专利名称：：鸦胆子油乳注射液的鉴别方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药注射液的鉴别方法，特别是涉及一种利用指纹图谱鉴别鸦胆子油乳注射液的方法。
背景技术：
：鸦胆子油乳注射液为鸦胆子油与乳化剂制成的灭菌乳状液，形成的乳剂粒子细小，有较大的油/水界面，可提高药物吸收的速度和程度，提高药物的生物利用度。因乳剂具有定向分布的作用，使鸦胆子油乳在癌症病灶有较高浓度，从而提高抗癌效果。鸦胆子油乳注射液起效快，疗效短，毒副作用小，能扶正固本，是治疗癌症，肿瘤的特效药物，如授权公告日为2006年1月18日的中国发明专利ZL03156023-7"—种低毒性的鸦胆子油乳注射液及制备方法"，它是一种毒性低,乳粒细腻均匀的制剂。众所周知，鸦胆子油乳注射液其药效不是来自任何单一的活性成分，而是多种有效部位群共同作用的结果，目前，质量标准中仅对鸦胆子油乳注射液中的油酸和总酸量的含量进行测定，其质量控制方法的不全面性及生产过程中的不稳定性导致各批次产品之间质量可能会出现差异，很难说能从通过"量"达到控制"质"的目的。且油酸指标成分并非鸦胆子所独有成分，通过单一指标来说明其特殊的药理活性，专属性较差，但鉴于实际又不可能对各种成分进行一一测定，因此，需要一种快速、相对准确的鸦胆子油乳注射液鉴别方法。
发明内容本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种鸦胆子油乳注射液的鉴别方法。本发明的技术方案概述如下一种鸦胆子油乳注射液的鉴别方法，包括如下步骤第一步，先建立脂肪酸类成分标准指纹图谱，方法如下-(a)供试品溶液的制备精密量取鸦胆子油乳注射液，加入甲醇或体积百分比浓度为95%的乙醇水溶液或无水乙醇，涡旋混合使破乳，加入乙醚或乙酸乙酯萃取，振摇，静置分层后，取上层液滤过，取滤液于量瓶中，在水浴中挥干乙醚或乙酸乙酯，加入硫酸甲醇溶液,混匀，水浴，振摇，冷却后转移至分液漏斗中,精密加入正己垸或正庚烷或环己烷，洗涤量瓶一并转移至分液漏斗中，振摇提取，静置分层后，弃去下层溶液，上层用蒸馏水洗涤，洗涤至pH为6-7,用适量无水硫酸钠脱水后，为供试品溶液；(b)参照物溶液的制备精密量取对照品油酸，加入硫酸甲醇溶液，混匀,水浴，振摇，冷却^转移至分液漏斗中,精密加入正己烷或正庚垸或环己烷,洗涤量瓶一并转移至分液漏斗中，振摇提取，静置分层后，弃去下层溶液，上层用蒸馏水洗漆，洗漆至pH为6-7，用适量无水硫酸钠脱水后，精密量取lml，置5ml量瓶中，用正己烷或正庚烷或环己烷稀释至刻度为参照物溶液；(C)色谱条件键合/交联聚乙二醇毛细管柱，进样口温度为250。C;氢火焰离子化检测器，检测器温度为250'C;载气流速为1.5ml/min，分流比50:1;程序升温初始160t:保持5分钟，再以每分钟4'C升至220'C，保持40分钟；(d)测定分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，注入气相色谱仪，用气相色谱法测定，制定鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分指纹图谱；所述鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分指纹图谱中，有四个共有峰，以参照物油酸的色谱峰的相对保留时间和相对峰面积为1，计算其它色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，上述四个共有峰分别是1号峰平均相对保留时间RRT为0.70，相对峰面积为12%~20%，2号峰平均相对保留时间RRT为0.97,相对峰面积为7%~13%，3号峰平均相对保留时间RRT为1.0,相对峰面积为100%,4号峰平均相对保留时间RRT为1.06，相对峰面积为29%43%，所述1号峰、2号峰、4号峰的相对保留时间的差值均小于10