专利名称：大黄素和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷以及白藜芦醇苷对照品的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种大黄素、大黄素-8-0-P-D-葡萄糖苷和白藜芦醇苷对照品的同 时制备方法。
背景技术：
随着中药与天然药物药效物质基础研究的不断深入，对中药或天然药物中的 活性单体的需求逐渐增大，制备大量的活性单体以供中药或天然药物质量标准研 究和进一步的活性研究就显得比较迫切。
大黄素和大黄素-8-0-卩-D-葡萄糖苷为蒽醌类化合物具有明显的抗菌、消炎等 活性在中药大黄和虎杖中的含量较高。白藜芦醇苷属于二苯乙烯类化合物，具有 强心、抗肿瘤及抗氧化等活性，在虎杖中含量较高。这三种化合物在中国药典中 主要作为大黄和虎杖的质量控制指标。通常情况下大黄素、大黄素-8-0-(3-D-葡萄 糖苷和白藜戸醇苷这三种对照品依据在不同植物中的含量高低分别由大黄和虎 杖制备纯化。本发明首次从次常用中药毛脉蓼中同时制备得到三种对照品。
毛脉蓼/Wygoraw7 cz犯脱n^ Ohwi为蓼科蓼属植物，其块根除用作红药子 (Radix Polygoni Ciliinerve)夕卜，在西北地区还作朱砂七或朱砂莲药用，产陕西 秦岭和大巴山各县，湖北、四川、贵州也有少量分布， 一般均自产自销。气微、 味苦、微涩、性凉，有清热解毒、凉血止血、祛风湿、强腰膝等功能，用于胃肠 炎、菌痢、扁桃体炎、月经不调、功能性子宫出血等。现代药理学研究证实其具 有较强的抗氧化、抗菌、抗病毒等活性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种大黄素、大黄素-8-0-[3-D-葡萄糖苷和白藜戸醇苷 对照品的同时制备方法。
本发明的发明思想是将粉碎后的毛脉蓼药材加入溶剂提取，提取液过滤、减
压回收得到总提物，总提物加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙 酯萃取部分经过两步硅胶柱层析纯化；柱层析洗脱液合并浓縮后，置于不同溶剂
中重结晶，分别得到大黄素、大黄素-8-0-P-D-葡萄糖苷和白藜卢醇苷三种对照品。一种大黄素和大黄素-8-0-(3-D-葡萄糖苷以及白藜芦醇苷对照品的制备方法， 其特征在于该方法依次包括如下步骤
1) 将粉碎后的毛脉蓼药材中加入溶剂提取；
2) 将毛脉蓼药材提取液过滤、减压回收得到总提物，加水混悬，依次用石 油醚、乙酸乙酯萃取，减压回收得石油醚部分和乙酸乙酯部分；
3) 取乙酸乙酯萃取部分经过两次柱层析纯化；
4) 合并不同配比的柱层析洗脱液，减压浓縮后置于不同溶剂中重结晶，分 别得到大黄素、大黄素-8-0-(3-D-葡萄糖苷和白藜芦醇苷三种对照品。
本发明更具体的制备方法依次包括如下步骤
A、 在粉碎后过20-80目筛的毛脉蓼药材中加入60~98%的工业乙醇或甲醇， 提取方法包括热回流、超声或微波提取，提取时间为30-180分钟；
B、 将毛脉蓼药材提取液过滤、减压回收得到总提物，加水混悬，依次用石 油醚、乙酸乙酯萃取，减压回收得石油醚部分和乙酸乙酯部分；
C、 取乙酸乙酯萃取部分经过两次硅胶柱层析纯化，第一次柱层析采用石油
醚/乙酸乙酯梯度洗脱，第二次柱层析采用氯仿/甲醇等度洗脱；
D、 收集合并不同配比的柱层析洗脱液，减压浓缩后在氯仿/甲醇溶液或甲醇 /水溶液中重结晶，分别得到大黄素、大黄素-8-0-P-D-葡萄糖苷和白藜戸醇苷三 种对照品。
在步骤A中，料液的体积比为l: 1~1: 10。
在步骤c中，第一次柱层析采用石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱，石油醚与乙酸
乙酯的体积比为9: 1 3: 2。
在步骤c中，第二次柱层析采用氯仿/甲醇等度洗脱，氯仿与甲醇的体积比
为5: 1。
在步骤C中，柱层析填料为柱层析用硅胶。
在步骤D中，在氯仿与甲醇溶液的体积比为1: 9 9: 1。 在步骤D中，甲醇与水溶液的体积比为1: 9 9: 1。 本发明的优点在于
1)同时从一种中药中提取大黄素、大黄素-8-0-(3-D-葡萄糖苷和白藜戸醇苷 三种对照品'因为在通常情况下大黄素、大黄素-8-0-P-D-葡萄糖苷和白藜戸醇苷三种对照品依据在不同植物中的含量高低分别从不同的药材，如大黄和虎杖中提 取分离纯化。
2) 通过石油醚萃取除去小极性杂质，使得乙酸乙酯萃取部分能够同时富集 两种不同类型的化合物，即蒽醌和二苯乙烯类化合物。
3) 经过两次硅胶柱层析分离纯化了包括苷元和苷在内的不同极性的三种对 照品。
4) 针对不同化合物的性质和特点，分别采用不同溶剂重结晶，从而得到高 纯度的单体，简单、方便、消耗少，污染低。
5) 本发明所得的高纯度的大黄素、大黄素-8-0-P-D-葡萄糖苷和白藜芦醇苷
