溶解氧）； 8000rpm离心15min后，利用0. 45 μ m微孔滤膜过滤后取上清，测定：0D225 (表征共轭聚烯 烃）、0D254 (表征芳烃）、COD、TSS (总悬浮固体）。根据降解率，筛选出1种去污效果好的 微藻。其中共轭聚烯烃、芳烃浓度的测定方法：
[0080] (1)萃取原油：取20mL水样倒入50mL离心管内，加入10mL正己烧，振荡均匀， 8000r/min离心10min，上清（原油、正己烧）倒入三角瓶，再用10mL正己烧洗漆离心管2 次，洗涤液全并入三角瓶，将三角瓶内溶液倒入新的离心管，再次离心，取上层液，用无水硫 酸钠过滤，低温冰箱内保存；
[0081] ⑵绘制标准曲线：共轭聚烯烃、芳烃在紫外波段分别有两个特征吸收峰 (225nm)、（254nm)，用萃取的原油进行倍比稀释，分别在波长225nm、254nm处测定0D，以浓 度为纵坐标，吸光度为横坐标，绘制浓度-吸光度的标准曲线；
[0082] (3)用紫外分光光度计分别在这2个波长下测量吸光度，代入标准曲线，求出浓 度。
[0083] 芳烃浓度与A254、共轭聚烯烃浓度与A225之间的关系方程，分别为：y = 3·4639χ+0· 1116、y = 10.339χ-0· 1175。
[0084] 从实验结果显示，来自军都山2的微藻藻株对预处理出水中芳烃、共轭聚烯烃以 及C0D的降解能力均比其他藻株降解能力强。预处理出水阶段污水处理的目标藻种考虑选 择军都山2。
[0085] 从实验结果显示，来自军都山2的微藻藻株对二浮出水中芳烃、共轭聚烯烃以及 C0D的降解能力均比其他藻株降解能力强。二浮出水阶段污水处理的目标藻种考虑选择军 都山2。
[0086] 从实验结果显示，来自军都山2的微藻藻株对一级水解酸化出水中芳烃、共轭聚 烯烃以及C0D的降解能力均比其他藻株降解能力强。一级水解酸化出水阶段污水处理的目 标藻种考虑选择军都山2。
[0087] 从实验结果显示，来自军都山2的微藻藻株对CAST出水中芳烃、共轭聚烯烃以及 C0D的降解能力均比其他藻株降解能力强。CAST出水阶段污水处理的目标藻种考虑选择军 都山2。
[0088] 综上所述，来自军都山2的微藻藻株对辽河油田污水4阶段出水（预处理出水、二 浮出水、一级水解酸化出水、CAST出水）中芳烃、共轭聚烯烃以及C0D的降解能力都普遍高 于其它3个来源的微藻，故选择来源于军都山2的微藻作为目标藻种，进行种属鉴定、扩培。
[0089] 3、优势藻种的种属鉴定与扩培 [0090] (1)形态学鉴定
[0091] 显微镜观察微藻形态，根据胡鸿钧、魏印心编著的《中国淡水藻类一系统、分类及 生态》一书，对微藻进行形态学鉴定。所用的显微镜为Olympus BX41，放大倍数为400倍。
[0092] 图2为该藻种在液体BG-11中（培养液呈翠绿色）生长时的显微照片。将其形态、 结构与《中国淡水藻志》中的藻类图片进行比对，该藻隶属于绿藻门（Chlorophyta)，绿球藻 目（Chlorococcales)，小球藻属（Chlorella)。
[0093] (2)分子生物学鉴定：
[0094] 形态学难以确定的，提取藻18S rDNA、16S rDNA基因，PCR扩增后测定核酸序列， 并进行核酸序列分析。
[0095] 4、固定化微藻处理油田污水
[0096] (1)用BG-11培养基进行扩培，获得足够量的藻液，并绘制微藻的生长曲线；
[0097] (2)固定化藻的制备：配制质量分数5%的海藻酸钠溶液、质量分数3%的CaC12 溶液，将海藻酸钠溶液与一定光密度的藻液按照体积比1 :3的比例搅拌均匀后，用lmL移液 枪吸取逐滴滴入CaC12溶液中进行固定化，静置2个小时。
[0098] (3)用组装式生物反应器，在通空气（lL/min)状态下，考察微藻对油田污水的处 理效果。
[0099] 组装反应器：1L的试剂瓶+碳棒+空气压缩机+空气流量计+阀门，如图3所示。
[0100] 本发明中所用的250mL的锥形瓶，瓶口用封口膜封口，封口膜可以允许空气的流 通，阻止细菌的进入。在实验开始前，反应瓶、封口膜均需要在121°C灭菌30min。
