专利名称：一种治疗妇科疾病药物胶囊剂的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗妇科疾病药物胶囊剂的质量控制方法，具体涉及一种治疗妇科疾病药物胶囊剂的鉴别方法和含量测定方法。
背景技术：
作为治疗妇科疾病如带下症、腹痛的良药，本发明胶囊剂已经由申请人申请多项产品及方法专利并投入工业生产多年，推广于市场，疗效确切。
随着中药技术的发展，提高药效并且提高生产效率，提高药品质量的可控性，降低成本是申请人要解决的一大难题。
经过长期理论研究和工业生产实践，申请人找到了最佳制备用量和制备方案以及鉴别、含量测定等质量控制方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗妇科疾病药物胶囊剂的质量控制方法，其中包括鉴别方法及含量测定方法。
本发明所述治疗妇科疾病药物胶囊剂由以下方法制备称取下列原料千斤拔16份、金樱根16份、穿心莲9份、功劳木16份、单面针9份、当归9份、鸡血藤16份、党参9份。
A、将穿心莲碎成粗粉，用乙醇回流法提取制成清膏，药渣备用；B、将当归碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法制成清膏，药渣备用；C、将功劳木和单面针两味药材水煮提取两次，经过滤后将两者滤液合并制成清膏；
D、将千斤拔、金樱根、鸡血藤、党参四味，加水提取一次后过滤，将过滤后的药渣与工艺A的当归药渣及工艺B的穿心莲药渣一起水煮，过滤，合并滤液并制成清膏；E、合并上述4种清膏，经混匀，制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊，即得。
本发明的质量控制方法针对上述制得的胶囊，包括鉴别方法和含量测定两部分，其中鉴别方法包括以下鉴别中的一种或多种当归的鉴别取所述胶囊内容物1-3g，加乙醇10-30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.5-1.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(7-11∶0.5-1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点；党参的鉴别取所述胶囊内容物0.5-1.5g，加甲醇10-30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇约1-3ml使溶解，加于已处理好的中性氧化铝柱上，用10-100％甲醇50-150ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取党参对照药材0.5-1.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-丁醇-水(10-20∶1-5∶1-3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；盐酸小檗碱的鉴别取所述胶囊内容物0.5-3g，加盐酸-乙醇混合溶液(0.5-1.5∶80-120)10-30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液2ul、供试品溶液4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-水(4-8∶1-5∶0.5-2.5∶0.5-2.5∶0.1-0.5)为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
其优选鉴别方法包括以下鉴别中的一种或多种A、取所述胶囊内容物2g，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。
B、取所述胶囊内容物1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇约2ml使溶解，加于已处理好的中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取党参对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-丁醇-水(15∶3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点。
C、取所述胶囊内容物1g，加盐酸-乙醇混合溶液(1-100)20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照品溶液2ul、供试品溶液4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.3)为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
本发明的质量控制方法还包括以下含量测定A、精密称取脱水穿心莲内酯对照品5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液，其中每1ml中含脱水穿心莲内酯50ug；B、取所述胶囊内容物0.1-1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇15-35ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，补足重量，滤过，滤液作为供试品溶液；C、照高效液相色谱法进行测定，色谱条件与系统适用性试验为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(44-64∶36-56∶0.1-2)为流动相；检测波长为250nm，理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算，应不低于1000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；D、所述胶囊内容物含穿心莲以脱水穿心莲内酯(C20H28O4)计，不得少于0.50mg。
其优选含量测定方法如下A、精密称取脱水穿心莲内酯对照品5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液，其中每1ml中含脱水穿心莲内酯50ug；B、取所述胶囊内容物0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，补足重量，滤过，滤液作为供试品溶液；C、照高效液相色谱法(中国药典1995年版一部附录VI D)进行测定，色谱条件与系统适用性试验为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(54∶46∶1)为流动相；检测波长为250nm，理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算，应不低于1000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；D、所述胶囊内容物含穿心莲以脱水穿心莲内酯(C20H28O4)计，不得少于0.50mg。
本发明质量控制方法中的鉴别方法用当归、党参对照药材和盐酸小檗碱对照品来做对照，直接比较斑点大小和位置，使操作更加简便，直观；含量测定方法用穿心莲内酯对照品作检测，使质量更有保障，药效更为确切。
