用于改善水产养殖池塘水质的方法与流程

本申请要求于2014年5月23日提交的基于35U.S.C.§119(e)的美国临时申请系列号62/002,476的权益。本发明的
背景技术：
：在美国专利和商标局中用于改善水产养殖池塘水质的方法
技术领域：
本发明涉及水产养殖池塘水的处理以降低水生牲畜应用(waterlivestockapplication)中的有机废弃物、氨和疾病压力。
背景技术：
水产养殖指的是饲养用作为人类或动物食物来源的水生物种。该技术对所饲养物种的自然条件施加一些类型的控制以改善总产量。这可以包括物种的人为孵化以增加野生动物的商业性收获，孵化和饲养围塘中的物种，以及孵化和饲养邻近于海岸线的潮汐排干的封闭区域中的物种。与该过程相关的问题包括：污染物从饲养设施中排出并且将劣化周围的水质；由于在饲养设施中的水质的劣化而损失了产物；以及与饲养设施中致病微生物相关的疾病压力的增加。可以通过检测或监测包括pH、导电性、氨、硝酸盐、磷酸盐和碱度的各种参数鉴定这些问题。导电性是盐含量的指标，大于1200ppm的量将不再被认为是新鲜的水；理想的量是700ppm以及300-1200ppm的范围。氨水平测量对于鱼的有效氧的量。高水平的氨阻止氧在鱼体内从腮至血液的传递；然而，其也是它们的代谢废弃物的产物。尽管来自鱼废弃物的氨通常没有足够地浓度以对它们本身有毒，但是由于每个池塘的高浓度的鱼，鱼养殖者必须紧密地监控氨水平。通过池塘中的硝化细菌消耗氧，其将有毒的氨分解成无毒形式；然而，这种氧的大量使用降低了可用于被鱼吸收的氧。氨水平>1ppm被认为对鱼生命有毒。此外，测验硝酸盐水平以测定水中的植物肥料的量。周围土壤可高度浸出硝酸盐，并且可能对小孩和孕妇有害。硝酸盐在胃肠道中变成亚硝酸盐并与血液携带氧的能力相互作用。硝酸盐的最大污染程度是10ppm。碱度是在不改变pH的情况下池塘或湖泊的中和酸的能力的测量。由于细菌，碱度将随着时间降低；然而，理想的水平是100ppm，其中可接受的范围为50-200ppm。在池塘和湖泊中发现的磷酸盐主要来自于人类和动物废弃物。肥料流出是在高尔夫球场和装饰性池塘中发现的磷酸盐的主要来源。升高的水平导致富营养化的速率增加，反过来增加污泥的产生。中等水平的磷酸盐可以刺激植物生长，导致藻类生产的增加；>0.1ppm的水平是促进植物生长的指标并且被认为是外部可接受的水平。解决这些问题的现有技术包括生物修复(bioremediation)、抗生素和化学添加剂。典型的生物修复技术包括将补充的细菌施应用至水中以增强微生物活性从而改善水质。还已知使用硝化细菌来增强硝化过程，以将有毒的氨转化成无毒的硝酸盐。添加化学添加剂以改善水质并且通过提供额外的营养素和碱度以帮助微生物的活性。添加抗生素以抑制病原微生物的生长。与现有技术相关的问题包括高成本以及具有非活性补充细菌的差的水质改善性能、由于有机废弃物的存在和缺乏硝化细菌生长位点的低硝化活性、在饲养的水生物种中抗生素的生物累积。技术实现要素：本发明的方法提供了成本有效的途径以将活性细菌递送至在水产养殖设施中的池塘水(或养殖池)，从而在没有生物累积的情况下降解有机废弃物且抑制致病微生物的生长。本发明的方法降低在水生牲畜中的疾病压力，导致了在水产养殖操作中养殖物种的改善的产量。如在本文中公开的作为本方法的部分的硝化增强剂的添加提供了稳定的碱度源以及用于硝化细菌的额外生长位点以促进硝化活性和氨还原。本发明的方法期望地包括使用固体细菌初始材料，将可选地包括益生菌，最优选产生自现场的生物反应器的活性细菌递送至水产养殖应用内。例如，在美国专利第6,335,191；7,081,361；7,635,587；8,093,040；和8,551,762号中公开了那些生物反应器以及它们的使用方法，通过引证将它们的内容合并至本公开中以帮助本发明的实践。