%,所述四个共有峰的相似度按峰面积计算均大于0.99，非共有峰总面积不大于总峰面积的10%;，二步，以上述相同的方法测定待测鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分样品指纹图谱；第三步，将待测鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分样品指纹图谱与标准的鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分指纹图谱对比，鉴别鸦胆子油乳注射液的质量。优选的是所述供试品溶液的制备为，精密量取鸦胆子油乳注射液0.5ml置25ml具塞试管中，加入甲醇0.5ml或体积百分比浓度为95%的乙醇水溶液0.5ml或无水乙醇0.5ml，涡旋混合l分钟使破乳，加入乙醚20ml或乙酸乙酯20ml萃取，振摇，静置分层后，取上层液滤过，取滤液于量瓶中，在水浴中挥干乙醚或乙酸乙酯，加入体积百分浓度为2W的硫酸甲醇溶液5ml，混匀，6065'C水浴3060分钟，振摇，冷却后转移至分液漏斗中，精密加入正己烷lOml或正庚垸10ml或环己垸10ml,洗涤量瓶一并转移至分液漏斗中，振摇提取l分钟，静置分层后，弃去下层溶液，上层用蒸馏水洗涤3次，每次10ml，洗漆至pH为67，用适量无水硫酸钠脱水后，为供试品溶液。所述参照物溶液的制备为，精密量取对照品油酸50mg置25ml的量瓶中，加入体积百分^度为2。/。的硫酸甲醇溶液5ml，混匀，6065'C水浴3060分钟，振摇，冷却后转移至分液漏斗中，精密加入正己烷10ml或正庚垸10ml或环己垸10ml，洗涤量瓶一并转移至分液漏斗中，振摇提取l分钟，静置分层后，弃去下层溶液，上层用蒸馏水洗涤3次，每次10ml,洗涤至pH为67,用适量无水硫酸钠脱水后，精密量取lml，置5ml量瓶中，用正己烷或正庚烷或环己烷稀释至刻度为参照物溶液。所述键合/交联聚乙二醇毛细管柱的固定液为聚乙二醇-20M或聚乙二醇-20M-2-2硝基对苯二甲酸或己二酸二乙二醇丁二酸聚酯或100%氰丙基聚硅氧烷，所述载气为高纯氮气或氦气或氢气。一种鸦胆子油乳注射液的鉴别方法，包括如下步骤第一步，先建立甘油三酯类成分标准指纹图谱，方法如下鸦胆子油乳注射液，精密称定，置量瓶中，加体积比为4090:1060的甲醇-二氯甲垸溶液稀释至刻度，摇匀，滤液作为供试品溶液；(b)参照物溶液的制备取三油酸甘油酯，加体积比为4090:1060的甲醇-二氯甲烷溶液制成每lml中含O.5mg三油酸甘油酯的溶液为参照物溶液；(C)色谱条件以十八烷基键合硅胶为填料；流动相为甲醇-体积百分比为0.2%冰醋酸二氯甲烷溶液，程序梯度洗脱:0至6分钟，甲醇的比例从70%降为55%,保持24分钟，30至35分钟，甲醇的比例从55%升为70%，保持5分钟或者是0至6分钟，甲醇的比例从80%降^60%,保持9分钟，15至30分钟，甲醇的比例从60%升为80%,保持5分钟；以蒸发光散射检测器检测，其漂移管温度为40'C，载气压力为2.0Bar，柱温为25'C;(d)测定分别精密吸取参照物溶液及供试品溶液，用高效液相色谱仪测定，制定鸦胆子油乳注射液甘油三酯类成分标准指纹图谱；所述鸦胆子油乳注射液甘油三酯类成分标准指纹图谱中共有峰有8个,其中7,8号峰为辅料磷脂的峰，而主成份特征峰为6个，以参照物峰4号峰的相对保留时间和相对峰面积为1计算其它色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，上述指纹峰分别是1号峰平均相对保留时间RRT为0.806，2号峰平均相对保留时间RRT为0.870，3号峰平均相对保留时间RRT为0.934，相对峰面积为40%60%,4号峰平均相对保留时间RRT为1.00，5号峰平均相对保留时间RRT为1.086，6号峰平均相对保留时间RRT为1.179，相对保留时间的差值小于10%，非共有峰总面积不大于总峰面积的10%;以8个共有峰的峰面积计算相似度不低于0.99;第二步以上述相同的方法测定待测鸦胆子油乳注射液样品指纹图谱；第三歩:将待测鸦胆子油乳注射液甘油三酯类成分样品指纹图谱与标准的鸦胆子油乳注射液甘油三酯类成分指纹图谱对比，鉴别鸦胆子油乳注射液的质量。