利用本发明质量控制方法监控制得的本发明胶囊剂，药效确切，作用稳定。以下利用实验例具体说明。
实验条件动物清洁级昆明种小鼠、BALB/C小鼠、SD大鼠。
药物本发明胶囊剂0.4g/粒，每g胶囊内容物含生药8.33g；均由湖南株洲千金药业股份有限公司提供；药物配制方法和实验动物分组实验动物分为4组。第一组为对照组，给等体积蒸馏水；第二、三、四组分别为本发明胶囊剂高、中、低剂量组。
本发明胶囊剂取内容物，分别用蒸馏水配成14.56、29.12、58.24g生药/100ml的混悬溶液，供小鼠用；分别配成12.6、25.2、50.4g生药/100ml的混悬溶液，供大鼠用。本发明胶囊剂小鼠剂量分别为3.64、7.28和14.56g生药/kg，大鼠剂量分别为2.52、5.04和10.08g生药/kg(按体表面积折算，分别相当于人一日用量的等量、2倍和4倍)。除另有说明外，以上均每日灌胃给药一次，实验室温度20-25℃。
实验例1抗炎作用
1、对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响小鼠60只，雄性，体重24-26g，随机分成4组(n＝10)，按上述方法给药，每天一次共七天。末次给药1小时后，每鼠右耳涂2％巴豆油(2％巴豆油，20％无水乙醇，5％蒸馏水和73％乙醚)0.1ml，左耳作空白对照。2小时后再给药一次，涂巴豆油4小时后颈椎脱臼处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用直径为8mm的打孔器打下耳片并称重，以两耳重量差作为每组小鼠肿胀度，结果见表1。
表1、对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响(X±SD，n＝10)
与模型对照组比较*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01结果表明，各给药组分别与模型对照组比较，均能明显抑制巴豆油所致小鼠耳肿胀。
2、对角叉菜所致大鼠足跖肿胀的影响SD大鼠60只，雄性，体重180-200g，均分成4组(n＝10)，按上述方法给药，每天一次，共七天，于末次给药后30min，在大鼠左后肢足腱膜下注射1％角叉菜胶0.1ml/只，2小时后再给药一次。测量致炎前后大鼠足跖大小，每小时测1次(用刻度为mm的皮尺测定足爪至踝关节处周长)，给角叉菜后共测6次，计算肿胀度(致炎后足跖周长-致炎前足跖周长)，结果见表2。
表2、对角叉菜所致大鼠足跖肿胀的影响(X±SD，n＝10)
与模型对照组比较*P＞0.05**P＜0.05***P＜0.01结果表明，各给药组分别与模型对照组比较，均能明显抑制角叉菜所致大鼠足跖肿胀，3、对大鼠子宫炎症的影响SD大鼠60只，雌性，体重180-200g，均分成4组(n＝10)，用25％乌拉坦ip 0.4ml/100g麻醉大鼠，然后将大鼠仰卧于手术台，剪去下腹部毛，用75％酒精消毒皮肤，灭菌操作，于下腹部正中切口2cm长，暴露子宫，沿右侧子宫角上1cm处作一横切口，将一塑料管(管径2mm，长0.5cm，重2mg，酒精消毒)放置于子宫内，与子宫切口缝合固定，以防脱落，伤口滴入0.2mg青霉素+链霉素(溶于0.2ml注射用水中)，防感染，术后6小时待大鼠清醒后开始按2.1法给药，每天一次，共七天，末次给药后24小时，颈椎脱臼处死大鼠，取出两侧子宫，以右侧子宫-左侧子宫重即为炎症肿胀度，计算肿胀率和抑制率(以肿胀度÷未致炎子宫重＝肿胀率)；([模型对照组平均肿胀率-给药组平均肿胀率]÷模型对照组平均肿胀率即为抑制率)，结果见表3。
表3、妇科千金胶囊对大鼠子宫炎症的影响(X±SD，n＝10)
与模型对照组比较***P＜0.01。
结果表明，各给药组分别与模型对照组比较，对子宫炎症均具有明显的抑制作用，4、对大鼠棉球肉芽肿的影响SD大鼠50只，雄性，用25％乌拉坦腹腔注射0.4ml/100g麻醉，然后将腹腔部位皮肤切一小口，将两个灭菌棉球(每个重50±1mg，高压灭菌，各加入氨苄青霉素1mg/0.1ml/个，50℃烘干备用)分别植入大鼠两侧腋窝皮下，待动物清醒后分成3组(n＝10)，术后当天开始按2.1法给药。每天一次，共七天。第八天颈椎脱臼处死，取出棉球，60℃烘12小时，称重，计算肉芽肿度，以mg肉芽肿/100g体重表示，结果见表4。
表4、妇科千金胶囊对大鼠棉球肉芽肿的影响(X±SDmg，n＝10)
与模型对照组比较**P＜0.05***P＜0.01结果表明，各给药组分别与模型对照组比较，对大鼠棉球肉芽肿均具有明显的抑制作用。
实验例2对腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响小鼠60只，雌雄兼用，体重20-22g，均分成4组(n＝10)，按上述方法给药，每天一次，共七天，末次给药后1小时，尾静脉注射0.5％伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g，同时腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，20min后处死小鼠，剪开腹部皮肤的肌肉，用2ml生理盐水分两次洗涤腹腔，收集洗涤液，合并后于3000rpm离心，取上清液，于TU-1221紫外分光光度计上于590nm处测吸收度，结果见表5。
表5、对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响(X±SD，n＝10)
与对照组比较***P＜0.01结果表明，各给药组分别与对照组比较，均能明显抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的作用。
实验例3对失血型血虚小鼠的影响小鼠60只，雌雄兼用，体重20-22g，均分成5组(n＝10)，首先取血测小鼠RBC和Hb的正常值，然后除正常对照组外，其它组每只小鼠从眼眶静脉丛放血0.5ml，24小时后再取血测小鼠RBC和Hb的值，然后按2.1法给药，每天一次，共七天，末次给药后24小时，小鼠眼眶静脉丛取血测RBC和Hb值，结果见表6。
表6、妇科千金胶囊对失血型血虚小鼠的影响的影响(X±SD，n＝10)
与模型对照组比较*P＞0.05，*P＜0.05，***P＜0.01与正常对照组比较#P＜0.01结果表明，模型组与正常对照组比较，放血后小鼠RBC和Hb水平明显下降，经给予本发明胶囊剂治疗七天，各给药组分别与模型对照组比较，其RBC和Hb值均显著高于模型组，提示本品具有补血作用。
实验例4对小鼠免疫功能的影响1、对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠血清溶血素抗体形成的影响取BALB/C小鼠60只，体重20-22g，雌雄各半，均分成4组(n＝10)按上述方法给药，于给药第四天，每鼠ip 5％鸡红细胞悬液0.2ml/只进行免疫，继续给药。除正常对照组外，其余各组动物于给药的第六、七、八天分别ip环磷酰胺20mg/Kg/天，再给药三天，于末次给药后1小时，从小鼠眼眶静脉丛取血，分离血清，按文献的方法在TU-1221紫外分光光度计上于540nm处，测其血清中溶血素抗体，结果见表7。
表7、对Cy所致免疫功能低下小鼠溶血素抗体形成的影响(X±SD，n＝10)
与模型对照组比较***P＜0.01结果表明，环磷酰胺模型组与正常对照组比较，环磷酰胺能明显抑制小鼠溶血素抗体的产生，各给药组分别与模型组比较，均可明显对抗环磷酰胺引起的小鼠免疫功能抑制的作用。