此外，如在提交于2014年10月27日的美国申请系列号14/524,858中公开的益生菌组合物和递送体系是优选的益生菌组合物和用于该组合物的递送体系，通过引证将其合并至本文，但是也可以使用其他的益生菌和递送体系。在将其排出至饲养池内之前，可以将从生物反应器排出的活性的细菌繁殖体(vegetativebacteria)直接地供给至饲养池或者可以将其累积且用池塘水或另外相似的合适稀释液(如来自城市水系统的水)进行稀释。如果生物反应器位于饲养池的一定距离处，那么稀释可以帮助处理溶液从生物反应器流至饲养池的递送。在不需要添加(或减少其的量)在饲养池中使用的化学处理以及抗生素的情况下，活性细菌将降解有机废弃物且抑制在水产养殖设施中的水中的致病微生物的生长。本发明还期望地包括同时期地将至少一种硝化增强剂施加至饲养池。硝化增强剂增加天然发现于水中的硝化细菌的活性以降低氨水平。这些硝化剂包含对硝化所必需的增加水的碱度的碱度增强剂(7份碱度对应于1份氨)和/或添加用于硝化细菌生长的表面的表面积改性剂，由于硝化细菌生长为生物膜且需要它们可以附着的表面。碱度增强剂可以包括，例如，碳酸钙、石灰质海草或其他相似的有效添加剂。可以以高于溶解的量添加这些试剂以在它们缓慢溶解时提供碱度的持续来源。某些硝化剂，如石灰质海草，通过提供碱度和大的表面积的两者，海草作为碱度增强剂和表面积改性剂的两者，从而提供用于硝化细菌生长的生物膜的支撑表面。石灰质海草还作为细菌的微量营养素的来源。其他的硝化增强剂仅作为表面积改性剂，如塑料或金属片，或者其他相似的有效材料，以在可能发生的有利反应和相互作用的挤出基础上增加表面积。也可以将仅作为表面积改性剂(且没有碱度增强物)的一种或多种试剂单独地或优选地与一种或多种碱度增强剂的组合添加至饲养池；然而，仅作为表面积增强物的试剂在饲养池中将不会降解，且将不会与每批的细菌溶液同时添加。将仅作为表面积改性剂的这些试剂优选地仅一次添加至饲养池。基于周期性，如季节性地(每季一次或每个夏季一次、一年两次等)或根据需要，将作为碱度增强剂的试剂与一批细菌同时添加至饲养池。如本文中使用的，术语“同时”旨在表示“在或约”将一批细菌繁殖体和其他组分或试剂添加至饲养池或其他的生长培养基的时间，其中水产物种在水产养殖设施中生长。附图说明在以下附图中示出了图表显示的实验室研究的结果：图1是硝酸盐水平的图；图2是正硝酸盐水平的图；图3是浊度的图。具体实施方式适合用于本发明方法的细菌属被认为是包括以下属中的一种或多种种类：芽孢杆菌属(Bacillus)、拟杆菌属(Bacteriodes)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、明串珠菌属(Leuconostoc)Lueconostoc、片球菌属(Pediococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、巨型球菌属(Megasphaera)、假单胞菌属(Pseudomonas)和丙酸杆菌属(Propionibacterium)。可以在现场产生的益生菌包括以下中的任何一种或多种：嗜淀粉芽孢杆菌(Bacillusamylophilus)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、栖瘤胃拟杆菌(Bacteriodesruminocola)、栖瘤胃拟杆菌(Bacteriodesruminocola)、猪拟杆菌(Bacterioidessuis)、青春双歧杆菌(Bifidobacteriumadolescentis)、动物双歧杆菌(Bifidobacteriumanimalis)、两岐双