所述的精密吸取参照物溶液与供试品溶液为各lpl，进样。优选的是所述供试品溶液的制备为，精密称取鸦胆子油乳注射液0.50g，置25ral量瓶中，加体积比为50:50的甲醇-二氯甲烷溶液稀释至刻度，摇匀，滤液作为供试品溶液。所述参照物溶液的制备为取三油酸甘油酯，加体积比为50:50的甲醇-二氯甲垸溶液制成每lml中含0.5mg三油酸甘油酯的溶液为参照物溶液。所述蒸发光散射检测器的型号为迪马SEDEX75。本发明是结合大量生产批次统计情况和试验研究工作，建立了鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱和鸦胆子油乳注射液甘油三酯类标准指纹图谱，能较好地保证鸦胆子油乳注射液的有效性和均一性，到目前为止，上述两种标准指纹图谱尚无公开报道。本发明具有下述特点1.整体性、宏观性和模糊性，本发明克服了单一成分含量测定难以反映整体含量的缺陷。本发明为完整、准确评价鸦胆子油乳注射液的质量提供了新的方法和手段。2.研究表明脂肪酸类和甘油三酯类为鸦胆子油乳注射液两大重要活性成分，脂肪酸尤其是不饱和脂肪酸产生的只选择性地对癌症细胞产生致死量的自由基和脂化过氧化物，而对正常细胞的细胞毒性很低；甘油三酯类在体内水解产生活性成分脂肪酸。以油酸为参照物建立起来的GC标准指纹图谱，代表着脂肪酸的药理活性，以三油酸甘油为参照物建立起来的HPLC指纹图，代表着甘油三酯类的生物活性，这两类活性成分的监控与跟踪具有代表性。3.用视觉直观辨识图谱的异同；用半定量指标量化样品的真伪、优劣；用相似度计算方法评价质量及稳定性。图1为鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱；图2为鸦胆子油乳注射液甘油三酯类成分标准指纹图谱。具体实施方式下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明。实施例1:鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱的建立1.仪器与试药1.1仪器57LZ'啦血"GC-2010气相色谱仪，氢火焰离子化检测器(FID)1.2试药油酸对照品由SIGMA公司提供；无水硫酸钠、硫酸、甲醇、乙醚、正庚烷、环己烷、正己烷均为分析纯；鸦胆子油乳注射液由浙江九旭药业有限公司提供，批号为20060601、20060602、20060603、20060609、20060610、20060611、20060612、20060613、20060614、2006(^15。2.方法与结果2.1色谱条件与系统适用性SUPELC0WAX-10毛细管色谱柱(30mX0.25mmX0.25Wi0(聚乙二醇-20M);进样口温度25CTC;检测器及温度氢火焰离子化检测器FID，25(TC;以高纯氮为载气，载气流速为1.5ml/min,分流比50:1;程序升温初始16(TC保持5分钟，再以每分钟4'C升至220°C，保持40分钟。理论板数按油酸峰计算，应不低于10000。3.指纹图谱测定3.1鸦胆子油乳注射液脂肪酸类指纹图谱建立(a)供试品溶液的制备精密量取鸦胆子油乳注射液0.5ml,置25ml具塞试管中，加入甲醇0.5ml，涡旋混合l分钟使破乳，加入乙醚20ml萃取，振摇，静置分层后，取上层液滤过，取滤液于量瓶中，在水浴中挥干乙醚，加入体积百分浓度为2%的硫酸甲醇溶液5ml,混匀，在62。C水浴中反应45分钟，振摇，冷却后转移至分液漏斗中，精密加入正己烷10ml,洗涤量瓶一并转移至分液漏斗中，振摇提取l分钟，静置分层后，弃去下层溶液，上层用蒸馏水洗涤3次，每次10ml，洗涤至pH为7，用适量无水硫酸钠脱水后，为供试品溶液-，(b)参照物溶液的制备精密量取对照品油酸50mg，置25ml的量瓶中，加入体积百分浓度为2。