无背景的磁性流式细胞仪的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于磁性流式细胞仪的装置和方法。其中设置磁单元(22，24)于流动通道(10)内，这样来配置该流动通道的流动通道直径(100)和流动通道内壁的表面性质，使得在流动通道(10)内产生具有层流状流动剖面(40)的复合悬浮液的流。由磁单元(22，24)引起的力(FM)和由流所引起的力(FS)作用于未结合细胞的磁标记(26)，将这些未结合细胞的磁标记物(26)阻拦在前部通道段(240)中，并且不沿着流动通道的进一步延伸(10)流过细胞测量装置(20)。
【专利说明】无背景的磁性流式细胞仪
【技术领域】
[0001]本发明涉及流式细胞仪，特别涉及磁性细胞测量。
【背景技术】
[0002]在细胞测量和细胞检测的领域内，除光散射測量或荧光测量这样的光学測量方法之外，还已知有磁性检测法，其中通过磁标签来标记待检测的细胞类型。
[0003]特别已知有基于磁体的测量方法，其中，通过磁电泳从例如为血液样本的复合悬浮液中挑选经磁标记的细胞。特别通过将细胞特异性标记物引入到复合悬浮液中来进行磁标记。可通过磁电泳将经磁标记的细胞或通常是磁性的颗粒引入穿流中，或定向并且由此分类。
[0004]对于在诊断和科技中的细胞测量来说必要的是，恰好測量在血液样本中仅以非常低的浓度存在的细胞类型，例如扩散的肿瘤细胞。因此，对细胞浓度的定量分析或对特定细胞的可靠的检测要争取达到单细胞检測。已知的是，为此必需从具有复杂背景的悬浮液中预先富集待确定的细胞。然而，仅凭这一点，在大多数情况下还未产生足够的测量特异性。正因为磁性细胞测量伴有非常简单的通过加入细胞特异性标记物而进行的样品准备，流式细胞仪就出现了未经结合的磁标记物总是造成背景信号这样的问题。该背景会导致例如假阳性的检测信号。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是通过未结合的磁标记物最小化在磁性流式细胞仪中造成的背景信号。
[0006]该目的通过权利要求1所述的装置得以实现。权利要求9给出了用于磁性流式细胞仪的方法。权利要求15给出了本发明装置的制造方法。本发明有利的实施方式是从属权利要求的主体。
[0007]本发明的用于磁性流式细胞仪的装置包括流动通道、用于富集经磁标记的细胞的第一磁单元和用于排列经磁标记的细胞的第二磁单元，以及至少ー个细胞测量装置。在相对流动方向的前部通道段上设置磁性装置。这样来配置该流动通道的流动通道直径和流动通道内壁的表面性质，使得在流动通道内可产生具有层流状流动剖面的复合悬浮液的流。进ー步地配置流动通道，使得由磁单元引起的力和由流所引起的力作用于未结合细胞的磁标记，以便于将未结合细胞的磁标记阻拦在前部通道段中。其优势在于，这些未结合的标记物不会到达位于流动通道内的沿流动方向更靠后的细胞测量装置。从而，将未结合细胞的标记物阻拦在前部通道段中，其不会沿着流动通道的进ー步延伸流过细胞測量装置，并且作为干扰组分消除，由此来減少由未经结合的磁标记物造成的背景信号。其优势在于，在测量经磁标记的细胞时能确保较高的特异性，特别是单细胞检测。
[0008]特别地，在前部通道段这样来设置第一磁单元，使得由此可产生梯度磁场，其在流动通道内将经磁标记的细胞以及未结合细胞的磁标记物富集于通道底部。所述富集过程的优势在于，其将待测量的经磁标记的细胞引导至靠近通道底部的细胞测量装置，并且还具有的优势在干，将未结合细胞的磁标记物引导至通道底部上的第二磁单元，由此，正如下文所描述的那样，特别有助于阻拦未经结合的标记物。