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)、长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)、嗜热双歧杆菌(Bifidobacteriumthermophilum)、乳脂肠球菌属(Enterococcuscremoris)、双醋酸乳酸肠球菌(Enterococcusdiacetylactis)、屎肠球菌(Enterococcusfaecium)、中间肠球菌(Enterococcusintermedius)、乳酸肠球菌(Enterococcuslactis)、噬热肠球菌(Enterococcusthermophiles)、短乳杆菌(Lactobacillusbrevis)、布氏乳杆菌(Lactobacillusbuchneri)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillusbulgaricus)、干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)、纤维二糖乳杆菌(Lactobacilluscellobiosus)、弯曲乳杆菌(Lactobacilluscurvatus)、德氏乳杆菌(Lactobacillusdelbruekii)、香肠乳杆菌(Lactobacillusfarciminis)、发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)、瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)、乳酸乳杆菌(Lactobacilluslactis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)、肠膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)、埃氏巨型球菌(Megasphaeraelsdennii)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilacticii)、啤酒片球菌(Pediococcuscerevisiae)、戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)、产丙酸丙酸杆菌(Propionibacteriumacidipropionici)、费氏丙酸杆菌(Propionibacteriumfreudenreichii)和谢氏丙酸杆菌(Propionibacteriumshermanii)。用于本发明的方法的令人满意的细菌生长和递送设备将包括如以上引用的现场的生物反应器或者用于细菌的任何其他相似的有效来源。最优选地，现场的生物反应器使用固体细菌初始材料以产生被排出至饲养池中的细菌溶液，其中该溶液优选地具有约1×109-1×1010cfu/mL的细菌繁殖体物种。可以提供多个生物反应器以提供大量的细菌至饲养池，从而提供不同种类的细菌至饲养池或者以不同的时间或速率，或者围绕饲养池周边分隔所排出的细菌溶液以帮助池塘内的细菌分散。也可以将泵或其他混合设备添加至饲养池(如果没有已经就位)以帮助细菌溶液(以及硝化增强剂或表面积增强剂)在整个饲养池内的分散。将现场的生物反应器优选地配置为包含一定量的固体或液体形式的细菌初始材料且混合有营养素，使得在初始材料需要被补充之前，可以将多批细菌溶液以周期性间隔在延长的时间的时期内排出。例如，生物反应器可以保持约37克的含1×108cfu/g的初始材料以排出含约1×1010cfu/mL的细菌溶液每24小时一次，持续60天。