[0101] 比较悬浮与固定化去污效果，从实验结果显示，悬浮态小球藻与固定化小球藻对 预处理出水中的芳烃组分的降解率均在第7天达到最大值，分别为52. 54%、69. 78%。固定 化小球藻的降解率一直高于悬浮状态下的小球藻的降解率。
[0102] 从实验结果显示，悬浮态小球藻与固定化小球藻对预处理出水中的共轭聚烯烃组 分的降解率均在第7天达到最大值，分别为59. 75%、88. 02%。固定化小球藻的降解率一直 高于悬浮状态下的小球藻的降解率。
[0103] 从实验结果显示，悬浮态小球藻与固定化小球藻对预处理出水中C0D的降解率分 别在第7、6天达到最大值，分别为32. 21 %、37. 14%。固定化小球藻的降解率一直高于悬浮 状态下的小球藻的降解率。
[0104] 从实验结果显示，悬浮态小球藻与固定化小球藻对二浮出水中的芳烃组分的降解 率均在第3天达到最大值，分别为35. 90%、40. 13%。固定化小球藻的降解率一直高于悬浮 状态下的小球藻的降解率。
[0105] 从实验结果显示，悬浮态小球藻与固定化小球藻对二浮出水中的共轭聚烯烃组分 的降解率均在第7天达到最大值，分别为71. 06%、87. 44%。固定化小球藻的降解率一直高 于悬浮状态下的小球藻的降解率。
[0106] 从实验结果显示，悬浮态小球藻与固定化小球藻对二浮出水中的C0D的降解率均 在第7天达到最大值，分别为32. 21 %、37. 13%。固定化小球藻的降解率一直高于悬浮状态 下的。
[0107] 从实验结果显示，悬浮态小球藻与固定化小球藻对一级水解酸化出水中的芳烃的 降解率均在第3天达到最大值，分别为14. 31 %、25. 44%。固定化小球藻的降解率一直高于 悬浮状态下的小球藻的降解率。
[0108] 从实验结果显示，悬浮态小球藻与固定化小球藻对一级水解酸化出水中的共轭聚 烯烃的降解率均在第7天达到最大值，分别为69. 16%、86. 42%。固定化小球藻的降解率一 直高于悬浮状态下的小球藻的降解率。
[0109] 从实验结果显示，悬浮态小球藻与固定化小球藻对一级水解酸化出水中的C0D的 降解率均在第7天达到最大值，分别为30. 07%、39. 87%。固定化小球藻的降解率一直高于 悬浮状态下的小球藻的降解率。
[0110] 从实验结果显示，悬浮态小球藻与固定化小球藻对CAST出水中的芳烃的降解率 均在第3天达到最大值，分别为5. 38%、13. 69%。固定化小球藻的降解率一直高于悬浮状 态下的小球藻的降解率。
[0111] 从实验结果显示，悬浮态小球藻与固定化小球藻对CAST出水中的共轭聚烯烃的 降解率均在第7天达到最大值，分别为75. 84%、82. 90%。固定化小球藻的降解率一直高于 悬浮状态下的小球藻的降解率。
[0112] 从实验结果显示，悬浮态小球藻与固定化小球藻对CAST出水中的C0D的降解率均 在第7天达到最大值，分别为25. 13%、30. 83%。固定化小球藻的降解率一直高于悬浮状态 下的小球藻的降解率。
[0113] 综上所述，固定化状态的小球藻对油田污水的降解性（包括对芳烃、共轭聚烯烃、 C0D的降解）高于悬浮状态的小球藻的降解能力，这可能是因为固定化的藻比悬浮态的藻 抗逆性强、稳定性高，另外固定化材料本身也有一定的吸附能力；
[0114] 小球藻对共轭聚烯烃的降解性较好，一般都在70?90%之间；而对芳烃的降解有 效时间较短（3天左右），降解能力较差，甚至之后芳烃的浓度反而上升，这可能是因为芳烃 难于生物降解，微藻短时间内表现出来的降解能力主要是通过细胞吸附方式达到的，随着 时间的延长，吸附的成分又会释放到溶液中；对C0D的降解力也不是很高，超不过50%，显 示出微藻在C0D的降解上还有较大的局限性，最好与细菌等构建藻菌共生体系来提高对污 水的降解能力。
[0115] 以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明，不能认定本申 请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属【技术领域】的技术人员来说，在不脱离本 申请构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本申请的保护范围。