[0009]特别地，在前部通道段这样来设置第二磁单元，使得经磁标记的细胞由此在流动通道内沿轴线排列，在该轴线上沿着通道的进ー步延伸设置细胞测量装置。第二磁单元的这种设置的优势在于，可以对经磁标记的细胞实施磁电泳，由此，细胞可被排列并且特别地可使其単独地经过细胞测量装置。
[0010]此外，例如在通道底部设置第二磁单元，使其在流动通道内凸起。这样的优势在于，磁单元可额外地将磁力作用于磁标记物，特别是未经结合的磁标记物也能造成妨碍该磁标记物继续流动的机械障碍。或者，也可在通道底部放入导向带(Fiihrungsstreifen),使得对流动不构成机械障碍。但随后，作用于未经结合的标记物的磁性保持力(Haltekraft)必须偏高，或者流速必须偏低，由此能同样可靠地阻拦经结合的标记物。
[0011]第二磁单元特别具有磁性导向帯。其特别由铁磁材料制成。优选以鱼骨设计设置该磁性导向帯。导向带在通道的中间还会呈现箭头形状。因此，可特别有效地将经磁标记的细胞沿通道底部排列在此中轴线上，之后它们流向细胞测量装置。为了达到过滤的目的，该导向带特别地在整个通道宽度上延伸。
[0012]在本发明ー项有利的实施方式中，在装置中这样设置第二磁单元，使得磁力以及额外的阻力(Rilckhaltekraft)通过该第二磁单元作用于未结合细胞的磁标记物,这些カ在方向和大小上抵消了复合悬浮液的流的剪切力。磁单元的这种实施方式具有的优势在于，通过在未经结合的标记物上的两种カ的组合可以在通道中逆流动方向地阻拦该标记物。
[0013]在本发明另ー项有利的实施方式中，这样来配置该装置的流动通道的通道直径，使得通过磁标记物互相结合的多个细胞的细胞聚集体可以在通道中部突起，突起的程度使得通过作用在该细胞聚集体上的力可将所述细胞聚集体以在通道中部占优势(vorherrschenden)的流速运离。通道直径的这ー设置带来的另ー优势在于,细胞聚集体不会导致假阳性的信号，因为会将其以在通道中占优势的最高流速运离。特别地进ー步配置流动通道的直径，使得在通道中部流动的细胞聚集体到特别设置在通道底部之上或之中的细胞测量装置的距离是可維持的，在该距离中可不引起细胞聚集体的检测。也就是说，应选择这样大的通道直径，使得通过磁标记物互相结合的多个细胞的细胞聚集体在离细胞測量装置足够远的距离上流过该装置。磁阻传感器的灵敏度约以1/d3减小，其中d为至传感器的距离。用磁阻传感器便利地实现了细胞测量装置。此传感器可以是GMR传感器。有利的是,设置多个例如像Wheatstone桥式电路的桥元件的传感器元件。
[0014]在根据本发明的用于磁性流式细胞仪的方法中，产生了具有经磁标记的细胞以及未结合细胞的标记物的细胞样本的层流。接下来，经磁标记的细胞以及未结合细胞的标记物在梯度磁场中动态富集。额外地，以磁电泳的方式沿轴线排列经磁标记的细胞。其中，选择梯度磁场的磁场强度以及流速，使得作用在未结合细胞的磁标记物上的力可阻拦在流中的该磁标记物。其优势在干，每ー个受到阻拦的未经结合的标记物不会产生背景信号。
[0015]在该方法中，特别在细胞样本中加入过量的磁标记物。虽然由此会立刻产生强背景信号，但由此也会首先确保，仅以较低浓度存在于样本中的极其特异性的细胞无需进ー步的样本处理就可得到可靠地标记，并且由此可得到选择性地检测。仅通过过滤或阻拦过量的磁标记物的构思就可在例如为血液的细胞样本中实现令人满意的单细胞的检测。
[0016]在本发明ー项有利的实施方式中，该方法中的在流动通道内的细胞样本层流的产生导致了朝向通道底部内壁的动态富集，以及沿轴线的磁电泳式的排列，其中所述轴线沿通道底部的通道内壁在流动方向上延伸。通过这样的轴线延伸，将经磁标记的细胞引导经过细胞測量装置。因此，会使细胞样本这样经过在通道底部的内壁上的磁单元，以便于将该细胞样本中的未结合细胞的磁标记物刚好被阻拦在此磁单元旁。