将营养素和水与初始材料一起添加至生物反应器中，以使将被周期性地排出至饲养池的一批细菌生长。最优选地，将无菌的或处理过的水(如来自城市水供给的可饮用的水)的来源用于提供生物反应器的水。也可以使用现场的水源，如饲养池，但是已经存在于水中的细菌(甚至来自城市水供给的水中的低水平的细菌)在生物反应器中生长时可以与初始材料中的细菌竞争，导致了较低cfu/ml批的有利细菌且导致了有害细菌的增殖。优选的初始材料是分别商售自EcoBionics和FlexFill的FREE-FLOW粒料或FREE-FLOW液体以及BioAmp营养素，但是根据期望的细菌种类，也可以使用其他的初始材料。在处理周期的过程内，优选地每12至36个小时一次且最优选地约每24小时一次将细菌溶液从生物反应器或多个生物反应器排出至饲养池。最优选地，约每24小时一次的给予约3000mL的含约1×1010cfu/mL的细菌溶液将足以处理含100,000加仑的水的饲养池。本领域中的普通技术人员将理解，可以使用其他体积的细菌溶液和给予间隔以处理不同大小的饲养池。利用在整年运行的生物反应器，处理周期优选地是连续的(不同于用于维持或补充细菌初始物和营养素的周期性关闭)。本领域的普通技术人员将理解的是，根据池塘中的条件、所包括的水产物种、饲养池的温度及其他因素，可以使用其他的给予间隔和细菌溶液的量。在生物反应器中现场产生的细菌可以包括一种或多种益生菌。除了在生物反应器中现场产生的细菌之外，可以将在水(最优选无菌水)中的包含任何已知的益生菌(如地衣芽孢杆菌、短小芽胞杆菌或枯草芽孢杆菌)的益生菌溶液、适合于动物和水产物种摄取的表面活性剂(如聚山梨酸酯80)、防腐剂(如山梨酸、山梨酸钾、山梨酸钠、山梨酸钙、苯甲酸钠或苯甲酸)和增稠剂(如瓜尔胶或黄原胶)添加至饲养池。在提交于2014年10月27日的美国申请系列号14/524,858中公开了这类益生菌组合物以及用于那些组合物的递送方法，通过引证将其结合至本文中。优选同时添加一种或多种硝化增强剂与排出至饲养池的至少一种剂量(或批)的细菌溶液。可以周期性地，如季节性地或根据需要并且不与每种剂量的细菌一起添加包括碳酸钙或石灰质海草的碱度增强剂。可以以高于溶解的量添加该试剂以在它们缓慢溶解时提供碱度的持续来源。缓慢溶解的碱度增强剂，如石灰质海草，还作用为表面积改性剂，以提供用于硝化细菌生长的生物膜的支撑表面，并且它们还帮助营养素的递送。此外，可以根据需要将仅用作表面积改性剂的试剂(如金属或塑料的片)与一批或一剂量的细菌溶液和一种或多种碱度增强剂一起添加至饲养池以降低氮或磷，但是优选地仅添加一次且不与每种剂量的细菌溶液一起添加。这些表面增强剂相似地提供用于所添加的细菌生长的生物膜的支撑表面，其帮助有利细菌更快的发展。最优选地，每7.5百万加仑的饲养池添加约100磅的这种硝化增强剂，并且对于其他的饲养池体积该量可以是依比例的。用于硝化增强剂的优选的分散方法可以包括使用至饲养池中的水的自动化设备或手动应用。用于播撒或另外地分散至少一种以小球、粒料或粒料的形式的硝化增强剂的自动化或手动操作的设备是商业可获得的，并且对本领域的技术人员是熟知的。此外，可以使用自分散添加剂体系和方法将这些硝化增强剂分散于池塘中，其使用在提交于2015年4月17日的美国专利申请系列号14/689,790中所描述的水溶性封装中的泡腾材料以及处理剂，通过引证将其结合于此。用于本发明的方法的合适的应用包括，例如且不限于各种类型的水产养殖应用，如孵化场、池塘和潮汐流动水产养殖。优选现场生长的细菌繁殖体与至少一种硝化增强助剂如碳酸钙、石灰质海草或对于水产养殖应用中使用的水的成本有效处理相似有效的另一种材料组合使用，以解决有机废弃物、氨和致病微生物以及常规的水质问题。