/。的硫酸甲醇溶液5ml，混匀，在62'C水浴中反应45分钟，振摇，冷却后转移至分液漏斗中，精密加入正己烷10ml，洗涤量瓶一并转移至分液漏斗中，振摇提取l分钟，静置分层后，弃去下层溶液，上层用蒸馏水洗涤3次，每次10ml，洗涤至pH为6-7，用适量无水硫酸钠脱水后，精密量取lml，置5ml量瓶中，用正己烷稀释至刻度为参照物溶液；分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各lpl，分别注入气相色谱仪，照气相色谱法测定，记录60分钟的图谱，即得。以参照物的色谱峰保留时间和峰面积为1，计算相对保留时间和峰面积比值，即得鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱。3.2共有峰确定通过10批鸦胆子油乳注射液指纹图谱测定，比较其图谱，确定共有峰为4个，以参照物油酸的色谱峰的相对保留时间和相对峰面积为1，计算10批样品共有峰相对保留时间以及相对峰面积。结果见下表l、表2。表1:10批样品的相对保留时间统计<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>3.3共有特征峰的描述(一)特征峰共有4个，其中参照物峰面积最大，最高。(二)'l、2、4号峰的相对保留时间的平均值分别为:0.732、0.978、1.052。(三)1、2、4号峰的峰面积比值的平均值分别为17.2%、11.4%、32.6%。(四)用1,2,'3,4号四个共有峰计算相似度,相似度均在0.99以上，表明质量稳定，均一。3.4指纹图谱精密度试验按照指纹图谱精密度规定方法操作，以批号为20060101的鸦胆子油乳注射液为供试品，依法制备，连续进样6次，分别对共有峰时间以及峰面积比值进行统计，共有峰相对保留时间的RSD为0.62%,峰面积比值的RSD为0.75%。3.5指纹图谱稳定性试验按照指纹图谱稳定性测定方法操作，以批号20060101的鸦胆子油乳注射液为供试品，依法制备，于不同时间(0、2、4、8、16、24h)检测，分别对共有峰时间以及峰面积比值进行统计，共有峰相对保留时间的RSD为0.59W，峰面积比值的RSD为0.699L3.5指纹图谱重现性试验按照指纹图谱重现性测定方法操作，以批号20060101的鸦胆子油乳注射液为供试品，依法制备6份，分别对共有峰时间以及峰面积比值进行统计，共有峰相对保留时间的RSD为0.68%,峰面积比值的RSD为0.76%。以上试验结果表明，应用此方法对鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱进行测定方法可靠，能比较全面地反映本品中的化学信息，确保了产品质量。实施例2:鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱的建立(批号20060611)步骤同实施例1中的3.1，所不同的是色谱条件中，色谱柱为DB-FFAP毛细管色谱柱(30mX0.32咖X0.25Mni)(聚乙二醇-20M-2-2硝基对苯二甲酸)实施例3:鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱的建立(批号20060611)步骤同实施例1中的3.1，所不同的是供试品溶液的制备中，在25ml具塞试管中，加入的溶剂为体积百分比为95%的乙醇水溶液，色谱柱为DEGA(30mX0.25mmX0.25Mm)(己二酸二乙二醇丁二酸聚酯)，'载气为氦气。实施例4:鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱的建立(批号20060611)步骤岡实施例1中的3.1，所不同的是供试品溶液的制备中，在25ml具塞试管中，加入的溶剂为无水乙醇，色谱柱为Silar10C(30mX0.25mmX0.25Mm)(100%氰丙基聚硅氧烷)，载气为氢气。