在低温避光的条件下可稳定保存至少一年不变。
6) 本发明制得的对照品得率高，纯度高(98%以上)，同时工艺流程短，设 备及操作简单，成本低廉，适合较大规模的制备。
具体实施例方式
大黄素、大黄素-8-0-(3-D-葡萄糖苷和白藜芦醇苷对照品的同时制备方法步骤 如下
1) 粉碎后的毛脉蓼药材(过20-80目筛)中加入60 98%的工业乙醇或甲醇， 提取方法包括热回流、超声或微波提取，提取时间为30-180分钟，料液比为1:
1~1: 10。
2) 将毛脉蓼药材提取液过滤、减压回收得到总提物，加水混悬，依次用石 油醚、乙酸乙酯萃取，减压回收得石油醚部分和乙酸乙酯部分。
3) 取乙酸乙酯萃取部分经过两次硅胶柱层析纯化；第一次柱层析采用石油 醚乙酸乙酯(9: 1 3: 2)梯度洗脱，第二次采用氯仿甲醇(5: 1)等度洗 脱。
4) 收集合并不同配比的柱层析洗脱液，浓縮后在不同比例的氯仿/甲醇溶液 (1: 9 9: 1)或甲醇/水溶液(1: 9 9: 1)中重结晶，分别得到大黄素、大
黄素-8-0-P-D-葡萄糖苷和白藜芦醇苷三种对照品。
用上述制备方法对大黄素、大黄素-8-0-(3-D-葡萄糖苷和白藜戸醇苷进行提 取、分离和纯化，得到的产品纯度在98%以上，符合新药审批办法规定中药对 照品的纯度要求，因此可以作为大黄素、大黄素-8-0-(3-D-葡萄糖苷和白藜卢醇苷
6的对照品使用。
本发明中大黄素、大黄素-8-0-P-D-葡萄糖苷和白藜芦醇苷的鉴别采用薄层色 谱法；含量测定采用高效液相色谱法，测定结果可靠。
下面结合实施例对本发明作详细说明。 实施例l:
毛脉蓼块根100g，粉碎后(过20目筛)，置于圆底烧瓶中提取，加入80% 的工业乙醇热回流提取，提取时间为120分钟，料液比为1: 3，提取三次，合 并提取液，过滤、减压回收得到总提物。毛脉蓼总提物加水混悬，依次用石油醚、 乙酸乙酯萃取，减压回收得石油醚部分和乙酸乙酯部分。乙酸乙酯部分经硅胶柱
层析，以石油醚乙酸乙酯(9: 1 3: 2)梯度洗脱，用硅胶薄层色谱法检测，
合并相同组分，分别得到大黄素和大黄素-8-0-P-D-葡萄糖苷，经氯仿/甲醇溶液
(5: 2)重结晶得到大黄素0.94g，经氯仿/甲醇溶液(1: 1)重结晶得到大黄素
-8-0-卩-0-葡萄糖苷4.05g，含量分别为98.0%和99.5%;以氯仿甲醇(5: 1)
等度洗脱，用硅胶薄层色谱法检测，合并相同组分，经甲醇/水溶液(9: 1)重
结晶得到白藜芦醇苷2.59g，含量为98.1%。
大黄素、大黄素-8-0-(3-D-葡萄糖苷和白藜卢醇苷对照品的化学结构
<formula>formula see original document page 7</formula>
大黄素 大黄素-8-op-D-葡萄糖苷 白藜戸醇苷
大黄素、大黄素-8-0-(3-D-葡萄糖苷和白藜芦醇苷对照品的理化常数及结构鉴定
大黄素橙色针晶(CHCl3)，易溶于碱液；Borntrager反应呈阳性；醋酸镁反 应呈阳性；UV 、聽443.20， 290.8， 267.6， 255.8， 229.2; NMR(Aceton-d6): S12.19(1H, s， 8-OH) ，12.06(1H， s,l-OH), 10.09(1H, s，6-0H) ,7.56(1H, s, H-4), 7.25(1H, d， J=2.4Hz， H-5), 7.13(1H， s, H-2), 6.66(1H, d, J^2.4Hz, H-7), 2.47(3H, s,3-CH3)。
大黄素-8-0-卩-D-葡萄糖苷黄色针晶(CHCl3-CH30H), UV^"nm: 422.4， 329.2， 324.8， 284.4， 230.4;易溶于碱液；Borntrager反应呈阳性;醋酸镁反应 呈阳性；Molish反应阳性，示为蒽醌苷类物质。^NMR(DMSO-d6): 513.17(1H, s,8-OH) ,11.25(1H, s,6-OH), 7.29(1H, s ,H-4) ,7.16(1H, s ,H-5) ,7.00(1H, d, J=1.9Hz ,H-2) ,7.46(1H, s, H-7) ，2.40(3H, s,3-CH3) ,5.07(1H, d, J=7.6Hz， Anomeric H) '3.81 3.23(5H,m ,Sugar-H)。
白藜芦醇苷白色针晶(MeOH-H20)，紫外(365nm)下显蓝色荧光，Molish 反应阳性。UV c亂.487.0， 321,5， 307.5， 218.5; !HNMR(DMSO-d6): S9.53(1H, s,4，-OH) ,9.39(1H, s,3(5)-OH) ,7.40 (2H, d,风7Hz ,H-2，(6')), 6.76 (2H, d, 风7Hz ,H-3，(5')) ,6.86 (lH,d, J二16.3Hz ，Ha) ,7.02 (lH,d, M6.3Hz邻),6.72(1H, t,月.3Hz， H-2) ,6.33 (1H, t, J=4.3Hz ,H-4) ,6.56(1H, t,月.4Hz ,H-6) ，4.80 (lH,d, 7=7.1Hz ,Anomeric H)， 3.74 3.16(5H，m ，Sugar-H) ; 13C NMR(Acetone-d6): 5141.4(C-l), 107.0(C-2), 160,4(C-3), 104.1 (C陽4),