通过添加石灰质海草或其他塑料或金属片、粒料或片段(增加在其上可以发生相互相用或反应的可获得的表面积)，认为进一步地增强了用于实现这些目标的目的方法的有效性。进行实验室研究以评估将有利细菌和硝化增强剂添加至池塘水的利益。研究的一个目的是评估所添加的细菌(可商购自EcoBionics的池塘共混物)对藻类生产抑制或除草的功效。本研究使用六个2L的烧杯，各自填充有1.5L的取自存在有藻类的所建立的鱼塘的水源水。每个烧杯还包含一只来自源塘的金鱼，气泡石、光源交替地开启12小时然后关闭12小时，且覆盖表面玻璃以减少蒸发的损失。使用37g的PondPlus粒料，在BIO-AmpTM生物反应器中生产池塘共混物细菌溶液(pondblendbacteriasolution)。在生物反应器中24小时的生长周期之后，获得细菌溶液的等分部分且稀释以保持3L池塘共混物:579024加仑的池塘水的比值，然而，实地所采用的优选的比值是3L的池塘共混物:100,000加仑的池塘水。基于该比值，将约0.4μL的池塘共混物细菌溶液添加至具有1.5L的鱼塘水的特定的烧杯。基于净化的速率，根据制造商的说明，将石灰质海草添加至特定的烧杯；这等同于0.045g的石灰质海草/1.5L的水。将等量的碳酸钙添加至一些烧杯。在每个烧杯中的添加剂如下：表1烧杯1仅0.4μL的池塘共混物和1.5L的水源水烧杯2仅0.045g的石灰质海草和1.5L的水源水烧杯30.4μL的池塘共混物、0.045g的石灰质海草和1.5L的水源水烧杯4仅0.045g的碳酸钙和1.5L的水源水烧杯50.4μL的池塘共混物、0.045g的碳酸钙和1.5L的水源水烧杯6作为阴性对照且仅包含1.5L的水源水根据将在实地被使用的一种优选的剂量方案处理每个测试烧杯。将具有池塘共混物的烧杯1、3和5每周一次的处理(给予)有另外的0.4μL的池塘共混物。根据饲养池条件，可以在实地使用其他的给予方案。仅在本研究开始时将石灰质海草和碳酸钙添加一次，然而，可以在实地使用另外的剂量。每个烧杯取出一个预处理的样品(在添加池塘共混物细菌溶液、石灰质海草或碳酸钙添之前)，并且进行分析以获得用于与后处理结果比较的基线。使用200-300mL的来自每个烧杯的样品，每周进行化学分析一次。这些每周的测量包括分析pH、导电性、硝酸盐、正磷酸盐、总碱度和氨水平。每月检查浊度一次，并且进行拍照以评价藻类生长和总澄清度的变化。持续处理和分析烧杯总共三个月；再次重复(mirror)实地研究的长度。使用Excel2003，使用95％置信水平比较预处理比后处理数量的两样本的双侧t检验，进行数据分析。利用在方法中存在差异的择一假设(alternativehypothesis)，两样本的双侧t检验测试了在预处理和后处理的平均值中无差异的零假设(nullhypothesis)。HO＝μ预处理＝μ后处理HA＝μ预处理≠μ后处理基线读数表明在所有烧杯中升高的磷酸盐水平，超过表示促进藻类生长的水平的40倍。所有其他测量均在可接受的范围内。表2-用于硝酸盐和磷酸盐的来自两样本T-检验的结果*表示显著的结果仅含有细菌共混物粒料的测试烧杯在三个月的研究期间没有示出统计学上显著的变化。磷酸盐水平在两周后下降，但在一个月内恢复到预处理水平。硝酸盐水平与磷酸盐水平相似。在所有的测试烧杯中，仅烧杯1具有类似于阴性对照的硝酸盐和磷酸盐水平。这表明当单独使用细菌时对池塘健康的主要化学指示物的影响最小。含有石灰质海草的两个烧杯在预处理期间比后处理平均值示出了统计学上显著的变化。分别地，在烧杯2和3中，硝酸盐水平显著地下降79％和76％，具有0.01和0.04的p值。在烧杯2中磷酸盐水平也显著地下降74％，具有0.02的p值。含有石灰质海草和粒料的烧杯显示出磷酸盐降低66％，然而，该值不显著(参见表2)。