2、对环磷酰胺(Cy)所致免疫功能低下小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响取BALB/C小鼠60只，体重20-22g，雌雄各半，均分成4组(n＝10)按2.1法给药，除正常对照组外，其余各组动物于第七、八、九天分别ip环磷酰胺20mg/Kg，继续给药三天。于末次给药后1小时，每只小鼠ip 5％鸡红细胞0.5ml，4小时后处死小鼠，用1ml生理盐水洗腹腔，收集细胞，涂片，染色，油镜下每片计算200个吞噬细胞及吞噬的鸡红细胞数，计算吞噬百分率和吞噬指数，结果见表8。
表8、对Cy所致免疫功能低下的小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响(X±SD)
与模型对照组比较***P＜0.01(n＝10)结果表明，模型组与正常对照组比较，环磷酰胺组能明显抑制小鼠巨噬细胞的吞噬功能，各给药组分别与模型组比较，均可明显提高环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的吞噬百分率和吞噬指数。
实验例5 对小鼠体内大肠杆菌感染的保护作用取昆明种小鼠140只，雌雄兼用，体重20-22g，均分成8组(n＝10)，第一组为正常对照组(不给大肠杆菌)，第二组为大肠杆菌对照组(不给药物)，两组均灌服蒸馏水，第三至第八组给予本发明胶囊剂，均ig给药，2小时后，每只小鼠ip 0.5ml大肠杆菌肉汤培养液(细菌量为109CFU/ml，含10％胃膜素粉)，在小鼠感染细菌后第8、16和24小时，再各给药一次，观察七天，记录动物死亡数。结果见表10。
表10、对大肠杆菌感染小鼠的保护作用(X±SD，n＝10)
结果表明，本发明胶囊剂对大肠杆菌感染小鼠有一定的保护作用。
实验例5 本发明含量测定方法精密度试验取同一浓度的对照品溶液，按实施例3中“含量测定”方法测定5次，记录峰面积积分值，结果见表11。
表11、精密度试验结果
结果表明本发明含量测定方法精密度好。
实验例6 本发明含量测定方法稳定性试验按实施例3中“含量测定”方法测定，对同一份样品溶液分别在0、1、2、3、4、5小时进行测定，结果见表12。
表12、稳定性试验结果
结果表明，在5小时内基本稳定。
实验例7 本发明含量测定方法重复性试验取同一批号的样品5份(n＝2)，按实施例3中“含量测定”方法测定，结果见表13。
表13、重复性实验结果
结果表明本发明含量测定方法重复性好。
实验例8 本发明含量测定方法加样回收率试验精密称取已知含量为2.146mg/g样品5份，分别精密加入脱水穿心莲内酯对照品0.732mg，按实施例3中“含量测定”方法测定，结果见表14。
表14、回收率测定结果
结果表明，本方法回收率较好。
具体实施例方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1本发明药物胶囊剂的制备方法称取下列原料千斤拔16g、金樱根16g、穿心莲9g、功劳木16g、单面针9g、当归9g、鸡血藤16g、党参9g。
A、将穿心莲碎成粗粉，用乙醇回流法提取制成清膏，药渣备用；B、将当归碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法制成清膏，药渣备用；C、将功劳木和单面针两味药材水煮提取两次，经过滤后将两者滤液合并制成清膏；D、将千斤拔、金樱根、鸡血藤、党参四味，加水提取一次后过滤，将过滤后的药渣与工艺A的当归药渣及工艺B的穿心莲药渣一起水煮，过滤，合并滤液并制成清膏；E、合并上述4种清膏，经混匀，制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊，即得。
实施例2 本发明药物胶囊剂的鉴别方法A、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物2克，加60％乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。
B、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物1克，加40％甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇约2ml使溶解，加于已处理好的中性氧化铝柱(200目，5g，内径15mm)上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取党参对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-丁醇-水(15∶3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点。
C、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物1克，加盐酸-乙醇混合溶液(1∶100)20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照品溶液2ul、供试品溶液4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.3)为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
实施例3 本发明药物胶囊剂的鉴别方法A、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物3克，加95％乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(11∶1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。
B、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物0.5克，加80％甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇约3ml使溶解，加于已处理好的中性氧化铝柱(100目，5g，内径10mm)上，用60％甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液。另取党参对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-丁醇-水(10∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点。
C、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物3克，加盐酸-乙醇混合溶液(0.5∶80)10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照品溶液2ul、供试品溶液4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-水(8∶5∶2.5∶0.5∶0.5)为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