实施例5:鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱的建立(批号20060611)步骤同实施例1中的3.1,所不同的是供试品溶液的制备中，萃取液为乙酸乙酯。实施例6:鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱的建立(批号20060611)步骤同实施例1中的3.1，所不同的是供试品溶液的制备和参照物溶液的制备在加入体积百分浓度为2%的硫酸甲醇溶液5ml，混匀后，水浴的温度为6(TC，反应60分钟。实施例7:鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱的建立(批号20060611)步骤rt实施例1中的3.1，所不同的是供试品溶液的制备和参照物溶液的制备在加入体积百分浓度为2%的硫酸甲醇溶液5ml，混匀后，水浴的温度为65'C,反应30分钟。实施例8:鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱的建立(批号20060611)步骤同实施例1中的3.1，所不同的是供试品溶液的制备和参照物溶液的制备在分液漏斗中加入的溶剂为正庚烷。实施例9:鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱的建立(批号20060611)步骤同实施例1中的3.1，所不同的是供试品溶液的制备和参照物溶液的制备在分液漏斗中加入的溶剂为环己垸。实施例2--实施例9的相对时间和相对峰面积结果见表3、表4。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>实施例10:鸦胆子油乳注射液甘油三酯类成分标准指纹图谱的建立1.仪器与试药1.1仪器岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪；迪马SEDEX75蒸发光散射检测器；浙江大学N2000色谱工作站。1.2试药三油酸甘油酯对照品由SIGMA公司提供，鸦胆子油乳注射液由浙江九旭药业有限公司生产，批号为20060601、200^)602、20060603、20060609、20060610、20060611、20060612、20060613、20060614、20060615。甲醇、二氯甲烷均为分析纯；冰乙酸为分析纯、水为注射用水。2.方法与结果2.1色谱条件色谱柱岛津VP-ODS柱(150LX4.6鹏,5rtn);流动相为甲醇-0.2%(V/V)冰醋酸二氯甲烷溶液，程序梯度洗脱0至6分钟，甲醇的比例从70%降为55%，保持24分钟,30至35分钟，甲醇的比例从55%升为70%保持5分种，以迪马SEDEX75型蒸发光散射检测器检测，其漂移管温度为4(TC，载气压力为2.0Bar，柱温为25'C。理论板数按三油酸甘油酯峰计算应不低于5000。3.指纹图谱确定3.1指纹图谱制备甘油三酯类成分标准指纹图谱建立，方法如下(a)供试品溶液的制备取鸦胆子油乳注射液，精密称定0.50g,置25ml量瓶中，加体积比为50:50的甲醇-二氯甲垸溶液稀释至刻度，摇匀，滤液作为供试品溶液。(b)参照物溶液的制备取三油酸甘油酯，加体积比为50:50的甲醇-二氯甲垸溶液制成每lml中含0.5mg三油酸甘油酯的溶液为参照物溶液；分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各lOnl,注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，记录60分钟的色谱图，即得。以三油酸甘油酯的色谱峰的相对保留时间和峰面积为1计算相对保留时间和峰面积比值。