重要的是要注意，这种统计学显著性的缺乏可能受制于本研究的低样本量限制。本研究没有测试样品中病原菌的变化，但添加池塘共混物细菌溶液将被预期为通过竞争而减少这些数量。另外，应相信，因为细菌溶液中的细菌可以与已经存在于饲养池中的硝化细菌协同作用，并且细菌溶液中所添加的细菌可以帮助消耗水中的废弃物以降低氨水平，所以根据本发明的优选实施方式将来自生物发生器的细菌溶液添加至实际饲养池中将比实验室研究获得更好的结果。与石灰质海草烧杯相似，在预处理期间比后处理平均值中含有碳酸钙的两个烧杯显示出了显著的差异。在烧杯4中，硝酸盐水平下降77％，具有0.03的p值。然而，含有碳酸钙和细菌粒料的烧杯5示出了磷酸盐水平显著降低72％，p值为0.02(参见表2)。碳酸钙可以是水产养殖处理中石灰质海草的合适替代品。含有石灰质海草或碳酸钙的烧杯胜过不含有石灰质海草或碳酸钙的那些。含有细菌共混物粒料和碳酸钙的烧杯5具有显著较低的磷酸盐水平的后处理平均值以及对pH最小的影响。然而，烧杯2和5在磷酸盐水平方面具有统计学显著的下降。在整个本研究中所检测的浊度显示出在所有测试的烧杯中连续降低。当将预处理图片与后处理图片比较时，在所有烧杯中藻类的存在增加，然而，到第二个月，在两个烧杯中存在藻类死亡的迹象。含有碳酸钙的的烧杯4和烧杯6(对照)均呈现出黄色，这表明死亡的藻类系统。尽管存在气泡石，由于水中的氧耗尽，藻类死亡是在初始藻类繁殖之后经历的常见问题。由于藻类死亡，硝酸盐水平显著地增加。在本月预处理之前的硝酸盐水平增加明显，在烧杯4和6中分别地增加14％和38％。到最后一个月，尽管系统仍然是深绿色、黄色的，但是烧杯4中的硝酸盐水平恢复且下降。在烧杯6中，硝酸盐继续增加至6倍的污染水平。还在各种池塘中进行了重点在于改善常规池塘健康和澄清度同时减少污泥的现场研究。虽然这项研究不是水产养殖特定的(由于研究中的池塘是观赏或娱乐性的，而不是用于饲养和收获水生物种)，但是在添加细菌和硝化增强剂方面，它提供了一些有用的信息。该研究包括在德克萨斯州的欧文市(Irving,Texas)内和周围的五个池塘；将池塘确定为范围从23,400ft3至720,131ft3的池塘1-5。这项研究的长度是七个月。每周一至两次，从每个池塘取出200-300mL的表面水样品。分析这些样品的pH、碱度、硝酸盐、磷酸盐、氨、导电性、浊度和大肠杆菌种(E.colispp)的浓度。使用HachDR890比色计进行磷酸盐、氨和浊度分析。使用用于大肠杆菌生长的专门培养基(3MPetrifilm6404)在35℃温育48小时进行测定大肠杆菌。对于污泥深度、澄清度和溶解氧(DO)，对每个池塘每月取样一次。由小船在两至四个GPS坐标标志的位置处量获取这些测量以获得代表性样品。使用污泥采样器(sludgejudge)以英寸测量污泥深度；将每个GPS位置取样三至四次，取平均值。使用具有HachHQ30d仪的HachLDO探针，从底层且再次在表面的18”处以ppm测量溶解氧。使用西奇盘(SecchiDisk)以％/英尺测定澄清度，其给出了经验测量值。此外，在每个池塘的两至四个位置处每月拍照一次，再次通过GPS坐标标记，以给出总体表面条件的顾客观点(patronpoint-of-view)。在每个位置处安装BioAMPTM750气候控制的生物反应器，用于每天现场给予细菌的专门化的池塘共混物。使用改良的FREE-FLOWTM配方将芽孢杆菌种孢子制粒；将粒料进料至生长容器中，其中它们在最佳条件下生长24小时，然后直接分散至池塘中。由于次氯酸钠(漂白剂)被认为对地表水(surfacewater)有毒并且不被欧文市使用，因此必须由标准方案对BioAMP750的维护进行修改。为了获得与标准漂白处理相似的增白效果，使用155g的碳酸氢钠(小苏打)以除去过量的生物膜且清理生长容器。