[0017]在该方法中优选使用超顺磁标记物作为磁标记物。
[0018]在本发明ー项有利的实施方式中，如此选择梯度磁场的磁场强度和流速，使得作用在通过磁标记物互相结合的多个细胞的细胞聚集体上的力以在通道中部占优势的流速将这些细胞聚集体运离。其优势还在于，这样所述细胞聚集体不会导致假阳性的信号。特别使细胞聚集体于其中移动的通道中部如此远离细胞测量装置(特别是远离在通道壁旁或内的磁阻传感器)，使得不会检测到在细胞聚集体中或周围的标记物的杂散磁场。
[0019]在该方法的一项实施方式中，特别将细胞样本注射进上述装置。
[0020]在本发明的用于磁性流式细胞仪的装置的制造方法中，在流动通道内于通道底部设置用于排列经磁标记的细胞的第二磁单元，并且特别使其在流动通道内突起。这样做的优势在于，相对于在通道底部的装置，可额外地实现磁性保持力，也可通过流阻(Strdmungshindemis )实现机械阻力。
[0021]本发明的特别优势在于，通过阻拦未结合的标记物来減少背景信号，使得磁性流式细胞仪的样品预备保持简单化。这特别是磁性测量的一个显著的优势。因为必须向样本添加过量的磁标记物以得到足够可靠的待测细胞的标记，所以这种背景的減少对于改善信噪比(Signal-RauschVerh^Utnisses)来说仍有更重要的意义。可特别考虑具有抗体的超顺磁性标签作为磁标记物，该超顺磁性标签可通过抗体选择性地结合细胞表面上的同位素。然后，例如将超顺磁性纳米颗粒结合于各抗体上。所述纳米颗粒特别具有20~200nm的直径。
[0022]磁性标签通常很小。这些未结合细胞的标签具有小于500nm的流体动カ直径(hydrodynamische Durchmesser)。因此通过磁力可很好地阻拦曾经在通道底部富集的这样小的磁单元，特别是因为流速在通道底部最小。所选的流速通常低于5mm/s。与未经结合的标记物相反，经标记的细胞或更大的磁珠具有例如3~20nm的直径,细胞聚集体具有相应更大的流体动カ直径。所述颗粒在微流体通道中扩展的越广，流速就越高，并且层流就越早地将它们卷走。
[0023]用于以磁电泳方式排列经磁标记的细胞的磁单元具有有利的鱼骨形结构。已证实这样的结构是特别有效的，经磁标记的细胞会这样二维地排列在通道底部，有利于它们各自沿轴线相继流动，并且由此可引导其各自通过例如为磁阻传感器的传感器単元。例如将Wheatstone桥式电路作为细胞测量装置，并且其具有作为电桥元件的至少ー个，特别为多个的磁阻传感器。
[0024]此外，鱼骨形结构不是不合适的，其对于未经结合的磁性颗粒的流动也相应地产生了机械阻碍，并且由此对阻拦还有帮助。特别地，磁单元的“鱼骨形”覆盖了整个通道宽度。[0025]流动通道特别为微流体通道。该通道的直径特别适合于各细胞样本。特征性细胞直径因待测细胞的类型而异，该直径对于在悬浮液的细胞和颗粒上的流动剖面的影响是重要的。
[0026]因此，该方法的ー个重要组成部分特别是在小体积的悬浮液中有针对性地动态富集细胞。在微流体底部的方向上通过外部磁体进行富集过程。对于经磁标记的细胞的严谨富集来说，重要的參数除磁标记物的类型和其杂散磁场之外，还有流速和微流体尺寸，此外还有磁电泳导轨的实施，例如其与流动方向之间的角度和其磁矩以及外部的梯度磁场。