实施例4 本发明药物胶囊剂的鉴别方法A、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物3克，加40％乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇3ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(7∶1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。
B、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物1.5克，加50％甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇约3ml使溶解，加于已处理好的中性氧化铝柱(200目，5g，内径10mm)上，用60％甲醇150ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液。另取党参对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-丁醇-水(10∶5∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点。
C、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物3克，加盐酸-乙醇混合溶液(0.5∶120)10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照品溶液2ul、供试品溶液4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-水(8∶5∶0.5∶2.5∶0.5)为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
实施例5 本发明药物胶囊剂的鉴别方法
A、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物1克，加40％乙醇100ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇3ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。
B、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物1.5克，加60％甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇约1ml使溶解，加于已处理好的中性氧化铝柱(100目，5g，内径15mm)上，用20％甲醇150ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液。另取党参对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-丁醇-水(20∶5∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点。
C、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物0.5克，加盐酸-乙醇混合溶液(1.5∶120)10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照品溶液2ul、供试品溶液4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-水(4∶1∶0.5∶2.5∶0.1)为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
实施例6 本发明药物胶囊剂的含量测定方法A、精密称取脱水穿心莲内酯对照品5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液，其中每1ml中含脱水穿心莲内酯50ug；B、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物0.5克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加40％甲醇25ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，补足重量，滤过，滤液作为供试品溶液；C、照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)进行测定，色谱条件与系统适用性试验为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(54∶46∶1)为流动相；检测波长为250nm，理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算，应不低于1000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；D、本药物组合物含穿心莲以脱水穿心莲内酯(C20H28O4)计，不得少于0.50mg。
实施例7 本发明药物胶囊剂的含量测定方法A、精密称取脱水穿心莲内酯对照品5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液，其中每1ml中含脱水穿心莲内酯50ug；B、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50％甲醇35ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，补足重量，滤过，滤液作为供试品溶液；C、照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)进行测定，色谱条件与系统适用性试验为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(64∶36∶2)为流动相；检测波长为250nm，理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算，应不低于1000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；D、本药物组合物含穿心莲以脱水穿心莲内酯(C20H28O4)计，不得少于0.50mg。
实施例8 本发明的含量测定方法A、精密称取脱水穿心莲内酯对照品5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液，其中每1ml中含脱水穿心莲内酯50ug；B、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物0.1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加60％甲醇15ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，补足重量，滤过，滤液作为供试品溶液；C、照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)进行测定，色谱条件与系统适用性试验为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(44∶56∶0.1)为流动相；检测波长为250nm，理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算，应不低于1000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；D、本药物组合物含穿心莲以脱水穿心莲内酯(C20H28O4)计，不得少于0.50mg。
