一种微流控芯片及其在分离鸭肌原细胞上的应用

本发明涉及细胞分离领域，特别涉及一种微流控芯片及其在分离鸭肌原细胞上的应用。

背景技术：

1、鸭肌原细胞是鸭骨骼肌形成的物质基础，在骨骼肌的发生、分化和成熟三个阶段中，成肌细胞起关键作用。鸭肌原细胞的研究在禽类养殖、禽类疾病诊断、治疗和细胞生理、基因调控等研究方面具有重要意义。鸭肌原细胞分离技术是进行鸭肌原细胞水平研究的基础，用经济简便的方法获得大量鸭肌原细胞是研究的关键。

2、目前鸭肌原细胞的分离方法有流式细胞术分离法、差速离心法等。流式细胞术分离法根据流体动力聚焦效应，流式细胞术将细胞排成一列形成细胞流，利用光激发并捕捉细胞特定的信号进行细胞分离，但流式细胞术需依靠流式细胞仪，该仪器结构复杂，价格昂贵；差速离心法利用肌原细胞与其他细胞类型在密度上的差异，通过不同离心速度和离心时间，将肌原细胞与其他细胞类型分离，该方法简单易行，但分离效果有限。

技术实现思路

1、鉴以此，本发明提出一种微流控芯片及其在分离鸭肌原细胞上的应用。

2、本发明的技术方案是这样实现的：

3、一种微流控芯片，由基体和载玻片两部分构成；所述基体由进样通道、输出通道和分离通道构成；所述进样通道包括入口ⅰ和入口ⅱ，输出通道包括出口ⅰ、出口ⅱ和出口ⅲ。

4、进一步的，所述基体材质为聚二甲基硅氧烷。

5、进一步的，所述进样通道和输出通道的深度为40～70μm；所述分离通道由分离微柱构成；分离通道的宽度为1～2mm，长度为3～5mm。

6、进一步的，所述微流控芯片的临界尺寸为10μm。

7、进一步的，所述分离微柱为圆形微柱或三角形微柱。

8、进一步的，所述圆形微柱的直径为47～51μm，偏转角为2～3°，纵向中心距为89～91μm，横向中心距为89～91μm，微柱间隙为38～42μm，微柱的偏转周期为n＝21～23；所述三角形微柱的边长为53～56μm，偏转角4～5°，纵向中心距89～90μm，横向中心距89～90μm，微柱间隙39～41μm，微柱的偏转周期n＝11～13。

9、微流控芯片在分离鸭肌原细胞上的应用。

10、微流控芯片在分离鸭肌原细胞上的应用，包括以下步骤：

11、(1)取微流控芯片，浸润、去除气泡后备用，入口ⅰ和入口ⅱ与两个注射器分别连接，出口ⅰ、出口ⅱ和出口ⅲ分别与三个收集瓶连接；

12、(2)从入口ⅰ通入含鸭肌原细胞的悬浊液、入口ⅱ通入鞘液，调整悬浊液和鞘液的流速使其通过分离通道，经出口ⅰ、出口ⅱ、出口ⅲ分别流入三个收集瓶，得到鸭肌原细胞。

13、进一步的，所述含鸭肌原细胞的悬浊液、鞘液的体积比为1～2:1～2。

14、进一步的，步骤(2)中，所述悬浊液和鞘液的流速为10～20μl/min。

15、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

16、(1)本发明的微流控芯片不仅灵敏度高，分离效果好，而且对细胞无损伤，保证鸭肌原细胞的完整性和生理性。

17、(2)本发明的微流控芯片体积小、样品试剂使用量小，价格便宜，操作简便，易于大规模生产和使用。

18、(3)本发明首次报道了微流控芯片在分离鸭肌原细胞上的应用，为大量制备鸭肌原细胞、研究鸭肌原细胞增殖和基因调控提供了基础。

技术特征：

1.一种微流控芯片，其特征在于：由基体和载玻片两部分构成；所述基体由进样通道、输出通道和分离通道构成；所述进样通道包括入口ⅰ和入口ⅱ，输出通道包括出口ⅰ、出口ⅱ和出口ⅲ。

2.如权利要求1所述一种微流控芯片，其特征在于，所述基体材质为聚二甲基硅氧烷。

3.如权利要求1所述一种微流控芯片，其特征在于，所述进样通道和输出通道的深度为40～70μm；所述分离通道由分离微柱构成；分离通道的宽度为1～2mm，长度为3～5mm。

4.如权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片的临界尺寸为10μm。

5.如权利要求3所述的微流控芯片，其特征在于，所述分离微柱为圆形微柱或三角形微柱。

6.如权利要求5所述的微流控芯片，其特征在于，所述圆形微柱的直径为47～51μm，偏转角为2～3°，纵向中心距为89～91μm，横向中心距为89～91μm，微柱间隙为38～42μm，微柱的偏转周期为n＝21～23；所述三角形微柱的边长为53～56μm，偏转角4～5°，纵向中心距89～90μm，横向中心距89～90μm，微柱间隙39～41μm，微柱的偏转周期n＝11～13。

7.如权利要求1-6任一项所述的微流控芯片在分离鸭肌原细胞上的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述含鸭肌原细胞的悬浊液、鞘液的体积比为1～2:1～2。

10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述悬浊液和鞘液的流速为10～20μl/min。

技术总结
本发明提供一种微流控芯片及其在分离鸭肌原细胞上的应用，所述的微流控芯片由基体和载玻片两部分构成；所述基体由进样通道、输出通道和分离通道构成；所述进样通道包括入口Ⅰ和入口Ⅱ，输出通道包括出口Ⅰ、出口Ⅱ和出口Ⅲ。本发明中应用微流控技术分离鸭肌原细胞，不仅具有通量高、反应快、集成度高和灵敏度高、不需要额外施加作用力场的优点，而且降低样品和试剂使用量、操作简便、价格低廉。

技术研发人员：顾丽红,刘宏举,史留勇,郑心力,晁哲
受保护的技术使用者：海南省农业科学院畜牧兽医研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16