[0027]以在三维空间中发生富集以及同步地在原位过滤(in-situ-Filterung)悬浮液中的未经结合的标记物的方式，通过使用有利的鱼骨形式的磁电泳来确保单细胞的检测。原位过滤的临界条件是铁磁性线路(ferromagnetischen Linien)的阻力、夕卜部磁场以及流速、和与待测物的流体动カ直径相关的标记物的流体动カ直径，待测物即经磁标记的细胞或磁珠。
[0028]特别有利的是将未经结合的标记物的磁性阻拦与在铁磁性线路上的标记物的过滤相结合，该铁磁性线路特别地分布在通道底部的整个宽度上。由此，未经结合的标记物可以在任何点流过这些机械障碍，其无须向着外部磁场移动。由此确保了未经结合的标记物的动态过滤。
[0029]在可选的实施方式中，例如这样设置铁磁性的导向带，使它们从通道壁的两侧开始并且倾斜地朝向通道中部，例如以相对于通道壁以在0°?90°之间的角度傾斜。其中导向带特别指向流动的方向。然而，在通道中部的导向带不会像处在鱼骨形结构的情况下ー样互相碰触，而是彼此略有偏移。
[0030]另外，磁电泳例如可串联其它铁磁带作为过滤帯。即，铁磁性过滤带沿着流动方向在磁电泳前方从ー个通道壁至另一通道壁横穿通道底部。可将其设置成垂直于通道壁或与通道壁形成在0°?90°之间的任意的角度。
[0031]所描述的用于磁性流式细胞仪的装置额外具有的特别优势在于，通过回收流式细胞仪可在使用后更新其过滤效果。为此，可以特别去除或消除由第一磁单元引起的外部磁场。额外地，可以用冲洗掉过滤颗粒的非常高的流速来实施冲洗。
【专利附图】
【附图说明】
[0032]參照附图1?6以示例的方式将对本发明的实施方式进行描述:
[0033]图1示出了该装置的流动通道的横截面图；
[0034]图2示出了具有磁导轨装置的流动通道和流动剖面的的横截面；
[0035]图3示出了磁导轨装置的俯视图；
[0036]图4示出了具有流动通道的传感器単元的装置的俯视图；
[0037]图5示出了关于在未结合的磁标记物上的力分布的第一实施例；以及
[0038]图6示出了关于在未结合的磁标记物上的力分布的另ー实施例。
【具体实施方式】
[0039]图1示出了流动通道10的横截面的示意图。其具有上方的限制和通道底部11。左侧示出的是通道入口 12,右侧示出的是通道出口 13。箭头44表示流动的方向。在通道底部11中示出两个矩形，其为细胞測量装置，即磁传感器20。在通道底部11的下方沿整个通道长度绘有永磁体22。其也可仅为通道的一半长并且可限定在通道前段的左側。在通道10中示出椭圆形细胞30、32。其中，通过不同的阴影将未经标记的细胞30和经标记的细胞32区分开来。通过永磁体22在梯度磁场中只有经磁标记的细胞32受到磁力并且富集于通道底部11，这使得它们运动向磁传感器20上方靠近。所有其它的细胞30更加远离通道底部11地移动越过磁传感器20。必须根据流速41、通道直径和细胞标记物26的磁矩来选择富集路径240的长度并由此选择在流动通道10下方的永磁体22的长度，尽可能使所有经磁标记的细胞32从悬浮液中向通道底部富集。在所示的用于磁性流式细胞仪的装置中，涉及到在动态富集细胞32之前发生的动态测量。对比细胞诊断的其它方法，例如荧光流式细胞仪，将所述动态测量与动态富集和简单的样本处理(基本上为将磁标记物26添加到细胞样本中)相结合，是磁性流式细胞仪的最大优势之一。
[0040]图2示出了流动通道10横截面。左侧示意性地示出流动剖面40。在通道层流40的情况下，将其轮廓大致设定为抛物线。箭头41代表了从通道的中部向边缘减小的流速。从而，最闻流速41占居通道中部。
[0041]通道段的左侧示出了所谓的富集和排列段240。在流动方向44上将其插在检测区域20之前。在前部通道段240中设置有磁单元、永磁体22以及磁导轨24。磁导轨24特别为例如由镍制成的铁磁性金属帯。图2中，在通道底部11上放置这些金属带24，使其在通道10中凸出。在流动方向44上于前部通道段240的后面示出了经磁标记的细胞32会经过的磁传感器20。