159.5(C-5)，108.4(C-6)，126.7(C-a),130.0(C-卩),130.4(C陽r)，128.9(C-2，(6，))，116.5(C-3' (5，))， 158.4 (C-4，)， 102.4(C-1") , 78,3 (C-2"),
75.0(C-3"),71.5(C-4，，) ，78.1(C-5") ,62.6(C-6")。
8
权利要求
1、一种大黄素和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷以及白藜芦醇苷对照品的制备方法，其特征在于该方法依次包括如下步骤1)将粉碎后的毛脉蓼药材中加入溶剂提取；2)将毛脉蓼药材提取液过滤、减压回收得到总提物，加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，减压回收得石油醚部分和乙酸乙酯部分；3)取乙酸乙酯萃取部分经过两次柱层析纯化；4)合并不同配比的柱层析洗脱液，减压浓缩后置于不同溶剂中重结晶，分别得到大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和白藜芦醇苷三种对照品。
2、 如权利要求1所述的方法，其特征在于该方法依次包括如下步骤A、 在粉碎后过20-80目筛的毛脉蓼药材中加入60~98%的工业乙醇或甲醇， 提取方法包括热回流、超声或微波提取，提取时间为30-180分钟；B、 将毛脉蓼药材提取液过滤、减压回收得到总提物，加水混悬，依次用石 油醚、乙酸乙酯萃取，减压回收得石油醚部分和乙酸乙酯部分；C、 取乙酸乙酯萃取部分经过两次硅胶柱层析纯化，第一次柱层析采用石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱，第二次柱层析采用氯仿/甲醇等度洗脱；D、 收集合并不同配比的柱层析洗脱液，减压浓縮后在氯仿/甲醇溶液或甲醇 /水溶液中重结晶，分别得到大黄素、大黄素-8-0-P-D-葡萄糖苷和白藜卢醇苷三 种对照品。
3、 如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤A中，料液的体积比为l:1 1: 10。
4、 如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤C中，第一次柱层析采用石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱，石油醚与乙酸乙酯的体积比为9: 1 3: 2。
5、 如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤C中，第二次柱层析采用氯仿/甲醇等度洗脱，氯仿与甲醇的体积比为5: 1。
6、 如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤C中，柱层析填料为柱层析 用硅胶。
7、 如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤D中，在氯仿与甲醇溶液的体积比为1: 9 9: 1
8、如权利要求2所述的方法，其特征在于甲醇与水溶液的体积比为1: 9 9: 1。
全文摘要
本发明公开了一种大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和白藜芦醇苷对照品的同时制备方法。该方法将粉碎后的毛脉蓼药材加入溶剂提取，提取液过滤、减压回收得到总提物，总提物加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯萃取部分经过两步硅胶柱层析纯化；柱层析洗脱液合并浓缩后，置于不同溶剂中重结晶，分别得到大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和白藜芦醇苷三种对照品。其优点是制得的对照品得率高，纯度高(98％以上)，同时工艺流程短，设备及操作简单，成本低廉，污染小，适合较大规模的生产制备。
文档编号C07C50/34GK101462937SQ20071030728
公开日2009年6月24日 申请日期2007年12月18日 优先权日2007年12月18日
发明者师彦平, 戚欢阳 申请人:中国科学院兰州化学物理研究所