【权利要求】
1. 一种筛选处理油田污水微藻的方法，其特征在于，该方法包括： (1) 培养藻种并筛选； (2) 分析各个藻种对污水的耐受性、降解性； (3) 优势藻种的种属鉴别； (4) 固定化藻种处理油田污水。
2. 根据权利要求1所述的筛选处理油田污水微藻的方法，其特征在于，筛选的藻类取 自从自然界水体中采集的藻种，分别为军都山1、军都山2、辽河油田、文竹。
3. 根据权利要求1或2所述的筛选处理油田污水微藻的方法，其特征在于，培养藻种所 用的培养基为淡水藻培养基为BG-11，咸水藻培养基为D. M.培养基。
4. 根据权利要求3所述的筛选处理油田污水微藻的方法，其特征在于，将检测的水样 和购买的藻种，放置于散射光照下进行活化一周，之后每个水样分为3大组，每隔2天分别 滴加少量的检测污水进行驯化培养，待水样绿色较深时，分别利用含有固体BG-11培养基、 D.M.培养基的平板，采用涂布结合平板划线的方法，分离、纯化出单一的具有一定耐污性的 藻种菌落，之后通过逐级扩大培养的方式，对纯化的藻种进行扩培，获得足量的藻液用于后 续污水的处理及优化。
5. 根据权利要求1或2所述的筛选处理油田污水微藻的方法，其特征在于，微藻对污水 的耐受性主要通过测定微藻的比生长速率进行分析，比生长速率根据以下公式进行计算： μ = (lnA_lnAO)/t。
6. 根据权利要求5所述的筛选处理油田污水微藻的方法，其特征在于，具体步骤如下： (1) 分别取预处理出水、二浮出水、一级水解酸化出水以及CAST出水等4个阶段的污 水，将污水摇匀后，进行3000rpm离心5min预处理，取上层液； (2) 将4种藻种离心后，取下层分别投加到待检测污水样品中，测定藻种的初始光密度 0D680,每个样品做三个平行；将含有污水和藻的三角瓶用封口膜封口后，放入恒温光照培 养箱内，设置lOOOLux，连续光照，26°C进行培养； (3) 10d后，测定藻种的0D680,算出各藻种光密度增加百分比。
7. 根据权利要求1或2所述的筛选处理油田污水微藻的方法，其特征在于，微藻对油田 污水的降解性分析主要通过测定污水参数的变化，包括共轭聚烯烃、芳烃、COD、B0D5、总的 固体悬浮物TSS。
8. 根据权利要求7所述的筛选处理油田污水微藻的方法，其特征在于，具体步骤如下： 测定前污水要经过预处理：空气压缩机、真空抽虑瓶进行抽虑，4种藻种需培养到对数生长 末期，3500rpm离心15min，去上清，将藻泥投加到污水的250mL的三角瓶中，用封口膜封口 后置于恒温光照摇床中进行培养，每天测定〇D、pH、溶解氧DO ;8000rpm离心15min后，利用 0. 45 μ m微孔滤膜过滤后取上清，测定：表征共轭聚烯烃0D225、表征芳烃0D254、COD、总悬 浮固体TSS。
9. 根据权利要求1或2所述的筛选处理油田污水微藻的方法，其特征在于，优势藻种的 种属鉴别采用形态学鉴定和分子生物学鉴定。
10. 根据权利要求1或2所述的筛选处理油田污水微藻的方法，其特征在于，固定化藻 种处理油田污水具体步骤如下： (1)用BG-11培养基进行扩培，获得足够量的藻液，并绘制微藻的生长曲线； ⑵固定化藻的制备：配制质量分数5%的海藻酸钠溶液、质量分数3%的CaC12溶液， 将海藻酸钠溶液与一定光密度的藻液按照体积比1 :3的比例搅拌均匀后，用lmL移液枪吸 取逐滴滴入CaC12溶液中进行固定化，静置2个小时； (3)用组装式生物反应器，在通空气lL/min状态下，考察微藻对油田污水的处理效果。
【文档编号】C02F3/32GK104232490SQ201410350549
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年7月22日 优先权日:2014年7月22日
【发明者】傅鹏程 申请人:浙江山诺生物科技有限公司