[0042]再次用阴影表示经磁标记的细胞32。然而，有必要区分它是否是具有多个磁标记物26并作为经标记的单细胞32在复合悬浮液中移动的所谓正确的经磁标记的细胞32，还是以错误的方式附在单个磁标记物26上并通过此标记物聚集的细胞30。这样的通过磁标记物26相互结合的多个细胞的聚集体34具有比经标记的细胞32大的多的流体动カ直径。对于单细胞32和细胞聚集体34的不同的流动性能这是至关重要的。由于其大得多的流体动カ直径，这样的聚集体34在占据更高流速41的通道中部总是前进得更远。这样的高流速41将较大的聚集体34卷走并使其再次远离通道底部11，这样使得它们以距传感器20较远的距离200流过该传感器，并且因此不会检测到它们。这就排除了由细胞聚集体34造成的假阳性信号。因此，通过例如为流动通道直径和流动剖面40或流速41的參数，细胞测量可以是特异性的。传感器20的灵敏度以l/d3减小，其中d为至传感器的距离。
[0043]干扰测量的背景信号主要是由未经结合的标记物26引起的，在细胞样本中会过量地加入该标记物以确保能完全地标记样品中所有待测细胞32。磁标记物26例如为通过抗体结合细胞表面上的同位素的超顺磁性标签。磁传感器20例如为GMR传感器，其中GMR表不巨磁阻(giant magneto resistance)。
[0044]图2示意性地示出了装置的过滤原理。较小的未结合的标记物26仅具有非常小的流体动カ直径，并且通过磁性富集靠近通道底部11。在那里铁磁带24可以将它们从流体中所谓地过滤出来并且将其阻拦。此处，铁磁带24首先在流动中充当机械障碍。磁标记物26必须向着永磁体22的梯度磁场移动以使其从磁性过滤中解脱出来。此外，阻拦磁标记物26的磁性保持力Fm在该铁磁带24上也占主导地位。因此，所述过滤是磁力过滤Fm和剪切カ过滤Fs的结合。[0045]图3示出了图2所示的通道段的俯视图。再次用箭头标记流动方向44。在前部，即在通道10的流动方向上的靠前区域，再次示出了富集段240。在该区域内，分布着用于以电磁泳的方式富集和排列经磁标记的细胞32的铁磁导轨24。按特别有利的鱼骨形设计来设置该磁导轨24，该鱼骨形设计从通道壁14向通道中部渐缩。此外，它对于有效地过滤未结合的磁标记物26是特别有利的，该磁导轨24覆盖了通道的整个宽度100且没有留下ー点空隙。此外，未在图中明确地示出永磁体22，因为它位于通道底部11的下方，特别地延伸至整个通道宽度100，使得均匀的梯度磁场在整个通道宽度100上作用于在悬浮液中的磁性颗粒26。特别有利的是，当永磁体22延伸超过通道宽度100，例如至分布在通道壁14上的虚线时,有利于在通道10内产生均匀的梯度磁场。
[0046]此外，图3还示出了分布在中心的磁导轨24，其标记了通道中部，并且可将它视为所述的在其上排列有经磁标记的细胞32的轴线。沿着该轴线的假象延长线上，在流动通道10中接着设有经磁标记的细胞32会流动通过的磁传感器20。图3还示出了不受磁场作用影响的未经磁标记的细胞30。
[0047]代替经磁标记的细胞32，也可以这种方式富集和排列磁珠。这种测量方法对于可经磁标记的其它分析物也是合适的。
[0048]在荧光流式细胞仪中，也会在样品准备阶段加入过量的荧光标记物，之后必须通过离心和清洗步骤将其倾析。如果适当地调整磁单元以及流动性能的參数，使其适应待测磁性细胞的大小，对于磁性流式细胞仪来说就不需要这样的步骤。