3.2共有峰确定通过十批鸦胆子油乳注射液指纹图谱测定，比较其图谱，确定共有峰有8个，其中，7和8号峰为辅料磷脂的峰，以最高峰三油酸甘油酯为参照物峰，计算除7,8号峰以外的6个共有峰。十批样品共有峰相对保留时间以及峰面积比值统计结果见表5、表6。表5:十批样品的相对保留时间统计<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表6:十批样品峰面积比值统计(注除参照物峰外，3号峰的峰面积占总峰面积的百分比大于10%,其他均小于10%，故峰面积比值不做要求，针对3号峰以参照物峰的峰面积为1，统计十批样品的峰面积比值)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>3.3^特征峰的描述(一)共有峰共有8个，其中特征峰6个，以三油酸甘油酯峰面积最大，峰高最高。(二)l、2、3、5、6号峰的相对保留时间的平均值分别为:0.199、0.865、0.933、1.077、1.153。(三)3号峰的峰面积比值的平均值为51.9%。(四)按8个共有峰计算相似度，十批均在0.99以上，表明质量稳定、均一。3.4指纹图谱精密度试验按照指纹图谱精密度规定方法操作，以批号为20060101的鸦胆子油乳注射液为供试品，依法制备，连续进样6汝，分别对共有峰时间以及峰面积比值进行统计，共有峰相对保留时间的RSD为0.68M，峰面积比值的RSD为0.79%。3.5指纹图谱稳定性试验按照指纹图谱稳定性测定方法操作，以批号为20060101的鸦胆子油乳li射液为供试品，考察24小时溶液稳定性，分别对共有峰时间以及峰面积比值进行统计，共有峰相对保留时间的RSD为0.81%，峰面积比值的RSD为0.89%。3.6指纹图谱重现性试验按照指纹图谱重现性测定方法操作，以批号20060101的鸦胆子油乳注射液为供试品，依法制备6份，分别对共有峰时间以及峰面积比值进行统计，以上试验结果表明，应用此方法对鸦胆子油乳注射液甘油三酯类指纹图谱进行测定，方法的精密度、重现性好；供试品的稳定性好，能比较全面与系统地反映本品中的化学信息，确保了产品质量。实施例11:鸦胆子油乳注射液甘油三酯类成分标准指纹图谱的建立(批号20060611)步骤同实施例10，所不同的是在3.1中供试品溶液及参照物溶液的制备中甲醇-二氯甲烷溶液的体积比为40:60。实施例12:鸦胆子油乳注射液甘油三酯类成分标准指纹图谱的建立(批号20060611)步骤同实施例10,所不同的是在3.1中供试品溶液及参照物溶液的制备中甲醇-二氯甲烷溶液的体积比为90:10。.实施例13:鸦胆子油乳注射液甘油三酯类成分标准指纹图谱的建立(批号20060611)步骤同实施例IO，所不同的是在2.1色谱条件中，程序梯度洗脱为0至6分钟，甲醇的比例从80%降为60%,保持9分钟，15至30分沐甲醇的比例从60%升为80%，保持5分种。实施例11-实施例13的相对时间和相对峰面积结果见表7、表8。表7:<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表8:<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>权利要求1.一种鸦胆子油乳注射液的鉴别方法，包括如下步骤第一步，先建立脂肪酸类成分标准指纹图谱，方法如下(a)供试品溶液的制备精密量取鸦胆子油乳注射液，加入甲醇或体积百分比浓度为95％的乙醇水溶液或无水乙醇，涡旋混合使破乳，加入乙醚或乙酸乙酯萃取，振摇，静置分层后，取上层液滤过，取滤液于量瓶中，在水浴中挥干乙醚或乙酸乙酯，加入硫酸甲醇溶液，混匀，水浴，振摇，冷却后转移至分液漏斗中，精密加入正己烷或正庚烷或环己烷，洗涤量瓶一并转移至分液漏斗中，振摇提取，静置分层后，弃去下层溶液，上层用蒸馏水洗涤，洗涤至pH为6-7，用适量无水硫酸钠脱水后，为供试品溶液；(b)参照物溶液的制备精密量取对照品油酸，加入硫酸甲醇溶液，混匀，水浴，振摇