除了每月的维护之外，还监测生物发生器的任何故障以及尽管环境温度超过100°F但仍保持程序化温度的能力。陪同细菌处理的是，还将石灰质海草应用于每个池塘。所给予的石灰质海草的量取决于以100lbs与1,000,000ft3的比值的水的体积。使用如在美国专利申请系列号14/689,790中描述的含泡腾剂伴侣(effervescentcouple)和石灰质海草的水溶性包给予石灰质海草。将每个研究池塘每日给予相同量的细菌(30万亿CFU)。相关矩阵显示出污泥深度与给予速率逆相关。两个较小的池塘在污泥水平和澄清度上具有最大的所观察的降低，且分别地，细菌的最高日剂量是2×107CFU/L和7×106CFU/L。不管大小怎样，所观察的澄清度在所有池塘上示出了积极的效果。对于本研究的三个最小的池塘中，澄清度约是100％。相反地，在本研究结束时，两个最大的池塘仅实现了20％的澄清度。使用单侧的两样本t-检验以评价在处理之后污泥水平是否显著地降低。0.006的p值发现了31％的统计上显著的平均降低。H0:μ预处理＝μ后处理，HA:μ预处理>μ后处理。这种所观察的平均降低等于平均3英寸的污泥层的降低。此外，当与预处理比较时(参见表3)，本研究的每个池塘经历污泥水平的降低。表3-池塘的PO4、NO3和污泥的变化池塘％ΔPO4％ΔNO3％Δ污泥1-19-71-452-77-100-183-400-164-70-100-375-480-43平均值-52-91-31观察到的大肠杆菌种变化的平均值降低了59％。重要的是要注意，全范围包括145％的增加至100％的降低。这样宽的范围加上小的样品量使得难以确定对大肠杆菌种浓度的处理的有效性。五个研究池塘中的三个经历了大肠杆菌种浓度的增加；然而，看出另外两个池塘急剧降低；然而，增加被认为是雨水径流入池塘的结果。将预处理和后处理水平比较，检测了本处理对磷酸盐浓度的总体效果。发现该数据是非参数的，并且使用单侧的曼-惠特尼检验(one-sidedMann-Whitneytest)以确定磷酸盐浓度是否在处理之后显著的降低。H0:μ预处理＝μ后处理，HA:μ预处理>μ后处理。所获得的0.0000的p值表示在处理之后磷酸盐水平的总体52％的降低是统计上显著的。池塘的磷酸盐水平的变化的详细检测还示出了有意义的降低。看出每个处理的池塘在磷酸盐浓度上在19％至77％范围内降低(参见表3)。平均52％的降低与在本研究的第I期所观察的降低57％相似。这表示细菌剂量频率的增加可能不与磷酸盐浓度的降低相关联。此外，在应用石灰质海草之后，直接地观察到磷酸盐水平的明显降低。在春季给予第一次剂量，在夏季给予第二次，之后磷酸盐水平在6月开始升高。对于磷酸盐浓度的控制，非化学的、环境友好属性的粉末产物提供了有希望的效果。相似地，使用单侧的曼-惠特尼检验检测硝酸盐水平以评价硝酸盐浓度是否在处理之后显著的降低。H0:μ预处理＝μ后处理，HA:μ预处理>μ后处理。利用0.0000的p值，测定到91％的浓度降低是统计上显著的(参见表3)。为此，基线硝酸盐浓度低于建议水平，因此没有预料到减少，更不用说91％的统计上显著的减少。此外，第4个月，具有可检测的硝酸盐的每个所研究池塘显著降低至低于0.01ppm的检测极限。相比于在阶段I中观察到的减少(～69％)，这是巨大的改善，并且表示增加细菌给予的频率对这些浓度具有直接的影响。总体上，这项研究表明，如通过化学指标和污泥水平的降低所测量的，使用细菌和石灰质海草的增强处理增加了池塘健康。本领域普通技术人员在阅读本说明书后还将理解，可以在本发明的范围内进行对益生菌组合物以及用于递送益生菌组合物的方法和系统的修改和改变，并且其旨在本文中所公开的本发明的范围仅受限于由发明人合法授权的所附权利要求的最宽解释。当前第1页1 2 3