[0049]图4最终示出了具有在Wheatstone桥式电路中彼此相连接的磁阻元件20的磁传感器单元的装置。此外，还示出了磁阻20的电引线21。箭头再次表示通过流动通道10的流动方向44。
[0050]图5和图6最后应示意性地示出作用在未经结合的磁标记物26上的力。为此，只示出了具有铁磁带24的通道底部11的截面。在图5中示出的是具有抗体和磁性颗粒的磁标记物26，其通过磁性保持力Fm在通道底部11受到阻拦，该保持カ是由铁磁带24和位于通道底部11下方的永磁体22的梯度磁场一起引起的。此磁性保持力Fm在垂直于通道底部11的方向上作用于磁标记物26，并且将其固定在铁磁带24旁。作用在磁标记物26上的还有复合悬浮液流的剪切力FS。该カ沿流动方向44平行于通道底部11。从而，为固定住磁标记物26,磁性保持力Fm必须大于剪切力Fs。
[0051]图6最終示出了有利于过滤作用的铁磁带24在通道底部11的设置。该铁磁带24在流动通道10中凸起，以便于在流动方向44上于铁磁带24后面抓住磁标记物26。在那里位于通道底部11下方的永磁体22的磁性保持力FM在垂直于通道底部11的方向上作用于磁标记物26。复合悬浮液流动44上的冲击(angreifende)剪切力FS支配在磁标记物26上的受冲击面较小。另外，铁磁带24提供了流动障碍，这对于磁标记物26而言意味着是额外的阻力Fk。
[0052]在横截面积为0.105 U m2的流体通道10内，当流速为I yl/s吋，流速约为1500 y m/s并且复合悬浮液扫过磁传感器20。镍带24阻拦住磁性纳米磁珠26。在測量之后应使镍带系统24再次摆脱这些纳米磁珠26。为此，例如以4iU/S的速率清洗流动通道
10。然后，过滤装置24中的未经结合的磁性纳米磁珠26也会移动穿过通道10。此外，更高的流速可以使外部磁场最小化或将其断开。[0053] 图7最后还示出了具有交错的铁磁性导带24的通道10的另一实施方式，该铁磁性导带在通道10的中部不互相接触，而是像拉链一样偏移。也优选将其设置成与通道壁成45°角并指向流动方向44。独立于精确的设置，磁电泳240还可以将一个额外的过滤装置250设置在前面。如此，将该过滤装置在流动方向44上更靠前地设置在通道10中，即在图7中为更靠左的位置。从而延伸铁磁带25从一个通道壁横穿通道底部11至另一通道壁。特别地将其设置成垂直于通道壁或与通道壁形成0°?90°的角度。
【权利要求】
1.用于磁性流式细胞仪的装置，包括: -流动通道(10)； -用于富集经磁标记的细胞(32)的第一磁单元(22);和 -用于排列经磁标记的细胞(32)的第二磁单元(24);以及 -至少ー个细胞测量装置(20)， 其中所述磁单元(22，24)设置在相对于流动方向(44)的前部通道段(240)中，以及这样来配置所述流动通道(10)的通道直径(100)和通道内壁的表面性质:使得在所述流动通道(10)内可产生具有层流状流动剖面(40)的复合悬浮液的流，使得由所述磁单元(22，24)引起的力(Fm)和由所述流所引起的力(Fs)作用于未结合细胞的磁标记物(26)，从而将所述未结合细胞的磁标记物阻拦在前部通道段(240)中。
2.权利要求1所述的装置，其中在前部通道段(240)设置第一磁单元(22)，使得由此可产生梯度磁场，所述梯度磁场将经磁标记的细胞(32)以及未结合细胞的磁标记物(26)富集于流动通道(10)内的通道底部(11)。
3.权利要求1或2所述的装置，其中在前部通道段(240)设置第二磁单元(24)，使得经磁标记的细胞(32)由此在流动通道(10)内沿轴线排列，在该轴线上所述细胞測量装置(20)沿着流动通道(10)的进ー步延伸而设置。