权利要求
1.一种由千斤拔、金樱根、穿心莲、功劳木、单面针、当归、鸡血藤、党参制成的治疗妇科疾病药物胶囊剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括鉴别和含量测定两部分，其中鉴别包括采用薄层色谱法，分别用当归对照药材、党参对照药材和盐酸小檗碱对照品进行的鉴别；含量测定以含穿心莲确定，以脱水穿心莲内酯(C20H28O4)计，不得少于0.50mg。
2.如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于所述鉴别包括如下鉴别中的一种或多种当归的鉴别取所述胶囊内容物1-3g，加乙醇10-30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.5-1.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(7-11∶0.5-1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点；党参的鉴别取所述胶囊内容物0.5-1.5g，加甲醇10-30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇约1-3ml使溶解，加于已处理好的中性氧化铝柱上，用10-100％甲醇50-150ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取党参对照药材0.5-1.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-丁醇-水(10-20∶1-5∶1-3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；盐酸小檗碱的鉴别取所述胶囊内容物0.5-3g，加盐酸-乙醇混合溶液(0.5-1.5∶80-120)10-30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液2ul、供试品溶液4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-水(4-8∶1-5∶0.5-2.5∶0.5-2.5∶0.1-0.5)为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
3.如权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于所述鉴别包括如下鉴别中的一种或多种当归的鉴别取所述胶囊内容物2g，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点；党参的鉴别取所述胶囊内容物1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇约2ml使溶解，加于已处理好的中性氧化铝柱上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取党参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-丁醇-水(15∶3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；盐酸小檗碱的鉴别取所述胶囊内容物1g，加盐酸-乙醇混合溶液(1→100)20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液2ul、供试品溶液4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.3)为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
4.如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于所述含量测定包括A、精密称取脱水穿心莲内酯对照品5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液，其中每1ml中含脱水穿心莲内酯50ug；B、取所述胶囊内容物0.1-1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇15-35ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，补足重量，滤过，滤液作为供试品溶液；C、照高效液相色谱法进行测定，色谱条件与系统适用性试验为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(44-64∶36-56∶0.1-2)为流动相；检测波长为250nm，理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算，应不低于1000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；D、所述胶囊内容物含穿心莲以脱水穿心莲内酯(C20H28O4)计，不得少于0.50mg。
5.如权利要求4所述的质量控制方法，其特征在于所述含量测定包括A、精密称取脱水穿心莲内酯对照品5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液，其中每1ml中含脱水穿心莲内酯50ug；B、取所述胶囊内容物0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，补足重量，滤过，滤液作为供试品溶液；C、照高效液相色谱法进行测定，色谱条件与系统适用性试验为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(54∶46∶1)为流动相；检测波长为250nm，理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算，应不低于1000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；D、所述胶囊内容物含穿心莲以脱水穿心莲内酯(C20H28O4)计，不得少于0.50mg。
全文摘要
本发明涉及一种治疗妇科疾病药物的质量控制方法，该方法包括当归、党参、盐酸小檗碱的鉴别方法和穿心莲含量测定方法。本发明的质量控制方法不仅能够更简便、直观地鉴定制剂，而且可以更好地保障该药物的药效。
文档编号G01N30/90GK1931272SQ200510086429
公开日2007年3月21日 申请日期2005年9月15日 优先权日2005年9月15日
发明者左之文, 龚云, 王振勇 申请人:株洲千金药业股份有限公司