，冷却后转移至分液漏斗中，精密加入正己烷或正庚烷或环己烷，洗涤量瓶一并转移至分液漏斗中，振摇提取，静置分层后，弃去下层溶液，上层用蒸馏水洗涤，洗涤至pH为6-7，用适量无水硫酸钠脱水后，精密量取1ml，置5ml量瓶中，用正己烷或正庚烷或环己烷稀释至刻度为参照物溶液；(c)色谱条件键合/交联聚乙二醇毛细管柱，进样口温度为250℃；氢火焰离子化检测器，检测器温度为250℃；载气流速为1.5ml/min，分流比50∶1；程序升温初始160℃保持5分钟，再以每分钟4℃升至220℃，保持40分钟；(d)测定分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，注入气相色谱仪，用气相色谱法测定，制定鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分指纹图谱；所述鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分指纹图谱中，有四个共有峰，以参照物油酸的色谱峰的相对保留时间和相对峰面积为1，计算其它色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，上述四个共有峰分别是1号峰平均相对保留时间RRT为0.70，相对峰面积为12％～20％，2号峰平均相对保留时间RRT为0.97，相对峰面积为7％～13％，3号峰平均相对保留时间RRT为1.0，相对峰面积为100％，4号峰平均相对保留时间RRT为1.06，相对峰面积为29％～43％，所述1号峰、2号峰、4号峰的相对保留时间的差值均小于10％，所述四个共有峰的相似度按峰面积计算均大于0.99，非共有峰总面积不大于总峰面积的10％；第二步，以上述相同的方法测定待测鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分样品指纹图谱；第三步，将待测鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分样品指纹图谱与标准的鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分指纹图谱对比，鉴别鸦胆子油乳注射液的质量。2.根据权利要求1所述的一种鸦胆子油乳注射液的鉴别方法，其特征是所述供试品溶液的制备为精密量取鸦胆子油乳注射液0.5ml，置25ml具塞试管中，加入甲醇0.5ml或体积百分比浓度为95%的乙醇水溶液0.5ml或无水乙醇0.5ml，涡旋混合1分钟使破乳，加入乙醚20ml或乙酸乙酯20ral萃取，振摇，静置分层后，取上层液滤过，取滤液于量瓶中，在水浴中挥干乙醚或乙酸乙酯，加入体积百分浓度为2劣的硫酸甲醇溶液5nil，混匀，6065。C水浴3060分钟，振摇，冷却后转移至分液漏斗中，精密加入正己烷10ml或正庚烷10ml或环己垸10ml,洗涤量瓶一并转移至分液漏斗中，振摇提取l分钟，静置分层后，弃去下层溶液，上层用蒸馏水洗涤3次，每次10ml，洗涤至pH为67，用适量无水硫酸钠脱水后，为供试品溶液。3.根据权利要求1所述的一种鸦胆子油乳注射液的鉴别方法，其特征是所述参照物溶液的制备为精密量取对照品油酸50mg置25ml的量瓶中，加入体积百分浓度为2%的硫酸甲醇溶液5ml,混匀，6065"C水浴3060分钟，振摇，冷却后转移至分液漏斗中，精密加入正己垸10ml或正庚垸10ml或环己烷10ml，洗涤量瓶一并转移至分液漏斗中，振摇提取1分钟，静置分层后，弃去下层溶液，上层用蒸馏水洗涤3次，每次10ml，洗涤至pH为67，用适量无水硫酸钠脱水后，精密量取lml，置5ml量瓶中，用正己烷或正庚烷或环己烷稀释至刻度为参照物溶液。4.根据权利要求1所述的一种鸦胆子油乳注射液的鉴别方法，其特征是所述键合/交联聚乙二醇毛细管柱的固定液为聚乙二醇-20M或聚乙二醇-20M-2-2硝基对苯二甲酸或己二酸二乙二醇丁二酸聚酯或100%氰丙基聚硅氧垸，所述载气为高纯氮气或氦气或氨气。