4.上述权利要求中任一项所述的装置，其中所述用于排列经磁标记的细胞(32)的第二磁单元(24)设置在通道底部(11)，特别地使所述第二磁单元(24)在所述流动通道(10)中凸起。
5.上述权利要求中任一项所述的装置，其中所述第二磁单元(24)具有磁性导向带，特别具有铁磁性导向带，其中所述磁性导向带在通道底部的整个宽度上延伸。
6.上述权利要求中任一项所述的装置，其中所述用于排列经磁标记的细胞(32)的第二磁单元(24)这样设置，使得磁力(Fm)以及额外的阻力(Fk)通过所述第二磁单元(24)可作用于未结合细胞的磁标记物(26)，在方向和大小上抵消了复合悬浮液的流的剪切力(Fs)。
7.上述权利要求中任一项所述的装置，其中这样来配置所述流动通道(10)的通道直径(100)，使得经由磁标记物(26)互相结合的多个细胞(30)的细胞聚集体(34)可以在通道中部突起，突起的程度使得通过作用在所述细胞聚集体(34)上的力(Fm，Fs)将所述细胞聚集体(34)以在通道中部占优势的流速(41)运离。
8.上述权利要求中任一项所述的装置，其中这样来配置所述流动通道(10)的通道直径(100)，使得在通道中部流动的经由磁标记物(26)互相结合的多个细胞(30)的细胞聚集体(34)到所述细胞測量装置的距离(200)是可维持的，在该距离(200)中可不引起所述细胞聚集体(34)的检测。
9.用于磁性流式细胞仪的方法，其中: -产生具有经磁标记的细胞(32)以及未结合细胞的标记物(26)的细胞样本(40)的层流； -所述经磁标记的细胞(32)以及所述未结合细胞的标记物(26)在梯度磁场中动态地富集； -所述经磁标记的细胞(32)以磁电泳的方式沿轴线排列，其中选择梯度磁场的磁场强度以及流速(41)，使得作用在所述未结合细胞的磁标记物(26)上的力(FM，Fs)在所述流中阻挡该磁标记物(26)。
10.权利要求9所述的方法，其中所述磁标记物(26)以过量添加至所述细胞样本(40)。
11.权利要求9或10所述的方法，其中: -在流动通道(10)中产生细胞样本(40)的层流； -向通道底部(11)的通道内壁进行动态富集；以及 -沿轴线进行磁电泳式的排列，其中所述轴线沿通道底部(11)的通道内壁在流动方向(44)上延伸，从而引导经磁标记的细胞(32)沿所述轴线经过细胞测量装置(20)， 其中，细胞样本(40)这样经过在通道底部(11)的通道内壁上的磁单元(24)，使得将该细胞样本中的未结合细胞的磁标记物(26)被阻拦于该磁单元(24)上。
12.权利要求9~11中任一项所述的方法，其中使用超顺磁标记物作为所述磁标记物(26)。
13.权利要求9~12中任一项所述的方法，其中选择梯度磁场的磁场强度和流速(41)，使得作用在通过磁标记物(26)互相结合的多个细胞(30)的细胞聚集体(34)上的力(FM，Fs)将所述细胞聚集体(34)以在通道中部占优势的流速(41)运离。
14.权利要求9~13中任一项所述的方法，其中将细胞样本注射进权利要求1~8中任一项所述的装置中。
15.权利要求1~8中任一项所述的装置的制造方法，其中所述用于排列经磁标记的细胞(32)的第二磁单元(24)设置在所述流动通道(10)中的通道底部(11)上，特别地使得所述第二磁单元(24)在所述流动通道(10)中凸起。
【文档编号】B03C1/02GK103608660SQ201280030716
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2012年6月12日 优先权日:2011年6月21日
【发明者】O.海登, M.J.赫洛, M.赖斯贝克, S.F.特德 申请人:西门子公司