5.—种鸦胆子油乳注射液的鉴别方法，包括如下步骤第一歩，先建立甘油三酯类成分标准指纹图谱，方法如下(a)供试品溶液的制备取鸦胆子油乳注射液，精密称定，置量瓶中，加体积比为4090:1060的甲醇-二氯甲垸溶液稀释至刻度，摇匀，滤液作为供试品溶液；(b)参照物溶液的制备取三油酸甘油酯，加体积比为4090:1060的甲醇-二氯甲烷溶液制成每lml中含0.5mg三油酸甘油酯的溶液为参照物溶液；(C)色谱条件以十八烷基键合硅胶为填料；流动相为甲醇-体积百分比为0.2%冰醋酸二氯甲烷溶液，程序梯度洗脱:0至6分钟，甲醇的比例从70%降为55%,保持24分沐30至35分钟，甲醇的比例从55%升为70%,保持5分钟或者是0至6分钟，甲醇的比例从80%降为60%,保持9分钟，15至30分钟，甲醇的比例从60%升为80%，保持5分钟；以蒸发光散射检测器检测，其漂移管温度为40。C，载气压力为2.0Bar，柱温为25'C;(d)测定分别精密吸取参照物溶液及供试品溶液，用高效液相色谱仪测定，制定鸦胆子油乳注射液甘油三酯类成分标准指纹图谱；所述鸦胆子油乳注射液甘油三酯类成分标准指纹图谱中共有峰有8个，其中7,8号峰为辅料磷脂的峰,而主成份特征峰为6个，以参照物峰4号峰的相对保留时间和相对峰面积为1计算其它色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，上述指纹峰分别是1号峰平均相对保留时间RRT为0.806，2号峰平均相对保留时间RRT为0.870，3号峰平均相对保留时间RRT为0.934，相对峰面积为40%60%，4号峰平均相对保留时间RRT为1.00,5号峰平均相对保留时间RRT为1.086，6号峰平均相对保留时间RRT为1.179，相对保留时间的差值小于10%，'非共有峰总面积不大于总峰面积的10%;以8个共有峰的峰面积计算相似度不低于0.99;第二步以上述相同的方法测定待测鸦胆子油乳注射液样品指纹图谱；第三步将待测鸦胆子油乳注射液甘油三酯类成分样品指纹图谱与标准的鸦胆子油乳注射液甘油三酯类成分指纹图谱对比，鉴别鸦胆子油乳注射液的质量。6.根据权利要求5所述的一种鸦胆子油乳注射液的鉴别方法，其特征是所述供试品溶液的制备为精密称取鸦胆子油乳注射液0.50g,置25ml量瓶中，加体积比为50:50的甲醇-二氯甲烷溶液稀释至刻度，摇匀，滤液作为供试品溶液。7.根据权利要求5所述的一种鸦胆子油乳注射液的鉴别方法，其特征是所述参照物溶液的制备为取三油酸甘油酯，加体积比为50:50的甲醇-二氯甲垸溶液制成每lml中含0.5mg三油酸甘油酯的溶液为参照物溶液。8.根据权利要求5所述的一种鸦胆子油乳注射液的鉴别方法，其特征是所述蒸发光散射检测器的型号为迪马SEDEX75。全文摘要本发明公开了一种鸦胆子油乳注射液的鉴别方法，步骤为第一步，先建立脂肪酸类成分标准指纹图谱第二步，测定待测鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分样品指纹图谱；第三步，将待测鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分样品指纹图谱与标准的鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分指纹图谱对比，鉴别鸦胆子油乳注射液的质量，本发明是结合大量生产批次统计情况和试验研究工作，建立了鸦胆子油乳注射液脂肪酸类成分标准指纹图谱和鸦胆子油乳注射液甘油三酯类标准指纹图谱，能较好地保证鸦胆子油乳注射液的有效性和均一性，为完整、准确评价鸦胆子油乳注射液的质量提供了新的方法和手段。文档编号G01N30/86GK101131376SQ20061001542公开日2008年2月27日申请日期2006年8月22日优先权日2006年8月22日发明者婕仲,宏李,毛黎静申请人:浙江九旭药业有限公司